高效薄层色谱、薄层质谱和HPLC指纹图谱联用技术鉴定杜仲不同部位的化学成分差异

目的建立杜仲Eucommia ulmoides不同部位的高效薄层色谱(high performance thin layer chromatography,HPTLC)、高效薄层质谱鉴别方法(TLC/MS)和高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,比较杜仲皮、叶、雄花、种子的差异,寻找差异性成分,并互相验证,用于杜仲的质量控制。方法通过优化供试品制备、展开剂和显色剂等条件,建立杜仲皮的HPTLC,并将该方法应用于杜仲皮、叶、雄花、种子的区分,寻找差异性斑点;利用QTOF/MS对4个部位的HPTLC斑点进行鉴定,明确差异性成分;采用HPLC建立杜仲皮、叶、雄花、种子的指纹图谱,采集多批次数据,利用偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)筛选对4个部位区分贡献较大的差异性成分,与薄层色谱和薄层质谱鉴定结果互相验证。结果自建HPTLC鉴别方法优于各国药典,可清晰地实现4个部位的区分;利用QTOF/MS对主要斑点进行分析,共鉴定27个成分,其中10个成分通过对照品确认;基于HPLC的PLS-DA多元统计分析筛选出14个差异性成分(VIP>1)。松脂醇二葡萄糖苷在HPTLC、TLC/MS和HPLC检测技术下均鉴定为杜仲皮的特异性成分;ulmoidoside A、ulmoidoside B、ulmoidoside C、ulmoidoside D是种子中稳定的差异性标志物;对于叶和花的鉴别,3种鉴别方式所得到的差异性标志物差别较大,叶中共找到7个标志物,花中共找到9个标志物。结论建立的高效薄层色谱、薄层质谱和HPLC指纹图谱方法均可实现杜仲皮、叶、雄花、种子的区分,联用技术寻找到的差异性成分为杜仲及其中成药质量控制指标的选择奠定基础。

基于高效薄层色谱-电喷雾质谱联用技术建立苦参和山豆根专属性特征图谱

苦参为苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根,山豆根为越南槐Sophora tonkinensis Gagnep.的干燥根和根茎,两者均来自豆科槐属,成分和功效相似而有差异,现有标准仅显示其生物碱类成分差异性难以体现,不利于两味药材的质量控制。本研究利用高效薄层色谱技术多维度多层次分析优势,对供试品制备方法和色谱参数进行优化,整体展现苦参和山豆根共有和差异性特征成分。利用薄层色谱-电喷雾质谱(HPTLC-ESI-MS)在线鉴定技术对特征条带中化学成分进行快速鉴定,并导向分离获得部分单体成分。结果从苦参与山豆根中共发现17个主要特征条带,除了3个已知成分,采用HPTLC-ESI-MS鉴定出另12个未知成分,包括1种生物碱和11种黄酮成分,后采用对照品对照或分离后经核磁共振波谱解析对鉴定结果进行了验证。最后采用优化后的色谱方法,为苦参和山豆根建立了同一的薄层色谱专属性鉴别方法。HPTLC-ESI-MS联用技术兼具薄层色谱简便、直观和整体性,能快速鉴定目标成分结构。建立的特征图谱直观反映药材整体特征和特异性,为其他同属、易混药材的分析鉴别提供了参考。

应用TLC-MS技术检测镇痛中药制剂中添加的3种化学药品

目的采用薄层色谱联合质谱(TLC-MS)技术检测中药制剂中含有的多种化学药品。方法采用薄层色谱法初筛,利用薄层制备色谱技术将可疑斑点分离后进行质谱检测,并与对照品的质谱图比较确认。结果在一种镇痛中药制剂中同时检测出双氯芬酸钠、曲马多和卡马西平3种化学药品。结论TLC-MS法可以快速、准确地检测出中药制剂中添加的化学药品。

夜交藤配方颗粒中掺入地西泮的检测方法

目的:建立中药配方颗粒夜交藤中添加化学药品的方法。方法:分别采用薄层色谱法、液相色谱法(HPLC-DAD)及薄层色谱联合质谱(TLC-MS)法对中药配方颗粒夜交藤颗粒中非法添加的化学药品进行检测。结果:薄层色谱联合质谱(TLC-MS)检测法可准确快速检出夜交藤配方颗粒添加地西泮成分。结论:方法简单、准确,可用于夜交藤配方颗粒添加地西泮的检出。

LC-MS/MS法测定富马酸替诺福韦酯中杂质9-丙烯基腺嘌呤的含量

目的建立测定富马酸替诺福韦酯中杂质9-丙烯基腺嘌呤含量的LC-MS/MS法。方法采用Thermo BDS(100 mm×4.6 mm,2.4μm)色谱柱,以甲醇-水(体积比为60∶40)为流动相,流速为0.3 m L·min^(-1)。选用ESI源以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应为m/z 176.2→m/z 136.3。结果 9-丙烯基腺嘌呤在0.20~20μg·L^(-1)内线性关系良好,定量限为0.20μg·L^(-1),日内、日间精密度(RSD)均小于11.4%,准确度(RE)在3.7%以内,平均加样回收率为103%(n=6)。结论应用此方法测定了3批原料药中杂质9-丙烯基腺嘌呤的含量,结果均满足世界卫生组织(WHO)对其限量(不超过5 mg·L^(-1))检查的要求。

石菖蒲中乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选

目的从石菖蒲中筛选天然乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂。方法采用高效薄层色谱(HPTLC)-生物自显影,筛选石菖蒲提取物和固相萃取小柱分段部位的乙酰胆碱酯酶抑制斑点并定位,采用薄层色谱-质谱(TLC-MS)分析薄层板上的目标物并获取分子量和碎片信息,结合文献数据鉴定化合物,并采用分子对接技术测算化合物与AChE蛋白的亲和力以及结合方式,验证其活性。结果从石菖蒲提取物中共发现5个活性斑点,薄层色谱-质谱鉴定出4个斑点可能为β-细辛醚(与α-细辛醚斑点重合)、亚油酸、菖蒲螺酮烯和桔利酮,其中β-细辛醚、α-细辛醚和亚油酸与对照品对照得到验证。分子对接结果显示,5个化合物与AChE分子具有较好的结合能力,可能是通过TRP86、TRP337和PHE338等氨基酸与乙酰胆碱酯酶产生氢键作用或疏水作用。结论菖蒲螺酮烯、桔利酮、β-细辛醚、α-细辛醚和亚油酸为石菖蒲中主要乙酰胆碱酯酶抑制活性成分。

基于TLC-EFISI-MS法的桑枝与桑叶薄层色谱鉴别研究

目的建立桑枝和桑叶的薄层色谱鉴别方法,为其质量控制提供依据。方法基于薄层色谱-静电场诱导喷雾-质谱(TLC-EFISI-MS)联用方法,确定鉴别桑枝和桑叶的特征成分,建立和优化其薄层色谱鉴别方法,并应用于不同批次桑枝和桑叶药材的薄层鉴别。结果通过TLC-EFISI-MS联用鉴定了桑皮苷A为桑枝的特征斑点、紫云英苷为桑叶的特征斑点,以桑皮苷A为指标成分建立了桑枝的特征性薄层鉴别方法,以紫云英苷为指标成分,对《中国药典》中桑叶的薄层鉴别方法进行了优化。对10个不同批次桑枝和桑叶药材进行了薄层鉴别,结果表明在与对照品色谱相应位置上,供试品溶液中均显示相同颜色的斑点且斑点颜色清晰,分离度好。结论通过TLC-EFISI-MS鉴定的桑枝中的桑皮苷A和桑叶中的紫云英苷可较好的区分桑枝和桑叶;建立的薄层鉴别方法操作简便、重复性好,可作为桑枝和桑叶的薄层鉴别方法,为其质量控制提供实验依据。

4种市售发酵虫草菌粉胶囊寡糖成分分析

目的:研究4种市售发酵虫草菌粉胶囊中的寡糖成分。方法:首先应用高效薄层色谱(HPTLC)对4种市售发酵虫草菌粉胶囊(百令胶囊、金水宝胶囊、宁心宝胶囊和心肝宝胶囊)寡糖成分进行初步分析,展开剂为正丁醇-异丙醇-乙酸-水(6∶11∶3∶4),显色剂为苯胺-二苯胺-磷酸;再采用HPTLC-MS确定寡糖聚合度,质谱选用正离子模式,质量范围m/z 100~1 500;最后结合淀粉酶酶解-HPTLC分析确定主要糖苷键类型。结果:4种市售发酵虫草菌粉胶囊中,除宁心宝胶囊外,其他3种发酵虫草菌粉胶囊均基本不含寡糖类成分;HPTLC-MS结果显示,宁心宝胶囊样品HPTLC中Rf=0.53、0.48、0.40、0.32、0.27、0.22和0.18处的条带相对分子质量分别约为342、342、504、666、828、991、1 153,分别对应二糖及二糖至七糖;淀粉酶酶解结果提示:宁心宝胶囊中寡糖主要是α-1,4-葡聚寡糖。结论:4种市售发酵虫草菌粉胶囊中,仅宁心宝胶囊含相对多的寡糖类成分,且主要为α-1,4-葡聚寡糖,其产生可能与菌种和/或生产工艺有关。