薄层色谱-自显影技术分离检测石榴皮清除自由基活性成分

目的:采用薄层色谱分离和生物活性检测相结合的薄层色谱-自显影技术,对石榴皮提取物清除自由基活性成分进行研究。方法:以三元溶剂二甲苯∶乙酸乙酯∶乙酸=3∶5.5∶1.5为展开剂对石榴皮提取物进行展开分离,以二苯代苦味肼自由基(DPPH)为显色剂,喷洒于经展开后的TLC进行显色拍照。结果:石榴皮提取物在传统显色剂下分离到6个化合物,利用DPPH自由基显色,表明其中4个化合物具有较强的清除作用,且活性成分主要为鞣质类化合物。结论:薄层色谱-自显影技术是一种快速分离鉴定天然产物中清除自由基活性成分的实验方法。

基于薄层色谱-生物自显影-MSn法表征枸骨叶中的脂肪酶抑制活性成分

为寻找枸骨叶的降脂减肥活性成分,本文采用薄层色谱-生物自显影法,筛选其具有脂肪酶抑制活性的成分,再通过原位TLC-EFISI-MSn技术,对具有脂肪酶抑制活性的成分进行快速结构解析。通过对10个具有脂肪酶抑制活性的薄层色谱-生物自显影斑点进行快速解析,初步鉴定出15个可能的成分,包括9个熊果烷型三萜、1个齐墩果烷型三萜,以及5个18,19-裂环型三萜,其中有7个活性斑点所包含的12个化合物通过对照品比对得到验证。该方法能够快速从枸骨叶中筛选、表征出具有脂肪酶抑制活性成分,从而为确定枸骨叶活性成分的筛选和鉴定提供依据。

应用薄层色谱-生物自显影技术评价乌药等三种中药的抗氧化活性

目的采用薄层色谱-生物自显影法研究与评价中药的抗氧化活性。方法用1，1-二苯基-2-苦肼基自由基乙醇溶液（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）和传统显色剂显色，拍摄图像，采用模拟扫描，获得各抗氧化成分的峰面积。结果以总峰面积大小为指标判定不同来源中药的抗氧化能力，结果表明浙江天台产乌药（94340）、四川凉山产厚朴（175647）和收集于上海的紫苏子（153206）清除DPPH自由基能力最强。以化学对照品峰面积与总峰面积的百分比来判定化合物抗氧化活性，表明去甲异波尔定（43．8％～66．0％）、厚朴酚与和厚朴酚（73．2％～93．2％）、木犀草素与芹菜素及成分“U”（47．6％～68．0％）分别是乌药、厚朴和紫苏子的主要抗氧化活性成分。结论本方法在中药抗氧化活性成分筛选及质量评价方面具有操作简便、选择性高、重现性好等优点。

薄层色谱-生物自显影观察新疆两色金鸡菊中清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分

目的:采用薄层色谱-生物自显影技术(TLC-bioautography),观察新疆两色金鸡菊提取物中具有清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分.方法:以1,1'-二苯基苦基苯肼(DPPH)和2,2'-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为显色剂,观察新疆两色金鸡菊水提物和醇提物中清除自由基的有效成分;以对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(p-Nitrophanyl-β-D-Gluopyranoside,p NPG)为底物,观察水提物和醇提物中具有抑制α-葡萄糖苷酶(来源于啤酒酵母菌)的活性成分.采用混合标准物质TLC色谱进行活性成分定性分析.结果:新疆两色金鸡菊水提物和醇提物中均含有马里苷、奥卡宁、栎草亭-7-O-β-D-葡萄糖苷、黄酮奥卡宁(flavanokanin)、绿原酸、芦丁和槲皮素等化学成分.经薄层色谱-生物自显影实验,两色金鸡菊水提物和醇提物中的黄酮奥卡宁、马里苷、芦丁和绿原酸均有较强清除DPPH和ABTS自由基的能力;水提物和醇提物中黄酮奥卡宁、奥卡宁和马里苷能有效抑制α-葡萄糖苷酶的活性.结论:经薄层色谱-生物自显影技术可快速发现两色金鸡菊中具有清除自由基和抑制α-葡萄糖苷酶活性成分,为进一步研究提供了指引.

薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选中的应用

薄层色谱-生物自显影技术(TLC-bioautography)将薄层色谱分离和生物活性测定相结合,是一种活性指导下的快速靶向追踪分离、筛选活性成分的方法。此法操作简单、耗时短、灵敏度和专属性高,常应用于抗细菌、抗真菌、抗氧化,以及对乙酰胆碱酯酶抑制剂、葡萄糖苷酶抑制剂等活性天然产物的筛选。笔者对薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选方面的应用进行综述。

桑枝中槲皮素和绿原酸的薄层色谱鉴别及抗氧化活性筛选

目的建立桑枝中槲皮素和绿原酸的薄层色谱(TLC)鉴别方法,并筛选其抗氧化活性。方法采用甲醇为溶剂,超声提取桑枝中的槲皮素和绿原酸,实验了用不同展开系统、显色剂、温度、检视方法及不同薄层板对桑枝中槲皮素及绿原酸薄层鉴别的影响,选择最佳薄层鉴别条件。以1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)显色,筛选其抗氧化活性。结果以乙酸乙酯∶水∶甲酸∶甲苯(17∶2∶2∶0.8)为展开剂在硅胶G板上展开,1%Al Cl3为显色剂,366 nm下检视,桑枝中的槲皮素和绿原酸出现明显蓝色及蓝绿色斑点,薄层-生物自显影实验发现槲皮素和绿原酸的薄层板在紫色背景下呈现淡黄色斑点,证明二者具有抗氧化活性。结论本法操作简便,结果准确可靠,可用于桑枝的质量控制。

TLC-生物自显影技术在中药化学实验中的应用

通过引入"薄层色谱-生物自显影"新技术,对中药化学实验教学进行改革与探索。提高实验操作技能和实验教学质量,加深学生对理论知识的理解,激发学生的学习兴趣,取得了可喜成果和宝贵经验。

藏药三果汤散抗氧化有效成分的薄层色谱-生物自显影及HPLC指纹图谱

目的:初步建立藏药三果汤散的HPLC指纹图谱,研究藏药三果汤散的抗氧化活性,初步筛选出三果汤散中抗氧化有效成分。方法:采用薄层色谱-生物自显影技术和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)分光光度法对不同来源的三果汤散、单味药对照药材及其中单体成分没食子酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、柯里拉京进行抗氧化作用初步测定,并采用高效液相色谱法初步建立了三果汤散的指纹图谱。结果:不同来源的三果汤散的抗氧化作用差异不大,所含化学成分以没食子酸抗氧化作用最强,揭示没食子酸可能是三果汤散抗氧化的主要有效成分之一。结论:该方法准确、简便可行,为进一步探索三果汤散抗氧化有效成分提供了科学依据。

薄层色谱-生物自显影技术测定绵茵陈提取液中绿原酸的含量并评价其抗氧化活性

目的建立绵茵陈中绿原酸的含量测定方法并采用薄层色谱-生物自显影法研究绵茵陈提取液的抗氧化活性。方法薄层扫描法测定绵茵陈提取液中绿原酸的含量,随后用二苯代苦味肼基自由基溶液显色,双波长扫描,获得其抗氧化成分的峰面积。结果常规薄层扫描与生物自显影扫描测定得到的绿原酸含量具有一致性,由生物自显影扫描法测得色谱峰总积分值明显大于绿原酸单峰面积,表明绵茵陈中除了绿原酸外,还存在其它抗氧化能力较强的活性成分。结论以DPPH作显色剂,双波长扫描,可利用TLC-生物自显影技术对天然提取物中具有自由基清除及抗氧化活性的活性成分进行快速筛选与评价。

薄层色谱-生物自显影联用检测残留抗生素的研究

建立利用薄层色谱-生物自显影联用原位技术检测农副产品中的抗生素残留方法。采用饱和的EDTA-2Na溶液活化的硅胶薄层层析板,展开溶剂系统为乙酸乙酯-氯仿-甲醇-氨水(40∶40∶20∶5),于紫外灯下记录薄层色谱图,以发光细菌费氏弧菌(V.fi scheri)为检定菌,薄层板表面均匀涂布处于最强发光周期的费氏弧菌(V.fi scheri)发酵液,放入生物发光检测仪中,拍照记录。结果表明,100份样品中的72份被检出有残留抗菌物质存在,并对残留抗生素进行初步推定。该方法操作简便、快捷、结果准确,可进一步研究用于抗生素残留定性与定量检测。

独活抑制乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性研究

目的研究独活乙醇提取物及不同萃取部位抑制乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶的活性。方法应用薄层色谱(TLC)-生物自显影技术和微孔高通量筛选的方法。结果在TLC-生物自显影抑酶实验中独活乙醇提取物,石油醚和氯仿萃取部位呈现阳性结果;微孔高通量筛选实验中独活乙醇提取物、石油醚及氯仿萃取部位对乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BuChE)均具有抑制作用,浓度为1mg.mL-1时,3个萃取部位对AChE的抑制率分别为(16.88±0.42)%、(11.82±0.55)%、(44.33±3.21)%,对BuChE的抑制率分别为(13.97±1.17)%、(14.64±1.10)%、(18.63±1.24)%。结论独活乙醇提取物、石油醚萃取部位及氯仿萃取部位对2种胆碱酯酶均具有抑制作用,其中氯仿萃取部位对胆碱酯酶抑制率最高,为主要的抑酶活性部位。

TLC-生物自显影法导向分离菝葜中抗氧化活性成分

目的:采用薄层色谱-生物自显影法导向分离菝葜中的抗氧化活性成分,为建立"谱-效"相关质控标准奠定基础。方法:用1,1-二苯基-2-苦肼基自由基乙醇溶液(DPPH)和传统显色剂显色,检识主要抗氧化活性成分,选择性进行导向分离鉴定。结果:经反复柱层析,从菝葜的丙酮提取物中分离鉴定了白黎芦醇(Ⅰ)、落新妇苷(Ⅱ)、黄杞苷(Ⅲ)和Helicioside A(Ⅳ)4个主要抗氧化活性成分。结论:该方法用于菝葜主要抗氧化活性成分的导向分离具有操作简便的优点,分离得到1个二苯乙烯化合物(Ⅰ)和3个二氢黄酮醇苷类化合物(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ),其中化合物(Ⅳ)为首次从该属植物中获得。

中药检验新技术在《中华人民共和国药典》的应用

为了促进现代仪器分析技术在中药检验中的应用,进一步提高和完善中药质量标准,综述2010年版《中华人民共和国药典》一部新增检验技术:DNA分子鉴定、中药指纹图谱、液相色谱-质谱联用技术、薄层色谱-生物自显影的应用概况。

苦参生物碱和黄酮体外抑菌活性比较

目的探讨苦参生物碱、黄酮及其单体（苦参碱、氧化苦参碱、苦参酮、槐属二氢黄酮G、5-methylKushenol C、三叶豆紫檀苷和高丽槐素）对不同菌株的体外抑菌作用。方法采用96孔板微量稀释法测定药物的最小抑菌浓度（MIC）;薄层色谱-直接生物自显影法测定药物的抑菌检测限（LOD）;纸片扩散法测定苦参黄酮单体的抑菌圈直径大小。结果苦参总生物碱、总黄酮对金黄色葡萄球菌的MIC值范围分别为4.95-31.64 mg/mL和7.50-31.64 mg/mL,对大肠埃希菌的MIC值范围分别为1-4 mg/mL和1-4 mg/mL。苦参生物碱单体对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的LOD值均大于10μg;黄酮单体对金黄色葡萄球菌的LOD值为1.3-2.5μg,对大肠埃希菌的LOD值小于1.3μg。各黄酮单体中,槐属二氢黄酮G抑菌作用最强,其次是苦参酮和高丽槐素,三叶豆紫檀苷无抑制作用。结论对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌,苦参总黄酮及单体的抑菌效果均优于苦参总生物碱及其单体。

石菖蒲中乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选

目的从石菖蒲中筛选天然乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂。方法采用高效薄层色谱(HPTLC)-生物自显影,筛选石菖蒲提取物和固相萃取小柱分段部位的乙酰胆碱酯酶抑制斑点并定位,采用薄层色谱-质谱(TLC-MS)分析薄层板上的目标物并获取分子量和碎片信息,结合文献数据鉴定化合物,并采用分子对接技术测算化合物与AChE蛋白的亲和力以及结合方式,验证其活性。结果从石菖蒲提取物中共发现5个活性斑点,薄层色谱-质谱鉴定出4个斑点可能为β-细辛醚(与α-细辛醚斑点重合)、亚油酸、菖蒲螺酮烯和桔利酮,其中β-细辛醚、α-细辛醚和亚油酸与对照品对照得到验证。分子对接结果显示,5个化合物与AChE分子具有较好的结合能力,可能是通过TRP86、TRP337和PHE338等氨基酸与乙酰胆碱酯酶产生氢键作用或疏水作用。结论菖蒲螺酮烯、桔利酮、β-细辛醚、α-细辛醚和亚油酸为石菖蒲中主要乙酰胆碱酯酶抑制活性成分。

厚朴叶不同极性溶剂萃取物总酚含量及体外抗氧化活性研究

为研究厚朴叶抗氧化活性成分,测定厚朴叶90%乙醇提取物及其石油醚、正丁醇、乙酸乙酯、甲醇萃取物和萃余相浓缩物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulonic acid),ABTS]自由基清除活性和总还原力,并与抗氧化剂2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol,BHT)、抗环血酸(VC)的抗氧化活性比较;同时测定厚朴叶乙醇提取物和不同极性部位中的总酚含量。结果发现:乙酸乙酯萃取物总酚含量最高,为(178.56±11.32)mg GAE/g,其含量高于正丁醇萃取物和90%乙醇提取物。厚朴叶乙醇提取物和不同极性部位均具有一定抗氧化活性,其中乙酸乙酯萃取物的抗氧化活性最强,DPPH自由基清除活性接近VC,显著高于BHT,其EC50为(86.27±0.02)μg/mL;对ABTS+自由基的清除活性接近VC和BHT;对Fe3+还原力较BHT低,但显著高于正丁醇萃取物。厚朴叶乙醇提取物和不同极性部位的抗氧化性与总酚含量呈显著相关性。采用薄层色谱-生物自显影法定性检测抗氧化活性,其结果与3种抗氧化测定方法的结果一致。综上,厚朴叶乙酸乙酯萃取物具有良好的抗氧化活性,可用于进一步分离抗氧化活性物质,具有发展为天然抗氧化剂的潜力。

藏药毛诃子的质量标准提高研究

目的通过对毛诃子药材进行薄层鉴别、定量测定等研究,提高其质量控制方法和标准。方法以没食子酸、毛诃子对照药材为对照,新增薄层色谱-生物自显影鉴别方法;建立HPLC法测定没食子酸含量,采用Phenomenex luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(5∶95);流速1.0 m L·min-1;柱温30℃;检测波长271 nm;进样量10μL。结果建立了毛诃子药材的薄层色谱-生物自显影鉴别方法,斑点清晰,分离度好,不仅能对毛诃子进行定性鉴别,还能体现其抗氧化活性,具有较好的专属性;10批毛诃子药材含量测定结果表明,没食子酸在9.952~79.62μg·m L-1与峰面积呈良好线性关系,线性回归方程为Y=34.659X-7.7319(r=0.9996),平均回收率为97.0%(RSD=2.0%)。结论新增的方法简单易行,专属性强,重复性好,可用于毛诃子的质量控制。

藏药诃子的质量标准提高研究

目的:提高诃子的质量标准。方法:以没食子酸、诃子对照药材为对照,新增薄层色谱-生物自显影鉴别;建立HPLC测定没食子酸含量的方法,采用Phenomenex luna C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(5:95);流速1.0 m L/min;柱温30℃;检测波长271 nm;进样量10μL。结果:薄层色谱-生物自显影法鉴别斑点清晰,分离度好,不仅能对诃子进行定性鉴别,还能体现其抗氧化活性;在以上HPLC条件下,没食子酸在10.72~85.76μg呈良好线性关系,线性回归方程为Y=31.248X+9.037(r=0.9997),平均回收率96.1%(RSD 2.54)。结论:新增的方法简单易行,专属性强,重复性好,可用于诃子的质量控制。

紫苏梗质量标准研究

目的制定紫苏梗药材及饮片质量标准。方法采用了生药学研究,薄层鉴别法、HPLC、水分测定法及灰分测定法。薄层鉴别选用生物显色剂0.8 mg.mL-1的2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(DPPH)乙醇溶液显色。结果根据10个不同批号的紫苏梗药材和5个不同批号的紫苏梗饮片测定结果,确定迷迭香酸含量不低于0.10%(药材)和0.07%(饮片),含水分不高于9.0%(药材)和8.0%(饮片),总灰分不高于5.0%(药材)和4.0%(饮片),酸不溶性灰分不高于1.2%(药材)和0.6%(饮片)。薄层色谱-生物自显影色谱图中迷迭香酸斑点清晰易辨。结论通过研究制定了紫苏梗的质量控制标准。

维药骆驼蓬子药材质量标准研究

摘要：目的建立骆驼蓬子药材的质量标准。方法参照2010年版《中国药典》附录相关方法，对骆驼蓬子水分、总灰分、酸不溶性灰分、50％乙醇浸出物和重金属进行检测。采用硅胶HSGF。薄层板，以乙酸乙酯-甲醇-氨水（10：1．5：0．5）为展开剂，分别采用置紫外光（254、365nm）下检视、碘化铋钾显色及乙酰胆碱酯酶生物自显影技术对骆驼蓬子进行鉴别。采用C18色谱柱，以乙腈一醋酸铵缓冲盐（19：81）为流动相，检测波长为330nm，建立骆驼蓬子中去氢骆驼蓬碱（HAR）和骆驼蓬碱（HAL）的定量分析方法；以相同流动相梯度洗脱，检测波长为280nm，流速为0．7mL·min-1，建立骆驼蓬子药材特征图谱。结果采用紫外光（254、365nm）下检视、碘化铋钾显色及生物自显影技术联合分析可鉴别骆驼蓬子中的活性生物碱类成分。骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱分别在1．97—198．68和1．70～345．30I,zg·mL“内呈良好的线性关系，平均回收率分别为99．69％（RSD为1．89％）和100．66％（RSD为1．78％）。11批骆驼蓬子药材中去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱平均含量分别为3．76％和3．23％。在特征图谱中确定了4个峰为特征峰。结论药材中水分、总灰分、酸不溶性灰分、体积分数50％乙醇浸出物分别不得过9．0％、8．0％、1．0％和22．0％。重金属铅、镉、砷、汞、铜分别不得过5×10^-6、3×10^-6、2×10^-6、2×10^-6和20×10^-6。骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的含量总和限度不得低于5．5％。以骆驼蓬碱为参照物峰，特征图谱中4个特征峰的相对保留时间应在各规定值的±5％之内。建立的定性和定量方法可用于骆驼蓬子药材的质量控制。