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薯蓣褪绿坏死花叶病毒CP基因的原核表达及抗血清的制备
被引量:
2
1
作者
张鹏远
任龙辉
+3 位作者
王建光
陈壮壮
钟宇
陈穗云
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期206-212,共7页
薯蓣褪绿坏死花叶病毒(yam chlorotic necrotic mosaic virus,YCNMV)是马铃薯Y病毒科柘橙病毒属暂定成员。采用RT-PCR方法,以Sprimer/M4简并引物对扩增获得的YCNMV分离物3'端基因组序列为参考序列,根据该序列设计CP基因特异引物获得...
薯蓣褪绿坏死花叶病毒(yam chlorotic necrotic mosaic virus,YCNMV)是马铃薯Y病毒科柘橙病毒属暂定成员。采用RT-PCR方法,以Sprimer/M4简并引物对扩增获得的YCNMV分离物3'端基因组序列为参考序列,根据该序列设计CP基因特异引物获得YCNMV CP基因并插入p ET-30a表达载体中,在BL21(DE3)菌株中诱导表达。获得的融合蛋白经Ni+-NTA柱纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗血清。结果表明,连接在表达载体中的CP基因序列及表达的蛋白氨基酸序列与预期的CP基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为99.65%。聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,获得的融合蛋白大小约为44 k D,与预期蛋白大小相符。制备的抗血清经Western blotting和ID-ELISA检测表明,获得的多克隆抗体效价较高,能可靠、灵敏、特异地与YCNMV病毒颗粒结合,可应用到该病毒的检测中。
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关键词
薯蓣褪绿坏死花叶病毒
外壳蛋白
原核表达
抗血清
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职称材料
5种苹果病毒多重PCR检测体系的建立
2
作者
胡国君
范旭东
+4 位作者
李军
任芳
孙喜陈
张尊平
董雅凤
《中国果树》
北大核心
2023年第10期79-83,88,共6页
苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNM...
苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNMV和ASSVd 3种病毒的检测引物ACL-F1/R1、ApN-F2/R2和ASS-F1/R1,片段的大小分别为1112、1025、213 bp。利用新设计和已报道的苹果病毒特异性引物,通过引物检测效果比较、组合筛选、用量优化及退火温度调试,建立了5种苹果病毒多重PCR检测体系。该检测体系的扩增片段大小分别为ACLSV1112 bp、ApNMV640 bp、ASGV449 bp、ASPV349 bp和ASSVd213 bp。利用多重PCR和单一PCR分别对50份田间苹果样品进行病毒检测,结果显示,各样品多重PCR检测与单一PCR检测结果一致,表明本研究建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、高效地检测单一或复合侵染的5种苹果病毒。
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关键词
苹果
苹果
褪
绿
叶斑
病毒
苹果茎沟
病毒
苹果茎痘
病毒
苹果
坏死
花叶病毒
苹果锈果类
病毒
多重PCR
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职称材料
题名
薯蓣褪绿坏死花叶病毒CP基因的原核表达及抗血清的制备
被引量:
2
1
作者
张鹏远
任龙辉
王建光
陈壮壮
钟宇
陈穗云
机构
云南大学生命科学学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期206-212,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31101416)
云南大学生命科学学院科学研究与人才培养开放基金项目(2013S205)
+3 种基金
云南省烟草公司项目(2011YN60
2012YN10
2012YN36
2012YN13)
文摘
薯蓣褪绿坏死花叶病毒(yam chlorotic necrotic mosaic virus,YCNMV)是马铃薯Y病毒科柘橙病毒属暂定成员。采用RT-PCR方法,以Sprimer/M4简并引物对扩增获得的YCNMV分离物3'端基因组序列为参考序列,根据该序列设计CP基因特异引物获得YCNMV CP基因并插入p ET-30a表达载体中,在BL21(DE3)菌株中诱导表达。获得的融合蛋白经Ni+-NTA柱纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗血清。结果表明,连接在表达载体中的CP基因序列及表达的蛋白氨基酸序列与预期的CP基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为99.65%。聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,获得的融合蛋白大小约为44 k D,与预期蛋白大小相符。制备的抗血清经Western blotting和ID-ELISA检测表明,获得的多克隆抗体效价较高,能可靠、灵敏、特异地与YCNMV病毒颗粒结合,可应用到该病毒的检测中。
关键词
薯蓣褪绿坏死花叶病毒
外壳蛋白
原核表达
抗血清
Keywords
yam chlorotic necrotic mosaic virus
coat protein
prokaryotic expression
antiserum
分类号
S432.41 [农业科学—植物病理学]
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职称材料
题名
5种苹果病毒多重PCR检测体系的建立
2
作者
胡国君
范旭东
李军
任芳
孙喜陈
张尊平
董雅凤
机构
中国农业科学院果树研究所
辽宁省绿色农业技术中心
出处
《中国果树》
北大核心
2023年第10期79-83,88,共6页
基金
辽宁省科学技术计划(2022JH2/101300189)
山东省重点研发计划(2022LZGCQY008)
中国农业科学院科技创新工程。
文摘
苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果坏死花叶病毒(ApNMV)和苹果锈果类病毒(ASSVd)是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害,建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNMV和ASSVd 3种病毒的检测引物ACL-F1/R1、ApN-F2/R2和ASS-F1/R1,片段的大小分别为1112、1025、213 bp。利用新设计和已报道的苹果病毒特异性引物,通过引物检测效果比较、组合筛选、用量优化及退火温度调试,建立了5种苹果病毒多重PCR检测体系。该检测体系的扩增片段大小分别为ACLSV1112 bp、ApNMV640 bp、ASGV449 bp、ASPV349 bp和ASSVd213 bp。利用多重PCR和单一PCR分别对50份田间苹果样品进行病毒检测,结果显示,各样品多重PCR检测与单一PCR检测结果一致,表明本研究建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、高效地检测单一或复合侵染的5种苹果病毒。
关键词
苹果
苹果
褪
绿
叶斑
病毒
苹果茎沟
病毒
苹果茎痘
病毒
苹果
坏死
花叶病毒
苹果锈果类
病毒
多重PCR
Keywords
apple
apple chlorotic leaf spot virus
apple stem grooving virus
apple stem pitting virus
apple necrotic mosaic virus
apple scar skin viroid
multiple PCR
分类号
S436.611.1 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
薯蓣褪绿坏死花叶病毒CP基因的原核表达及抗血清的制备
张鹏远
任龙辉
王建光
陈壮壮
钟宇
陈穗云
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
下载PDF
职称材料
2
5种苹果病毒多重PCR检测体系的建立
胡国君
范旭东
李军
任芳
孙喜陈
张尊平
董雅凤
《中国果树》
北大核心
2023
0
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职称材料
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