薤白多糖的分离纯化及组成分析

采用DEAE-纤维素离子交换柱层析和SephadexG-150凝胶柱层析,对薤白粗多糖(PAM)进行了分离纯化;利用醋酸纤维素薄膜电泳和凝胶过滤法鉴定精制薤白多糖纯度;硅胶薄层层析分析精制多糖的单糖组成。结果表明:DEAE-纤维素柱分别用水、0.1mol.L-1NaCl、0.5mol.L-1Na0H洗脱分得三种级分,即水洗级分(PAM-I)、盐洗级分(PAM-II)和碱洗级分(PAM-III);这三种级分再经过SephadexG-150柱进一步分离纯化,得三个主要级分PAM-Ib、PAM-IIa及PAM-III’;经醋酸纤维素薄膜电泳和凝胶过滤法鉴定,它们为均一的多糖;硅胶薄层层析分析显示,PAM-Ib主要由半乳糖和葡萄糖组成,PAM-IIa主要由半乳糖、葡萄糖、果糖、木糖和鼠李糖组成,PAM-III’主要由半乳糖、葡萄糖和木糖组成。

一种具有抑制细胞增殖的薤白多糖的分离及性质

对薤白多糖80%醇沉组分进行分离纯化、理化性质及肿瘤细胞抑制作用研究,经DEAE-52纤维素柱层析及葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱层析纯化得到薤白多糖AMP80-1,分别采用苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、硫酸-间羟联苯法、氯化钡-明胶法对AMP80及AMP80-1中总糖、蛋白质、糖醛酸、硫酸基含量进行分析。结果表明,多糖组分不含蛋白质,硫酸基含量均较低。采用高效液相凝胶渗透色谱法测得AMP80-1相对分子质量为8.1 ku。红外光谱分析表明AMP80-1主要为吡喃糖苷连接,紫外光谱分析表明AMP80-1不含核酸和蛋白质。细胞实验结果显示,薤白多糖AMP80-1对人胃癌细胞BGC-823生长存在一定的抑制作用,且在一定范围内存在不同程度的量效关系和时效关系。

薤白多糖的硫酸化修饰及体外抗氧化活性

为探讨薤白多糖硫酸化修饰的最佳条件,以及硫酸化修饰提高薤白多糖活性的可能性,采用氯磺酸-吡啶法对醇沉法得到的薤白多糖和柱层析纯化的3种分级薤白多糖进行硫酸化修饰,以氯磺酸-吡啶配比、反应温度和反应时间为自变量,修饰产物的硫酸基取代度(DS)为响应值,应用响应面设计法确定硫酸化修饰的最佳条件,用H2O2/Fe2+体系法和邻苯三酚自氧化法测定修饰产物的抗氧化活性。结果表明:薤白多糖氯磺酸-吡啶法修饰的最佳条件为氯磺酸∶吡啶=1∶3,反应温度65℃,反应时间2 h,此条件下硫酸根取代度为0.470,硫酸化修饰能提高薤白多糖的体外抗氧化活性。

薤白多糖抑瘤及神经营养活性研究

采用MTT法对薤白多糖纯化组分(AMP40-1、AMP40-2)在体外抑制人肺癌细胞A549和人胃癌细胞BGC-823的增殖作用进行了研究。结果显示,AMP40-2对人肺癌细胞A549的生长具有一定的抑制作用。对人胃癌细胞BGC-823的增殖实验结果表明,薤白多糖AMP40-1、AMP40-2均能不同程度的抑制BGC-823细胞的增殖,且抑制作用与多糖之间存在不同程度的正相关量效关系和时效关系。通过大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12培养体系,对薤白多糖纯化组分(AMP40-1、AMP40-2)进行了神经营养活性研究。结果表明,薤白多糖AMP40-2对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞具有一定的促分化作用。

不同薤白多糖体外对自由基的清除作用

采用二苯代苦味酰肼自由基(DPPH·)法和邻二氮菲-Fe2+-H2O2体系法,研究薤白粗多糖(cAMP)、半纯多糖(AMP)和2种纯化多糖(AMP-Ⅰ,AMP-Ⅲ)对自由基的清除作用。结果表明,4种薤白多糖均能清除DPPH·和OH·,并随着质量浓度的增加清除作用增强,其中cAMP的清除作用最强,AMP和较低相对分子质量多糖(AMP-Ⅰ)的清除率较接近。

响应面法优化薤白多糖的羧甲基化修饰工艺及抗氧化活性研究

采用氯乙酸法对醇沉法得到的薤白多糖(PAM)和柱层析纯化的3种分级薤白多糖进行羧甲基化修饰,以氯乙酸浓度、反应时间和反应温度为自变量,修饰产物的羧甲基取代度(DS)为响应值,应用响应面设计法确定羧甲基化修饰的最佳条件,用H2O2/Fe2+体系法和邻苯三酚自氧化法测定修饰产物的抗氧化活性.结果表明:薤白多糖氯乙酸法修饰的最佳条件为氯乙酸浓度1.3 mol/L、反应温度63℃、反应时间3.2 h.此条件下羧甲基取代度为0.882.羧甲基化修饰能提高薤白多糖的体外抗氧化活性.

薤白多糖提取、分离提纯及与DNA作用研究

目的:分析薤白多糖提取、分离提纯及与DNA作用。方法:根据薤白多糖酶法提取工艺、对薤白多糖薤进行分离提纯和鉴定。研究期间利用常规方法分离小鼠股骨BMSCs,将BMSC分为空白组、对照组、实验组(剂量100μL、剂量为12.5、25、50、100μg/ml)薤白多糖,分别采用不同方法处理。结果:AMP40-1、AMP40-2、AMP60-1、AMP80-1均未见吸收峰,提示为单纯的多糖组份。空白组、对照组、不同浓度的薤白多糖溶液处理的实验组的畸变率、焦点簇数目差异都具有统计学意义(P<0.05)。结论:薤白多糖提取、分离提纯质量尚可;薤白多糖可减轻放射引起的细胞DNA损伤,发挥保护作用且呈剂量依赖。

薤白多糖的酶法修饰及其抗氧化活性

为探讨薤白多糖酶法修饰的最佳条件,以及酶法修饰提高薤白多糖活性的可能性,采用α-淀粉酶对醇沉法得到的薤白多糖和柱层析纯化的3种分级薤白多糖进行酶法修饰,以O2-·清除率为响应值,应用响应面分析法对α-淀粉酶修饰薤白多糖的工艺进行优化,用邻苯三酚自氧化法测定修饰产物的抗氧化活性。结果表明,对修饰多糖抗氧化活性的影响因素从大到小依次为:加酶量、酶解温度、酶解p H;α-淀粉酶修饰薤白多糖的最优工艺条件为:加酶量263U/g,酶解温度45℃、酶解p H 5.8,在此条件下O2-·清除率预测值为80.13%,验证值为80.16%,结果重现性好,可用于实际预测。抗氧化试验表明,酶法修饰能提高薤白多糖的抗氧化活性。