基于NLRP3/Caspase-1通路探讨薏苡仁多糖对溃疡性结肠炎体外炎症模型的干预作用及机制

目的:从炎症理论角度出发,探讨薏苡仁多糖(Coixan)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)体外炎症模型的干预作用及其机制。方法:体外培养NCM460细胞,采用不同剂量(0、2.5、5、10、20和40μg/mL)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导NCM460细胞,筛选出最佳诱导剂量(20μg/mL);用不同浓度(0、5、10、20、40和80μg/mL)的Coixan诱导NCM460,筛选出最佳促增殖浓度(10、20、40μg/mL)。实验随机设为空白组、模型组(LPS诱导)、LPS+Coixan低、中、高剂量(10、20、40μmol/L)组,LPS+柳氮磺吡啶(sulfasalazine,SASP)(200μg/mL)组,除空白组外用LPS(20μg/mL)刺激48 h建立UC体外细胞炎症模型后,分别以薏苡仁多糖及SASP进行48 h干预治疗后,ELISA法检测细胞上清液中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;免疫荧光检测焦亡相关蛋白Caspase-1荧光的表达量;采用qRT-PCR技术检测各组NCM460中NLRP3/Caspase-1通路中焦亡相关NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达水平的影响;Western blot技术检测各组焦亡相关NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平的影响。结果:与0μg/mL比较(20μg/mL)LPS诱导48 h对NCM460细胞生长抑制较为适中(P<0.01),同时,干预48 h时,炎症因子IL-1β、TNF-α含量明显升高(P<0.01),因此,选择(20μg/mL)LPS诱导48 h作为造模方式。与0μmol/L的Coixan相比,当Coixan浓度为10、20,40μmol/L时,细胞存活率增高,特别是Coixan浓度为10、20μmol/L(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组中炎症因子IL-1β、TNF-α的含量,NLRP3、Caspase-1β、IL-1β蛋白和NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,药物干预组中,中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中细胞IL-1β、TNF-α分泌量减少,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,药物干预组中,高剂量组和柳氮磺吡啶组中焦亡相关蛋白Caspase-1表达水平明显下调(P<0.01);与模型组比较,药物干预组中,低、中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中NLRP3、Caspase-1蛋白和基因表达明显降低(P<0.05或P<0.01),药物干预组中,高剂量组、柳氮磺吡啶组中GSDMD-N、IL-1β基因表达均显著降低(P<0.01);与模型组比较,药物干预组中,中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中焦亡相关蛋白(NLRP3,Caspase-1,IL-1β)表达水平明显下调(P<0.01)。结论:薏苡仁多糖可能通过下调焦亡相关因子NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β的表达水平,从而抑制人结肠上皮细胞的细胞焦亡,发挥人结肠上皮细胞保护作用。

薏苡仁多糖闪式提取工艺优化及其生物活性

以薏苡仁为原料,考察闪提时间、提取电压、提取转速对薏苡仁多糖得率的影响,采用响应面优化薏苡仁多糖闪式提取工艺,并对其生物活性进行研究。结果表明:最佳提取工艺为闪提时间101 s、提取电压161 V、提取转速6 100 r/min,此条件下薏苡仁多糖平均得率为9.03%,与预测值接近。同时薏苡仁多糖对DPPH自由基和ABTS阳离子自由基清除能力效果明显,清除率分别达到60.21%和40.06%;对·OH清除效果一般,清除率为21.65%,表明薏苡仁多糖具有良好的抗氧化能力。薏苡仁多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力效果明显,并且随着浓度的增加,抑制率增加,分别达到81.34%和78.88%,说明薏苡仁多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有良好的抑制作用。

薏苡仁多糖对糖尿病血管并发症大鼠NO及主动脉iNOS基因表达的影响

目的观察薏苡仁多糖对实验性糖尿病血管并发症大鼠主动脉iNOS mRNA表达调控的影响。方法采用链脲佐菌素(STZ)(75mg/kg)腹腔注射和高热量饲料喂养建立2型糖尿病并发动脉粥样硬化大鼠模型,应用RT-PCR半定量分析大鼠主动脉iNOS mRNA的表达变化。结果模型组大鼠主动脉iNOS mRNA表达量明显高于正常组的(P<0.01),经给药处理6个月后,与模型组比较,各给药组大鼠主动脉iNOS mRNA有不同程度的下调,薏苡仁多糖注射组、氨基胍组与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论薏苡仁多糖防治糖尿病血管并发症的作用可能与其下调iNOS mRNA的表达有关。

薏苡仁多糖对实验性2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

目的 观察薏苡仁多糖对实验性 2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响。方法 用小剂量链脲佐菌素 (2 5 mg/ kg,iv)加高热量饲料 (热卡 :2 0 .0 83J/ g)建立实验性 2型糖尿病大鼠模型 ,然后用薏苡仁多糖分三个剂量组 (2 5、5 0、10 0 mg/ kg,ip)给药治疗 2周 ,并测定葡萄糖耐量 ,血浆胰岛素以及肝糖原、肌糖原、肝细胞膜胰岛素受体结合率和肝葡萄糖激酶活性。结果 薏苡仁多糖能改善实验性 2型糖尿病大鼠糖耐量异常 ,增加肝糖原量和肝葡萄糖激酶活性 ,且呈现一定的量效关系。但对血浆胰岛素水平及胰岛素受体最大结合率和受体最大结合容量均无影响。结论 薏苡仁多糖能够改善实验性 2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗 。

薏苡仁多糖的分离提取及其降血糖作用的研究

目的 从薏苡仁中分离提取薏苡仁多糖 (Coixan) ,并观察其对多种模型小鼠血糖水平的影响。方法 ①采用热水提取、低温减压浓缩、三氯醋酸法去蛋白、流水透析、SephadexG 75柱层析等方法。②采用四氧嘧啶、肾上腺素尾静脉注射建立高血糖小鼠模型 ,尾静脉取血 ,血糖仪测定血糖水平。结果 ①被提取的薏苡仁多糖是鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成 ,分子量约为 1.5× 10 4 ,产率为 0 .12 5 % ;②口服给予Coixan对正常小鼠无明显降血糖作用 ;腹腔给予Coxian剂量在 5 0mg/kg和 10 0mg/kg时 ,能降低正常小鼠、四氧嘧啶糖尿病模型小鼠和肾上腺素高血糖小鼠的血糖水平 (P <0 .0 5&P <0 .0 1)。且呈现一定的量效关系。结论 薏苡仁多糖对正常及高血糖模型小鼠均有降血糖作用 。

薏苡仁多糖的提取及分离纯化

在单因素试验基础上,选取料液比、提取温度和提取时间3项为考察因素,通过正交试验L9(33)优化薏苡仁多糖提取的最佳工艺条件;对薏苡仁多糖进行分离纯化,考察薏苡仁多糖的Sephadex G-75凝胶柱层析特性以及纯度鉴定。结果表明:料液比1:15(g/mL)、提取温度100℃、提取时间150min为最佳提取条件,在最佳条件下薏苡仁多糖得率为5.53%;紫外扫描结果显示薏苡仁多糖中不含核酸和蛋白质。

薏苡仁多糖不同组分对脾虚水湿不化模型大鼠血清VIP、ADH、ALD的影响

目的:研究薏苡仁多糖不同组分对脾虚水湿不化模型大鼠血清VIP、ADH、ALD的影响,探讨薏苡仁多糖改善机体水液代谢的作用机制。方法:采用高脂低蛋白饮食加力竭游泳法复制脾虚水湿不化大鼠模型,水负荷实验检测水负荷指数和6 h尿量,采用ELISA方法观察薏苡仁多糖不同组分对模型大鼠血清VIP、ADH、ALD的影响。结果:给药干预后,与模型组相比,各用药组大鼠水负荷指数明显降低(P<0.05),尿量明显增多(P<0.01);薏苡仁粗多糖组和薏苡仁多糖组分Ⅰ组大鼠血清VIP、ADH、ALD明显降低(P<0.05)。结论:薏苡仁多糖不同组分能改善脾虚水湿不化大鼠水液代谢功能,其中薏苡仁多糖组分Ⅰ作用最明显,其作用机理与降低血清VIP、ADH、ALD水平有关。

薏苡仁多糖对2型糖尿病大鼠主动脉内皮素1基因表达的影响

目的观察薏苡仁多糖对实验性糖尿病血管并发症大鼠主动脉内皮素1mRNA表达调控的影响。方法采用链脲佐菌素腹腔注射(75mg/kg)和高热量饲料喂养建立2型糖尿病并发动脉粥样硬化大鼠模型,应用RT-PCR半定量分析大鼠主动脉内皮素1mRNA的表达变化。结果模型组大鼠主动脉内皮素1mRNA表达量为0.72±0.10,明显高于正常组的0.39±0.01(P<0.01),经给药处理6个月后,与模型组的表达量比较,各给药组大鼠主动脉内皮素1mRNA有不同程度的下调(P<0.05),其中薏苡仁多糖注射组的表达量0.49±0.12与模型对照组比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论糖尿病血管并发症的发生可能与内皮素1mRNA表达上调有关,薏苡仁多糖保护糖尿病血管内皮损伤可能与其下调内皮素1mRNA表达的作用相关。

超声波辅助酸提薏苡仁多糖工艺优化

目的:优化薏苡仁多糖提取工艺。方法:超声波辅助酸水提取,采用蒽酮硫酸法测定多糖含量,以多糖提取率和干浸膏得率为指标,以提取温度、p H值、料液比、时间和次数为考察因素。采用正交试验优选提取工艺,并采用冷冻干燥制备干浸膏。通过极差分析、方差分析,分析各因素对综合评价的影响,确定最佳工艺。结果:优选工艺为10倍量p H 5.0盐酸溶液浸泡10 min,80℃超声波15 min,提取2次。该条件下多糖提取率为14.12%,干浸膏得率为14.45%。结论:优化后的提取工艺经济高效、稳定可行,同时解决了因淀粉高温糊化带来的提取和含量测定环节的干扰。

薏苡仁多糖提取工艺的研究进展

薏苡仁多糖是中药薏苡仁的主要活性成分之一,具有广泛的药理活性和开发前景。为薏苡仁多糖提取工艺深入研究提供参考,从单一提取法和协同提取法方面综述了近年来薏苡仁多糖的提取工艺研究进展,分析了各种提取方法的优劣,并提出存在的不足及发展趋势。

薏苡仁多糖对实验性糖尿病大鼠LPO水平、SOD活性变化的影响

目的 观察薏苡仁多糖对实验性糖尿病大鼠LPO水平、SOD活性变化的影响。方法 以小剂量链脲佐菌素 (2 5mg/kg)静脉注射配合高热量饲料 (热卡 :2 0 0 83 5J/g)喂饲建立实验性糖尿病大鼠模型 ,再分 3个剂量组分别给予薏苡仁多糖 (5 0mg/kg、1 0 0mg/kg、 2 0 0mg/kg静脉注射 ) ,对照组予等体积生理盐水 ,2周后测定大鼠血清和肝脏LPO以及红细胞和胰腺SOD值。结果 薏苡仁多糖能够降低糖尿病大鼠血清LPO水平 (P <0 0 5 ) ,而对肝脏LPO影响不大 (P >0 0 5 ) ,并能显著提高糖尿病大鼠红细胞与胰腺SOD活性 (P <0 0 1 ) ,并呈现一定的量效关系。

薏苡仁多糖对氯氮平诱导的糖脂代谢紊乱模型大鼠的影响

目的:探讨薏苡仁多糖对氯氮平诱导的糖脂代谢紊乱模型大鼠的影响。方法:SPF级SD大鼠50只,按体质量随机分为5组,分别是正常对照组、模型组、二甲双胍组、薏苡仁多糖高、低剂量组,每组10只。通过氯氮平制备大鼠糖脂代谢紊乱模型。正常对照组、模型组灌胃生理盐水;二甲双胍组灌胃二甲双胍0.2 g/kg,每天2次;薏苡仁多糖高、低剂量组分别灌胃薏苡仁多糖0.2 g/kg、0.1 g/kg,每天2次。检测大鼠体质量、空腹血糖、餐后2 h血糖及血清中瘦素及脂联素含量。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠在第14天至56天体质量、空腹血糖、餐后2 h血糖、血清中瘦素水平显著升高,血清中脂联素水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,薏苡仁多糖高、低剂量组、二甲双胍组大鼠在第42天至56天体质量、空腹血糖、餐后2 h血糖、血清中瘦素水平显著降低,血清中脂联素水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:薏苡仁多糖对氯氮平诱导的大鼠糖脂代谢紊乱模型有较好的防治作用,其机制可能与调节血糖、瘦素及脂联素水平有关。

薏苡仁多糖对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的 :观察薏苡仁多糖对小鼠免疫功能的影响。方法 :应用环磷酰胺复制出小鼠免疫低下模型。并分4组分别灌服大、小剂量薏苡仁多糖水溶液、香菇多糖片混悬液及同体积蒸馏水 ,每天给药 1次 ,连续 7天。另设空白对照组。结果 :薏苡仁多糖可显著提高免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数 ,促进溶血素及溶血空斑形成 ,促进淋巴细胞转化。结论 :薏苡仁多糖有很好的免疫兴奋作用。

薏苡仁多糖对实验性糖尿病大鼠红细胞免疫、T淋巴细胞亚群的影响

探讨薏苡仁多糖对实验性糖尿病大鼠红细胞免疫粘附功能及Ｔ淋巴细胞亚群的影响。利用小剂量链尿佐菌素（ＳＴＺ ２５ｍｇ／ｋｇｉ．ｖ）加喂高热量饲料（热卡：２０．０８３ｊ／ｇ），建立实验性Ⅱ糖尿病大鼠模型，观察薏苡仁多糖对模型大鼠红细胞免疫粘附及Ｔ淋巴细胞亚群的作用。结果：实验性糖尿病大鼠与正常组比较，红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（Ｅ－Ｃ３ｂＲＲ）水平下降３４．６０％，红细胞免疫复合物花环率（Ｅ－ＩＣＲ）增加６３．４４％，Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８分别下降了２５．１７％、２５．６１％、１６．３１％，两组比较均有显著性差异（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。经薏苡仁多糖治疗后，以上各值均有不同程度的恢复（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。结论：实验性糖尿病大鼠存在红细胞免疫粘附功能及Ｔ淋巴细胞亚群异常，薏苡仁多糖能够改善这种异常状态，这可能与薏苡仁多糖的降血糖作用及免疫调节作用有关。

薏苡仁多糖提取物的质量标准研究

目的建立薏苡仁多糖提取物的质量标准。方法对薏苡仁多糖提取物的水分、炽灼残渣和重金属进行测定。采用苯酚-硫酸比色法对薏苡仁提取物中多糖进行含量测定。结果薏苡仁多糖提取物中水分不应超过9%,炽灼残渣不得过1.5%,重金属含量不得过百万分之二十,薏苡仁多糖以葡萄糖(C6H12O6)计,不得少于52%。结论本方法准确方便,能较全面地控制薏苡仁多糖提取物的质量。

薏苡仁多糖提取及纯化工艺的研究

目的:优选薏苡仁多糖提取、分离及纯化的最佳工艺。方法:通过正交试验法确定薏苡仁多糖的最佳提取工艺;采用单因素优选法考察醇沉浓度及醇沉时间对多糖得率的影响;用Sevag法(正丁醇-氯仿混合液1∶5)和三氯乙酸法(TCA)脱蛋白。结果:薏苡仁多糖最佳提取工艺条件为10倍量水提取2次,每次1h;醇沉时多糖含量与乙醇浓度呈正比,且当乙醇浓度为90%时,多糖含量达到最大,醇沉时间为9小时。结论:该工艺稳定、简便易行、提取物中多糖含量及纯度均较高。

薏苡仁多糖抗肿瘤作用及免疫作用研究进展

薏苡仁中含有酯类、脂肪酸、多糖、甾体、三萜及蛋白质等化合物,目前已发现且分离鉴定出的活性成分多达41种。近几年关于薏苡仁多糖抗肿瘤作用方面的研究颇为活跃。该文主要综述近年来薏苡仁多糖在抗肿瘤作用方面的研究进展。为今后进一步探究薏苡仁多糖在抗肿瘤方面的作用提供理论性依据。

超声-微波协同萃取薏苡仁多糖的工艺研究

目的确立超声-微波协同萃取薏苡仁多糖的最佳提取工艺。方法用正交试验法考察不同温度、料液比、提取时间下薏苡仁多糖的得率。结果最佳工艺为提取温度80°C、液料比10∶1、提取时间100 min。结论超声-微波协同萃取用于薏苡仁多糖的提取且有显著的优势。

不同产地薏苡仁多糖的单糖组成分析

[目的]分析不同产地薏苡仁多糖的单糖组成。[方法]收集不同产地的薏苡仁,以水提醇沉的方法获得薏苡仁粗多糖,并采用苯酚-硫酸法对各样品中多糖的含量进行测定;进一步使用HPLC-UV法对酸水解后的薏苡仁多糖的单糖组成进行分析。[结果]研究建立了稳定可靠的薏苡仁单糖组成分析方法,发现薏苡仁多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等单糖组成,其中葡萄糖所占比例最高,并初步分析了7种单糖的质量分数,发现不同产地的薏苡仁存在的差异较大。[结论]研究方法专属性强,可为薏苡仁药材的质量控制提供依据。

薏苡仁多糖急性毒性及遗传毒性试验研究

目的了解薏苡仁多糖的毒理学安全性。方法小鼠急性毒性试验和遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)。结果薏苡仁多糖的小鼠经口LD50>20 g.kg-1;在Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验中均呈阴性反应,未显示有遗传毒性作用。结论薏苡仁多糖基本无毒性。