藜芦胺对人胶质母细胞瘤细胞U251增殖的影响及机制

目的 探究藜芦胺(VTM)对人胶质母细胞瘤(GBM)细胞U251增殖的影响及其潜在机制。方法 借助网络药理学方法,筛选VTM干预GBM的铁死亡相关交集靶点,并进行基因本体、京都基因和基因组百科全书富集分析。以U251细胞为对象,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、细胞形态变化观察、2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法、FerroOrange荧光探针法、Western blot实验对VTM抑制U251细胞增殖的作用及可能机制进行验证。结果 共筛选出VTM干预GBM的铁死亡相关交集靶点462个,富集于氧化应激、细胞凋亡等生物学过程,胞质囊泡、线粒体膜等细胞成分,影响二价铁离子(Fe^(2+))结合、DNA转录过程等分子功能,以及铁死亡、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路等。40、60、80、100、120、140μmol/L的VTM均可显著降低细胞存活率(P<0.01);40、80、120μmol/L的VTM可使细胞萎缩、细胞核破碎,可显著抑制其克隆形成,显著提高其活性氧(ROS)、Fe^(2+)水平,并可不同程度地上调核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白的表达,下调谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 VTM可抑制U251细胞的增殖,促进细胞内ROS和Fe^(2+)的蓄积,从而诱导铁死亡,上述作用可能与调控Nrf2/HO-1/GPX4信号通路有关。

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定藜芦中的介藜芦碱和藜芦胺

建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）测定藜芦中介藜芦碱、藜芦胺含量的方法,并对4种藜芦属药材样品进行了测定。采用的色谱柱为Kromasil C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,以乙腈和0.1%三氟乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为：0-5min,20%乙腈;5-30min,20%乙腈-40%乙腈,30-40min,40%乙腈-20%乙腈;40-45min,20%乙腈;流速为0.8mL/min;柱温为35℃;采用ELSD检测,漂移管温度为98℃,载气流速2.2L/min。介藜芦碱和藜芦胺的线性范围分别为42.05-980mg/L和43.77-1 020mg/L;平均回收率分别为99.2%和101.4%,相对标准偏差分别为1.7%和2.1%（n=6）;信噪比为3时,测得介藜芦碱和藜芦胺最低检测限分别为18.37mg/kg和21.50mg/kg。该方法快速简便、灵敏度和分离度好,适用于藜芦药材中活性生物碱的测定。

藜芦胺类似物的合成及体外抗肿瘤活性研究

以黎芦属植物中含量丰富的甾体生物碱藜芦胺（Ⅰ）为原料,经结构修饰,共得到5种藜芦胺类似物Ⅱ~Ⅵ。经核磁共振谱、质谱确定化合物结构。以已知的Hedgehog信号通路抑制剂环巴胺为阳性对照,采用人胃癌细胞SGC-7901和人胰腺癌细胞Aspc-1进行体外抑制肿瘤细胞增殖活性筛选。结果表明,化合物Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的抑制肿瘤细胞增殖活性优于环巴胺。初步构效关系研究表明,在藜芦胺的哌啶环上引入烟酸及对硝基苯甲酰基团,可显著提高其抗肿瘤活性。

藜芦胺降压作用的实验研究

目的探讨藜芦总生物碱中新型降压药物藜芦胺的降压作用。方法从藜芦总生物碱中提取分离出藜芦胺单体,采用颈动脉直接测压法和尾动脉间接测压法,测定其对正常猫血压及高血压模型大鼠血压的影响。结果经十二指肠或灌胃给药,藜芦胺对正常猫、SHR和肾性高血压大鼠均有明显的降压和减慢心率作用,且其降压作用与剂量呈正相关。结论藜芦胺具有明显的降压作用,其降压作用与藜芦总生物碱相同或相似,提示藜芦胺是藜芦生物碱降压作用的主要活性成分之一。

藜芦中藜芦胺的HPLC-ELSD测定方法研究

目的:建立藜芦中藜芦胺的HPLC-ELSD测定方法。方法:采用岛津ODS-C18柱(4.6mm×250mm,4μm),以乙腈-0.1%三乙胺水溶液(50∶50)为流动相,ELSD为检测器,测定了10种不同来源藜芦中藜芦胺含量。结果:藜芦胺在0.36～3.6μg与峰面积呈良好线性关系,r=0.9998,平均回收率为100.9%(RSD2.3%,n=6)。结论:HPLC-ELSD测定藜芦胺方法简便、准确、重复性好,建立了藜芦药材含量测定项目。

响应面法优化藜芦胺的提取工艺

为了优化藜芦胺的提取工艺,采用响应面法优化提取时间、提取温度和料液比,分析并建立数学模型。结果表明,提取时间、提取温度、料液比对藜芦胺的提取量均有极显著影响(p<0.01);并确定最佳提取工艺参数为时间2h,提取温度75.0℃,料液比1∶9(g/mL)。在此优化条件下,20.0g干燥藜芦根提取得到藜芦胺的量为98.23mg,与模型预测值得比较误差为2.66%。与模型预测值吻合,说明所建立的模型符合实际操作。

N－甲基高藜芦胺新合成法

报道盐酸维拉帕米的重要中间体──Ｎ－甲基高藜芦胺的一种新的合成方法。系以愈创木酚为原料经甲基化、Ｆｒｉｅｄｅｌ－Ｃｒａｆｔｓ酰化反应、改良的Ｗｉｌｌｇｅｒｏｄｔ－Ｋｉｎｄｌｅｒ反应和还原脱硫反应制得。

HPLC法测定藜芦生品和醋制品中藜芦胺碱(veratramine)的含量

目的:建立HPLC法测定藜芦(Veratrum nigrumL.)生品和醋制品中生物碱藜芦胺碱(veratramine)的含量。方法:利用HPLC-UV色谱法测定。色谱柱为Scienhome Kromasil C18柱,流动相为乙腈∶水∶三乙胺=52∶48∶0.03,流速为1 ml/min,柱温25℃,检测波长230 nm。结果:藜芦胺碱在0μg^40μg内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9995(n=7);藜芦生品中藜芦胺碱平均回收率为97.7%,RSD为2.39%。结论:本法简单可行,准确可靠,可以作为藜芦生品和醋制藜芦中生物碱藜芦胺碱(veratramine)含量测定方法。藜芦醋制后使藜芦胺碱(veratramine)溶出率高于生品。

藜芦胺对破骨细胞分化的影响

目的为了探索一种可能的、副作用小、疗效准确的防治骨质疏松药物。方法在破骨细胞分化过程中加入藜芦胺进行药物干预,观察破骨细胞的形态。结果在进行藜芦胺干预的实验组,破骨细胞数量,大小均受到明显抑制。结论藜芦胺对RANKL诱导的破骨细胞分化具有明显的抑制作用,或可成为一种潜在的防治破骨细胞异常分化导致的相关疾病的药物。

藜芦胺人体血药浓度测定方法研究

研究快速、灵敏的藜芦胺人体血药浓度高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定方法,为藜芦胺血药浓度检测提供稳定可靠的测定方法.以非那西汀为内标,乙酸乙酯提取血浆样品,样品处理完毕后,以乙腈-10 mmol/L醋酸铵(氨水调p H至8.8)作为流动相,正离子模式下,采用多反应监测(MRM)定量,藜芦胺定量离子对m/z:410.1/295.1,非那西汀定量离子对m/z:180.2→110.0.结果表明藜芦胺在0.201~6.45 ng/m L范围内线性良好,连续3批标准曲线相关系数r均大于0.99(权重1/X2),定量下限为0.201 ng/m L;高、中、低3种质量浓度的日内、日间精密度(RSD)≤15.11%,准确度介于96.52%~102.42%;基质效应不影响测定.所建LC-MS/MS方法快速、灵敏、专属性强、重现性高,适用于藜芦胺人体血药浓度测定.

藜芦胺和12β-羟基藜芦酰棋盘花碱在小鼠体外肝代谢研究

采用LC-MS/MS方法对小鼠肝微粒体中藜芦胺(veratramine,VAM)和12β-羟基藜芦酰棋盘花碱(12β-hydroxylveratroylzyga-denine,VOG)的代谢产物进行分析,结合体内VAM和VOG及其代谢物的分析结果,推测VAM和VOG在小鼠体外肝代谢规律.结果显示,VAM在小鼠肝微粒体孵化体系中检测到7个代谢产物,其代谢途径为羟基化、磺酸化、甲基化,其中甲基化是VAM I相代谢的主要代谢途径.VOG在小鼠肝微粒体孵化体系中检测到7个代谢产物,其代谢途径为酯键水解、脱氢、酯键水解加脱氢、羟基化、酯键水解加乙酰化,其中酯键水解是其I相代谢的主要代谢途径.以上结果表明,VAM和VOG在小鼠肝微粒体孵化体系中主要进行I相代谢反应,VAM和VOG的主要代谢产物分别为甲基化代谢产物和酯键水解产物.

12β-羟基藜芦酰棋盘花胺对小鼠小脑和大脑皮层组织DNA损伤的影响

目的探讨12β-羟基藜芦酰棋盘花胺(12β-hydroxylveratroylzygadenine,Vog)引起小鼠小脑和大脑皮层组织DNA损伤的影响。方法取132只雄性昆明种小鼠,随机分为空白组,Vog高(2.50μmol/kg)、低剂量组(0.25μmol/kg),给药7 d。采用彗星实验检测小脑和大脑皮层DNA损伤及修复情况;酶联免疫法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)、醌氧化还原酶(NQO1)含有量;比色法测定小脑和大脑皮层活性氧自由基(ROS)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含有量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;RT-PCR检测小脑和大脑皮层8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(Ogg1)和血红素加氧酶-1(Ho-1)mRNA表达。结果 Vog明显提高小鼠小脑和大脑皮层MDA、ROS、NO以及尿液中8-OHd G含有量,降低GSH-Px和T-SOD活力,以及NQO1含有量,上调Ogg1表达。停药后第3天DNA修复接近正常水平,8-OHd G含有量接近正常水平。结论 Vog可能引起氧化应激,导致DNA损伤。Vog同时上调Ogg1表达,为抗氧化防御状态和DNA修复系统的代偿性调节。

藜芦有效成分提取工艺优化

[目的]借助正交实验与统计分析软件(JMP)实验设计模型优化藜芦有效成分的提取工艺。[方法]采用单因素实验、正交实验优化乙醇体积分数、液料比、提取时间、提取次数,通过分析芥芬胺和藜芦胺的含量差异确定提取工艺。[结果]模型所得最佳工艺参数与正交实验结果相符,为乙醇体积分数70%,时间2 h,提取3次,液料比15∶1(mL/g)。在此工艺下,芥芬胺和藜芦胺含量分别为1.60、2.98 mg/g,相对标准偏差(RSD)分别为1.0%、1.1%。[结论]该提取工艺稳定,可用于藜芦中有效成分的提取。

亚胺白藜芦醇抗氧化性质的理论研究

本文采用量子化学的密度泛函理论(DFT)方法,从静态与动态两大方面分析了亚胺白藜芦醇不同位置酚羟基在不同溶剂中抗氧化活性的能力大小。从前线分子轨道初步分析了其抗氧化活性位点,通过对化合物酚羟基键解离焓(BDE)、电离势(IP)、质子解离焓(PDE)、质子亲和势(PA)和电子转移焓(ETE)等参数的研究,分析了一步抽氢反应机制(HAT)、逐步质子转移-电子转移机制(SET-PT)、质子优先损失电子转移机制(SPLET)三种反应机制,进一步确定了亚胺白藜芦醇的抗氧化活性位点。探讨了亚胺白藜芦醇分子不同位置酚羟基清除·OH和·OOH的抗氧化机理,得到了该分子与·OH和·OOH发生抽氢反应时的过渡态结构。计算结果表明,在溶剂中亚胺白藜芦醇分子C4’位上酚羟基活性最高,发生抽氢反应时所需能垒最小,是最大可能的活性位点。在非极性溶剂中HAT是主要的机制;在极性溶剂中SPLET机制是主要的。

天目藜芦生物碱成分研究

目的研究天目藜芦(Veratrum schindleriLoes.f.)生物碱成分。方法利用酸碱处理及硅胶柱色谱进行分离,通过理化性质和波谱数据鉴定结构。结果分离并鉴定了其中5个生物碱成分,分别是异红介藜芦碱(Ⅰ)、藜芦胺(Ⅱ)、介藜芦碱(Ⅲ)、藜芦酰棋盘花碱(Ⅳ)、藜芦托素(Ⅴ)。结论上述5个生物碱均为首次从该植物中被发现。

藜芦中化学成分

对藜芦的化学成分进行提取,纯化,分析。在碱性条件下用95%乙醇提取,正己烷/乙酸乙酯(v/v=7/3)萃取浓缩液,运用高效液相色谱分析萃取液。液相色谱条件为:色谱柱WATO-54275waters C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈:0.05%甲酸=20/80～35/65 12min流速:1.0mL.min-1;检测波长:215nm;柱温:30℃。发现藜芦植物中有环杷胺的存在,萃取液经过硅胶色谱法分离纯化后,运用高效液相色谱-紫外及质谱,核磁方法,检测并鉴定出析出的2种白色固体分别是藜芦胺和介芬碱。

基于HPLC法研究苦参藜芦反药对配伍禁忌机制

目的采用HPLC法,建立苦参中氧化苦参碱、苦参碱,藜芦中藜芦胺的含量测定方法,研究苦参单煎液、藜芦单煎液与不同配伍比例合煎液中3种成分的变化规律,从化学物质基础层面,初步阐述苦参藜芦的配伍禁忌机制。方法制备苦参单煎液、藜芦单煎液与不同配伍比例合煎液,采用Wonda Sil C18-WR色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以K_2HPO_4·3H_2O的水溶液(浓度20 mmol·L^(-1),H_3PO_4调pH至7.10)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱。检测波长:220 nm,进样量:20μL,柱温:30℃,流速:1.0 m L·min^(-1),依次进样分析。结果氧化苦参碱、苦参碱和藜芦胺质量浓度分别在30.00~960.00 mg·L^(-1)、15.00~480.00 mg·L^(-1)、12.50~400.00 mg·L^(-1)内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.999 9、0.999 9、0.999 6;苦参藜芦(质量比为1∶1)合煎液中,三者的平均回收率分别为99.4%、98.6%和97.2%;RSD分别为0.9%、1.1%和1.2%(n=6)。结论建立的方法适用于研究苦参单煎液、藜芦单煎液与不同配伍比例合煎液中氧化苦参碱、苦参碱和藜芦胺的变化规律。

6,7-二甲氧基异喹啉-1-甲酸乙酯的高效合成

以高藜芦胺为原料,先与草酸二乙酯酰胺化,再经一锅法反应关环、氧化制得6,7-二甲氧基-异喹啉-1-甲酸乙酯,并对反应条件进行优化筛选,反应条件优化后总收率达86.4%。产物及中间体结构经1H NMR、13C NMR鉴定。操作简单、反应条件温和,具有工业应用前景。

ZY2气雾剂小型猪在体透皮药代动力学研究

目的建立一种小型猪血浆藜芦胺的检测方法,研究ZY2气雾剂在不同给药面积、给药量下,检测目标物藜芦胺在小型猪体内的暴露量-给药面积-剂量关系。方法选用健康普通级巴马小型猪,采用自身交叉实验设计,间隔一周后自身交叉给药,分别给予气雾剂50喷(给药面积10cm×20cm)、100喷(给药面积16cm×25 cm)。于给药前(0h)和给药完成后0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、11.5、12.0、12.5和24h,眼底静脉窦采血,采用HPLC-MS/MS法检测血浆样品中藜芦胺浓度。结果1号雌性小型猪进行第一批试验后,仅在12h就检测到藜芦胺,浓度为0.0139ng·mL-1;第二批试验在0.5、1.0和4.0h检测到藜芦胺,1.0h时浓度最高达0.0583ng·mL-1。2号雄性小型猪进行第一批试验后,仅在0.5、1.0、2.0、11.0、11.5和12.0h检测到藜芦胺,0.5h浓度最高达0.676 ng·mL-1;第二批试验后,仅在0.5、4.0、11.0、11.5和12.0 h能检测到藜芦胺,4.0 h浓度最高达0.272 ng·mL-1。结论建立了一种灵敏、准确、稳定的HPLC-MS/MS测定小型猪血浆中藜芦胺的方法。小型猪自身交叉试验所测得到的藜芦胺血药浓度均极低,故不能有效评估ZY2气雾剂中藜芦胺在小型猪体内的暴露量,进而无法准确有效评估其暴露量-给药面积-剂量的关系。

藜芦与人参配比毒性与生物碱类成分变化的相关性研究

目的探索中药"十八反"中藜芦-人参药对的毒性与生物碱类成分的关系。方法通过动物毒性实验比较藜芦与人参不同配比的毒性,采用超高效液相色谱-四级杆/飞行时间质谱联用(UPLC/Q-TOFMS)技术检测藜芦与人参1∶2.63配比的合煎液、单煎后合并液(简称合并液)、合并液再煎液中生物碱类成分;Mass Lynx 4.1软件分析生物碱类成分的变化。结果动物毒性实验显示藜芦与人参1∶2.63配比时动物死亡较多,且此时合煎液与合并液毒性差别最为明显。将合并后再煎液可能引起物质变化的两个因素(即毒性生物碱的溶出增加和药物相互反应)单一化,即去除溶出影响因素时突显的药物本身化学反应的影响,可见藜芦胺和芥芬胺在合煎后溶出量增大,生物碱成分增加;计米亭碱、3-当归酰棋盘花胺在合煎液及合并液再煎液中的量均升高,提示可能是化学反应导致相关成分溶出增多。结论藜芦与人参合用后毒性增大,可能与生物碱的溶出量增加及药物相互作用密切相关。