苦藏花素协同吉非替尼抑制非小细胞肺癌细胞增殖的作用研究

在我国,约35%~40%的非小细胞肺癌患者由表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)编码基因突变所致[1],吉非替尼作为第一代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs),是EGFR突变的晚期非小细胞肺癌的标准一线治疗方案,但其获得性耐药是疗效限制的主要问题[2-3]。苦藏花素是藏红花最重要的生物活性成分之一,含量仅次于藏红花苷,药效研究表明,苦藏花素具有显著的抑菌作用和抗肿瘤药理活性[4-6]。为深入研究苦藏花素的抗肿瘤作用,本课题组进行了苦藏花素对人非小细胞肺癌细胞株A549、H1650和PC9的增殖作用研究,发现苦藏花素对A549细胞增殖抑制作用最明显,故本研究选择以人肺癌A549细胞为受试细胞,研究苦藏花素与吉非替尼对人肺癌细胞增殖的协同作用,为在临床中联合应用藏红花治疗非小细胞肺癌提供理论依据。

藏花醛治疗干性年龄相关性黄斑变性机制的研究进展

年龄相关性黄斑变性(AMD)是一种常见的不可逆性疾病,是65岁以上人群视力障碍和视力丧失的主要原因之一。其中,晚期干性AMD(dAMD)以地图样萎缩为特征,目前尚未找到有效的治疗方法。藏花醛是藏红花的主要成分之一,具有抗氧化、抗炎以及神经保护特性。本文将总结dAMD的病因及发病机制,并从调节细胞凋亡、氧化应激、自噬、免疫与炎症反应等方面,综述藏花醛在实验室阶段对预防、缓解dAMD的作用机制,为今后治疗dAMD的研究提供新的思路和选择。

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的:研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌(TCCB)增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:用crocin处理后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析其对T24细胞增殖的影响;流式细胞术检测T24细胞周期动力学和凋亡诱导率。建立人膀胱癌T24细胞株裸鼠移植瘤动物模型。随机分为对照组和处理组。50 mmol.L-1crocin处理后,观察其对肿瘤的抑制作用;电镜观察肿瘤组织形态改变;SP-免疫组织化学法分析Bcl-2,Bax,survivin,Cyclin D1蛋白表达。结果:Crocin能明显抑制人膀胱癌T24细胞的生长,并使T24细胞呈明显的G0/G1期阻滞现象;T24细胞早期凋亡率随crocin作用时间的延长而逐渐增加。Crocin对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,电镜观察可见细胞凋亡的形态学改变,免疫组化结果显示,经Crocin处理后Bcl-2,survivin,Cyclin D1的表达下调,而Bax的表达上调。结论:Crocin对人膀胱癌T24细胞株的体内外增殖均具有良好的抑制作用,其机制可能是改变细胞周期分布和诱导细胞凋亡,作用机制与下调Bcl-2,survivin,Cyclin D1基因表达和上调Bax的基因表达有关。

高效液相色谱法(HPL)测定藏花素的研究

采用高效液相色谱法（HPLC），选用TunerPackingKromasil氨基柱，以乙腈：水（80：20）为流动相，流速08ml／min，440nm下测定藏花素，结果表明：藏花素的保留时间为1219min，最小检测限为12．5ng，加样回收率为99．34％，色谱峰分离效果好，具有良好的稳定性和重视性。

藏花素对膀胱移行细胞癌的增殖抑制作用

目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌是否具有增殖抑制作用。方法:MTT法检测藏花素对T24细胞增殖的影响;应用形态学手段观察细胞形态学的改变;流式细胞术检测肿瘤细胞周期动力学。荷瘤小鼠模型建立,测定藏花素处理后荷瘤小鼠体内抑瘤率。结果:藏花素能明显抑制T24细胞的增殖,并可导致其形态学的改变;藏花素作用后G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例逐渐减少;对照组裸鼠肿瘤的平均体积明显大于藏花素处理组裸鼠肿瘤的平均体积,其差异具有显著性(P<0.05),裸鼠生长抑制率为27.8%。结论:体内外实验证明,藏花素对膀胱移行细胞癌的增殖有抑制作用。

藏花素对H_2O_2诱导PC12细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响

本文通过观察藏花素对H2O2诱导的PC12细胞的保护作用和对Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响,探讨藏花素对阿尔茨海默病细胞模型保护作用的机制。MTT法及LDH活性测定观察藏花素对PC12细胞模型的影响,RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表达水平,Western blot检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。藏花素预保护浓度在0.625μM和5μM之间,细胞存活率随着藏花素浓度的升高而升高;藏花素组和VE组与模型组相比,Bcl-2 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05),Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。研究结果表明:藏花素可能是通过上调Bcl-2的表达,从而介导PC12细胞发挥抗氧化和细胞凋亡的生物学功能。

低速逆流色谱分离制备栀子黄色素中的藏花素

建立了低速逆流色谱技术(SRCCC)从栀子黄色素中快速分离制备藏花素的方法。两相溶剂系统由叔丁基甲基醚-正丁醇-乙腈-水(2∶2.5∶1∶5,v/v/v/v)组成,以上相为固定相,下相为流动相。在转速为50 r/min和流速为5mL/min的条件下,从5 g栀子黄色素粗样中分离得到2.47 g藏花素,纯度为96.8%。该方法制备量大、安全、高效,有可能成为工业级分离制备藏花素的一种有效手段。

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响

目的:应用基因表达谱芯片研究藏花素(crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞基因表达谱的影响。方法:MTT法测定藏花素对T24细胞的生长抑制率,选出藏花素最佳作用时间和浓度,运用高通量的基因表达谱芯片检测藏花素作用T24细胞前后基因表达谱的变化,筛选差异表达基因。RT-PCR和免疫细胞化学验证上调基因p21^(WAF1)和下调基因cyclinD1。结果:MTT实验结果显示3 mmol·L^(-1)藏花素作用T24细胞48 h的抑制率与对照组相比有显著意义(P<0.05)。基因芯片检测发现3 mmol·L^(-1)藏花素作用T24细胞48 h引起该细胞系基因表达谱广泛地改变,其中表达差异2倍以上的基因共836个,这些差异表达基因的功能涉及多个方面,最为明显的是与细胞生长调节相关的细胞周期调节基因、细胞凋亡调控基因、DNA复制相关基因等类型。RT-PCR检测其中的细胞周期调节相关基因p21^(WAF1)和cyclinD1,结果与基因芯片相符。同时免疫细胞化学结果从蛋白表达水平上佐证p21^(WAF1)和cyclinD1变化与芯片结果一致。结论:藏花素可以诱导T24细胞基因表达谱广泛的改变,并可能通过调控细胞周期相关基因的表达来抑制T24细胞的增殖。

藏花素促膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡的研究

目的研究藏花素诱导膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡的作用及分子机制。方法通过MTT比色法分析藏花素对T24细胞增殖的影响;应用光镜观察细胞形态学的改变;Annexin V-FITC/PI荧光双标流式细胞术检测T24细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响,RT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达变化。结果藏花素能明显抑制T24细胞的增殖,并可导致其形态学的改变;随藏花素作用时间的延长,G0/G1期细胞比例逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例逐渐减少,早期凋亡细胞逐渐增多,同时可以上调Bax和下调Bcl-2的基因表达水平。结论藏花素可明显抑制T24细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,可能与Bcl-2和Bax等凋亡调控基因有关。

栀子中藏花素的药理学和药代动力学研究进展

栀子为茜草科植物栀子(Gardenia Jasmi-noides Ellis)的干燥成熟果实,具有广泛的用途。藏花素是从栀子果实中提取出来的一类天然色素。实验研究发现藏花素具有多种药理学活性,如神经保护作用、抗肿瘤等。本文综述藏花素的药理学及药代动力学方面的研究进展,以期为藏花素的研发和临床应用提供依据。

藏花素对膀胱移行细胞癌T24细胞VEGF-C表达水平的影响

目的:研究藏花素(Crocin)对膀胱移行细胞癌T24细胞血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor,VEGF-C)表达水平的影响。方法:采用MTT法测定不同浓度及不同时间藏花素对T24细胞抑制率,选出最佳药物浓度和最佳作用时间。用RT-PCR和基因芯片分别检测最佳作用时间和最佳药物浓度作用前后T24细胞VEGF-C的表达。结果:MTT显示藏花素抑制T24细胞生长具有时间和剂量依从性,3mmol/L藏花素作用48h对T24细胞的抑制率最高。RT-PCR显示藏花素组VEGF-C表达明显减少,基因芯片扫描结果中藏花素组VEGF-C表达也显著下调。结论:藏花素抑制T24细胞增殖,可能与下调VEGF-C的表达,从而减少肿瘤血管的生成有关。

HPLC法测定人肝微粒体中藏花酸的浓度

目的建立一种测定人肝微粒体孵育体系中藏花酸浓度的HPLC 内标法.方法在人肝微粒体温孵体系中加入藏花酸样品进行孵育反应,反应结束后用冰乙腈终止反应.经沉淀法处理样品后,采用DiamonsilC18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）进行分离.流动相：甲醇2% 冰乙酸水溶液（75：25,v/v）;流速：1.0 mL·min^-1;柱温：30 ℃;紫外检测波长：440nm;内标：吲哚美辛.结果藏花酸经孵育反应后质量浓度测定方法的线性范围为0.125～8μg·mL-1,线性关系良好（R^2 =0.9999）.藏花酸低、中、高质量浓度的提取回收率分别为：97.24%、96.58%、98.12%,其RSD 均小于15%,批内、批间差异〈15%,准确度为85%～115%.结论该HPLC 法简便、准确,符合生物样品测定的要求,能快速、可靠地检测人肝微粒体中藏花酸的浓度.

EDTA对藏花素的稳定效应

对藏花素的稳定性进行了一系列研究,实验证明,加入稳定剂EDTA—Na_2的藏花素能获得可靠的稳定效果,即使在其原来不适介质中也能有较好的稳定性,使之应用范围扩大,提高了使用价值。

藏花醛药理活性及作用机制的研究进展

藏花醛是一种单萜醛,是藏红花的主要挥发性成分之一,也是藏红花香气产生的主要原因,在食品、饮品中广泛应用。现代药理学研究证明藏花醛有着广泛的药理学活性,如心血管保护作用、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种特性,这些药理作用主要基于其具有高度抑制机体内活性氧(ROS)的潜力。本文对藏花醛的主要来源、理化性质进行介绍,着重总结了近年来藏花醛的药理活性及作用机制的研究进展。

高效液相色谱法测定栀子中藏花素的含量

建立了一种用高效液相色谱法测定栀子中藏花素含量的方法。采用XBridge Amide氨基柱(150mm×4.6mm,5μm),以甲醇∶乙腈∶水(17∶33∶50)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长440nm,柱温25℃,用外标法定量,测定栀子中藏花素的含量。结果表明,测定藏花素的线性回归方程为y=1.508 7x-0.014 1,相关系数R2=0.996 2,回收率97.68%,相对误差0.729%,该方法简便,快速,线性关系良好。

催化氧化技术降解碱性藏花红废水

采用自制的多金属氧酸盐Zn1.5PW12O40纳米管作为催化剂和分子氧作为氧化剂的催化氧化技术进行碱性藏花红的降解实验。结果表明:Zn1.5PW12O40适合用作催化剂,中空结构,杂多酸型,纳米级;空气氧化体系中的催化氧化最佳反应时间为4h,降解率78%、降解速率665μg/h;催化剂的活性和稳定性均较高,循环使用4次时,降解率仍>65%。

藏花素调控deltaN P63基因抑制膀胱肿瘤细胞生长的研究

目的探讨藏花素对膀胱肿瘤细胞5637的生长抑制作用及调控机制。方法用3mmol/L藏花素处理膀胱肿瘤细胞5637细胞株,采用反转录PCR(RT-PCR)检测细胞deltaNP63基因表达的变化,光镜下检测细胞形态改变,流式细胞术检测细胞周期改变,四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞增殖改变。结果在一定浓度的藏花素作用下,可见5637细胞生长缓慢,deltaN-P63基因表达下降,G0/G1期细胞数量增加,G2/M期细胞数量减少,MTT检测显示细胞增殖受到抑制。结论藏花素可以抑制膀胱肿瘤细胞增殖和生长,其机制可能与通过下调deltaNP63基因的表达有关。

hepaCAM与藏花素联合应用对前列腺癌细胞增殖的影响

目的:研究肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)与藏花素联用对前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞DU145增殖的影响。方法:四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞增殖效应;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;实时荧光定量PCR、Western blot法检测细胞周期调节因子cyclinD1及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达变化。结果:hepaCAM过表达腺病毒与藏花素单独使用均能抑制PCa细胞DU145的增殖[48 h抑制率分别为(12.0±2.0)%,(22.0±1.0)%],但两者联用比单独应用效果更加明显[48 h抑制率为(54.0±1.0)%,P=0.000]。Real-time PCR结果显示,hepaCAM过表达腺病毒及藏花素联合作用与藏花素单独使用相比,cyclinD1 mRNA表达下调(P=0.048);两者联合应用与hepaCAM过表达腺病毒或藏花素单独使用相比,PCNA mRNA水平下调(P=0.047,P=0.006)。Western blot结果显示,与单独使用hepaCAM过表达腺病毒或藏花素相比,两者联用组cyclinD1蛋白表达明显降低(P=0.002,P=0.002),同时PCNA蛋白表达也降低(P=0.000,P=0.003)。结论:hepaCAM基因过表达腺病毒与藏花素联用对PCa DU145细胞增殖的抑制有明显的协同作用,作用机制与下调cyclinD1和PCNA的表达有关。

大孔吸附树脂吸附α-藏花素的热力学研究

研究了YWD09A5大孔吸附树脂吸附α-藏花素的吸附行为和热力学性质,结果表明,α-藏花素在YWD09A5大孔吸附树脂上的吸附等温线符合Radke-Prausnitz等温吸附方程.热力学研究表明,该吸附为自发、吸热和熵增的物理吸附过程.

藏花酸的药理学研究进展

藏花酸（crocetin）又名番红花酸或西红花酸,为无色晶体,是藏红花的主要有效成分之一,来源于茜草科植物栀子果实,具有多不饱和共轭烯酸结构,属类胡萝卜素物质。藏花酸作为考察对象,可定量测定栀子黄色素中所含主要显色物质——藏花酸和藏花素等类胡萝卜物质的含量。