藤梨根正丁醇提取物通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导乳腺癌细胞自噬和凋亡的实验研究

目的探讨藤梨根正丁醇提取物体外对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和自噬的影响及可能分子机制。方法MTT法、Annexin V/PI双染法、Hoechst33342染色法检测藤梨根正丁醇提取物对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡活性的影响。转染pEGFP-LC3自噬指示质粒观察细胞内自噬流。Western blotting法检测藤梨根正丁醇提取物对MDA-MB-231细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-β(LC3-Ⅱ)、UNC-51样激酶1(ULK1)、Beclin 1蛋白以及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白磷酸化水平。设置空白对照组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和mTOR抑制剂雷帕霉素组,MTT法检测藤梨根正丁醇提取物对3组细胞增殖抑制作用。结果藤梨根正丁醇提取物可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性。经Annexin V/PI双染法检测,藤梨根正丁醇提取物作用于MDA-MB-231细胞24 h后,细胞凋亡率为(37.88±5.16)%,高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,藤梨根正丁醇提取物作用组p-Beclin1/Beclin1、p-ULK1/ULK1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达量升高,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、mTOR/p-mTOR蛋白表达量却明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,500μg/ml藤梨根正丁醇提取物对3-MA组增殖抑制率降低,对雷帕霉素组细胞增殖抑制率升高(P<0.05)。结论藤梨根正丁醇提取物可通过抑制PI3K/Akt-mTOR信号通路磷酸化水平,上调MDA-MB-231细胞的自噬活性和凋亡活性,并抑制细胞增殖。