藤黄新酸抑制肝癌细胞生长的机制研究

在肿瘤细胞中蛋白酶体活性的抑制可以导致细胞凋亡和周期阻滞.藤黄新酸(TH2)是从中药藤黄中提取的一个新的(口山)酮类衍生物.研究结果显示,TH2可以抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖,诱导细胞产生凋亡,且呈浓度和时间依赖性.同时,10μmol/L的TH2与细胞作用24h后,可以导致早期凋亡标志性蛋白PARP发生裂解.在体外采用特异性荧光底物检测TH2对蛋白酶体活性的影响,发现该化合物能够抑制蛋白酶体的糜乳蛋白酶样、胰蛋白酶样活性和谷氨酰后水解活性.抑癌基因p53是细胞内的蛋白酶体降解底物,TH2可使p53蛋白的降解受到阻滞,表达增加.由此可见,TH2具有抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,可能的分子机制与其抑制细胞内蛋白酶体活性、导致p53蛋白降解受阻有关.

新藤黄酸对CAL27细胞裸鼠移植瘤增殖及凋亡作用的研究

目的:探讨新藤黄酸(GNA)对CAL27细胞裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影响。方法:将18只SPF级裸鼠随机分为对照组、GNA低剂量组及GNA高剂量组(n=6)。通过接种对数生长期的舌鳞癌CAL27细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,低及高剂量组裸鼠分别隔日静脉注射新藤黄酸8.0 mg/kg与16.0 mg/kg干预,对照组给予等量生理盐水。给药期间绘制肿瘤生长曲线,2周后处死裸鼠并取出肿瘤组织,计算抑瘤率。TUNEL法检测各组裸鼠移植瘤细胞凋亡;免疫组化法检测瘤体组织的AKT、Bcl-2与PI3K蛋白的表达水平;HE染色法检测新藤黄酸对正常组织器官的毒副作用。结果:GNA低及高剂量组裸鼠移植瘤生长缓慢,瘤重及瘤体积明显低于对照组(P<0.05),低和高剂量组抑瘤率分别为57.58%和83.68%。TUNEL结果表明,GNA低及高剂量组凋亡指数高于对照组;免疫组织化学结果表明,GNA低及高剂量组裸鼠肿瘤组织的AKT、Bcl-2及PI3K的表达显著低于对照组(P<0.05)。HE结果显示,GNA对正常组织器官无明显改变。结论:GNA可能通过调控肿瘤组织AKT、Bcl-2及PI3K等蛋白的表达,诱导CAL27细胞凋亡,抑制人舌鳞癌的发生发展,对正常组织器官无明显毒副作用。

新藤黄酸对急性淋巴细胞性白血病的调控机制

目的探究新藤黄酸对急性淋巴细胞性白血病细胞Nalm-6的增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制。方法使用不同浓度的新藤黄酸处理Nalm-6细胞,通过MTT实验、软琼脂克隆形成实验、transwell迁移实验与transwell侵袭实验来检测新藤黄酸对Nalm-6细胞增殖、迁移、侵袭的影响。通过凋亡坏死检测试剂盒检测Nalm-6细胞的凋亡情况,通过Western blot实验检测Nalm-6细胞中c-Myc、P21蛋白表达情况。结果新藤黄酸可呈剂量依赖性抑制Nalm-6细胞的增殖、克隆形成、迁移与侵袭,导致Nalm-6细胞凋亡,下调c-Myc表达,上调P21表达。结论新藤黄酸可通过调控c-Myc和P21抑制Nalm-6,有望为急性淋巴细胞性白血病提供新的潜在治疗选择。

基于RNA-seq测序技术研究新藤黄酸抑制黑色素瘤增殖的作用机制

目的:通过分析新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)对黑色素瘤移植瘤模型小鼠mRNA表达谱的影响,探讨GNA治疗黑色素瘤可能的作用机制。方法:体外通过MTT法测细胞存活率和倒置显微镜下观察细胞形态来研究GNA对于黑色素瘤细胞的抑制作用。体内实验中通过对比HE(hematoxylin-eosin)染色和免疫组化(Ki-67)的结果观察GNA对黑色素瘤小鼠移植瘤生长的影响,并记录瘤重和瘤重比。RNA-seq测序技术对GNA中剂量组与模型组进行测序,并对筛选出的mRNA进行GO和KEGG分析,最后利用实时定量荧光PCR验证差异表达基因的筛选结果。结果:不同剂量的GNA作用于黑色素瘤小鼠模型后,模型小鼠的肿瘤组织内出现大面积坏死,肿瘤生长受到明显地抑制。mRNA测序共鉴定出36个差异表达的mRNA,其中30个上调,6个下调,根据GO和KEGG分析的基因组邻接预测mRNA的可能功能。采用实时荧光定量PCR技术进一步验证所选差异mRNA的表达,结果显示Cidec、Mylk4、Ces1d和Igkv9-123的mRNA表达上调,Ryr3和Hapln1的mRNA表达下调。结论:GNA可以体内外抑制黑色素瘤细胞的增殖,其机制与调控细胞因子-细胞因子受体相互作用、NF-κB、MAPK等通路上的mRNA表达有关。

叶酸靶向修饰载新藤黄酸纳米结构脂质载体的研究

[目的]构建叶酸(FA)修饰的载新藤黄酸纳米结构脂质载体(FA-GNA-NLC),提高新藤黄酸(GNA)的生物利用度,增强其在肿瘤部位的蓄积,降低全身毒副作用,并对该制剂进行理化表征和体内外药效学评价。[方法]通过乳化蒸发-低温固化法构建包载GNA的纳米结构脂质载体(GNA-NLC),通过聚乙二醇(PEG)链将FA连接到NLC表面,对制剂的粒径、Zeta电位和外观形貌进行初步表征。以小鼠乳腺癌4T1细胞和人乳腺癌MDA-MB-231细胞为体外模型评价其对FA-NLC的摄取能力,以4T1细胞为体外细胞模型评价FA-GNA-NLC对肿瘤细胞的增殖抑制作用。构建乳腺癌小鼠模型,进行组织分布和体内抗肿瘤药效实验。[结果]制备得到形貌圆整、粒度均一、粒径为(16.01±0.03)nm、电位为(-6.8±0.59)mV、包封率为99%的FA-GNA-NLC。细胞毒性实验及体内抗肿瘤实验表明FA-GNA-NLC具有良好的抗肿瘤效果,细胞摄取实验及组织分布实验表明FA-NLC具有更好的靶向性,增强了药物在靶细胞、靶组织的蓄积。[结论]构建的FA-GNA-NLC增强了GNA的抗肿瘤活性,提高了GNA在肿瘤部位的蓄积,可以作为GNA的潜在载体,用于增强肿瘤靶向性,提高肿瘤治疗效果。

新藤黄酸增强仑伐替尼在肝细胞癌中的 敏感性及其机制研究

目的探究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)协同仑伐替尼对肝细胞癌的抑制、促进肝细胞癌的凋亡作用及其机制。方法采用H22肝癌细胞建立H22移植瘤小鼠模型,将模型复制成功的小鼠随机分为模型组(生理盐水),GNA组(20 mg/kg),仑伐替尼组(10 mg/kg),GNA(20 mg/kg)+仑伐替尼(10 mg/kg)组,每组10只,各组小鼠给予相应药物连续灌胃2周,每日1次;比较各组小鼠的肿瘤质量和体质量,观察GNA联合仑伐替尼对肿瘤生长的作用;苏木精-伊红染色观察GNA联合仑伐替尼对移植瘤模型小鼠各脏器的影响;TUNEL染色检测移植瘤模型小鼠肿瘤组织中细胞凋亡情况;Western blot检测移植瘤模型小鼠肿瘤组织中孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistant protein,BCRP)、细胞色素P4503A4酶(cytochrome P4503A4,CYP3A4)、P53、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)、cleaved-caspase-3蛋白的表达水平。结果与模型组比较,GNA+仑伐替尼组肿瘤生长得到明显抑制(P<0.05),并且优于GNA组和仑伐替尼组(P<0.05);给药后小鼠的主要器官(心、肝、脾、肺、肾)均未出现明显病变;与模型组比较,各给药组均发生明显的细胞凋亡,GNA+仑伐替尼组细胞凋亡较仑伐替尼组更加明显;GNA+仑伐替尼组肿瘤组织中PXR、P-gp、BCRP、CYP3A4、Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.05),P53、Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。结论GNA与仑伐替尼联用可以发挥协同作用,GNA增强仑伐替尼对肝细胞癌的敏感性,其分子机制可能与下调核受体PXR的表达水平,从而影响代谢酶CYP3A4,转运体P-gp,BCRP和凋亡蛋白P53、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3的表达有关。

新藤黄酸体内外抗肿瘤作用研究

目的初步探讨新藤黄酸的体内外抗肿瘤作用。方法采用MTT方法观察新藤黄酸对多种肿瘤细胞的增殖抑制作用;采用4、8、16、32mg/kg剂量新藤黄酸作用于人肿瘤裸小鼠(BALB/c-nude)模型,观察新藤黄酸的体内抗肿瘤作用。结果MTT法显示新藤黄酸对培养的人肿瘤细胞(人结肠癌细胞HCT-8、人肝癌细胞Bel-7402、人胃癌细胞BGC-823、人非小细胞肺癌细胞A549、人卵巢癌细胞A2780)增殖有一定的抑制作用,作用72h的IC50在1.75～3μmol/L;8、16、32mg/kg新藤黄酸iv给药,对人非小细胞肺癌A549细胞肿瘤移植的模型小鼠有一定的抑制肿瘤增长作用(P<0.05)。但4～16mg/kg剂量的新藤黄酸iv给药,对人肝癌Bel-7402肿瘤模型的抑制生长作用不明显。结论新藤黄酸能够抑制培养的肿瘤细胞生长;iv给药时对A549细胞肿瘤移植的模型小鼠肿瘤增殖有明显的抑制作用。

HPLC法测定藤黄中藤黄酸和新藤黄酸的含量

目的建立藤黄中藤黄酸和新藤黄酸的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱为HypersilODSC18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%冰醋酸水溶液(93∶7),流速1.0mL/min;检测波长为360nm,外标法定量。结果藤黄酸线性范围为2.45～49μg,回归方程Y=11334.8+232781X(r=0.9999,n=5),平均回收率99.3%,RSD=1.02%(n=6);新藤黄酸线性范围为2.55～51μg,回归方程Y=75197.5+226301X(r=0.9997,n=5),平均回收率100.5%,RSD=1.48%(n=6)。结论本法精密度高,重复性好,简便、可靠,可作为藤黄的质量控制方法。

新藤黄酸诱导人胃癌MGC-803细胞线粒体途径凋亡的实验研究

目的：研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,并探讨其抗肿瘤的作用机制。方法：MTT法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术（FCM）检测MGC-803细胞凋亡率;H2DCFDA探针法流式细胞术检测细胞内活性氧的含量;罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位（△Ψm）的改变;Western blot法检测细胞内P53蛋白的表达变化。结果：新藤黄酸在1.0~12.0μmol/L浓度范围内可抑制人胃癌细胞MGC-803细胞的增殖;增加细胞内活性氧的含量;降低线粒体膜电位;诱导细胞发生凋亡并呈浓度依赖性;Western blotting结果显示,新藤黄酸明显升高MGC-803细胞凋亡诱导基因P53的表达。结论：新藤黄酸可诱导人胃癌MGC-803细胞的凋亡,其机制可能与促进P53介导的线粒体途径依赖的细胞凋亡相关。

新藤黄酸诱导HepG2细胞凋亡与Bax及Bcl-2的关系

中药藤黄（gamboge）系藤黄科植物藤黄树（Garcinia hanburyi Hook.F.G）所分泌的干燥树脂,近年来,藤黄的抗肿瘤作用受到高度关注。已有研究证实,新藤黄酸（neo-gambogic acid,NGA）为藤黄抗肿瘤作用的主要有效成分之一[1-3]。肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之一[4],同时也是第三大引起患者死亡的肿瘤[5]。

新藤黄酸脂质体冻干粉的制备及其包封率测定

目的制备新藤黄酸脂质体冻干粉并测定其包封率。方法采用薄膜-超声法结合冷冻干燥法制备新藤黄酸脂质体冻干粉,以冷冻超速离心-高效液相色谱法测定包封率。结果电镜下观察所制备的脂质体形态规整,平均粒径为128.30 nm,包封率为83.74%。结论此法制备了包封率较高的新藤黄酸冻干脂质体。

新藤黄酸大鼠在体肠吸收动力学研究

目的：探讨新藤黄酸在大鼠各肠段的吸收动力学特征，为设计新藤黄酸新型给药系统提供可靠的生物药剂学依据。方法：采用大鼠在体肠灌流吸收实验模型，并考察新藤黄酸在浓度为3．0、10、30ug／mL、以及不同肠段（结肠、回肠、空肠、十二指肠）对新藤黄酸吸收的影响，用HPLC－UV测定新藤黄酸的浓度。结果：在3．0～30ug／mL范围内新藤黄酸的浓度与吸收速率成线性关系，新藤黄酸在结肠、回肠、空肠、十二指肠的吸收速率常数（K。）分别为（0．03944±0．00158）、（0．04012±0．00103）、（0．04104±0．00124）、（0．08620±0．00272）h_。。结论：新藤黄酸在大鼠肠道符合一级动力学的吸收过程，在大鼠肠道为被动扩散的吸收机制。新藤黄酸在大鼠的各个肠道都有吸收，因此将新藤黄酸设计为控释制剂是可行的。

新藤黄酸抑制人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的实验研究

目的探讨新藤黄酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制情况及其作用机制。方法 0.5～20μg/ml新藤黄酸处理MCF-7细胞72h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MCF-7细胞增殖抑制率;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测线粒体跨膜电位变化;Western blotting检测Fas、FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 0.5～20μg/ml新藤黄酸均能够抑制MCF-7细胞增殖,且增殖抑制作用呈浓度依赖,半数抑制浓度(IC50)为1.763μg/ml。0.5～3.0μg/ml新藤黄酸即可诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡作用呈时间和浓度依赖。0.5μg/ml新藤黄酸处理MCF-7细胞48h后早期凋亡率为3.7%,总凋亡率为7.2%,72h早期凋亡率为6.7%,总凋亡率为13.7%;3μg/ml新藤黄酸48h后早期凋亡率为69.5%,总凋亡率为71.7%,72h早期凋亡率为76.9%,总凋亡率为81.5%。0.5、1.0、1.5μg/ml新藤黄酸导致线粒体跨膜电位下降的细胞比例升高,促凋亡相关蛋白FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平呈浓度依赖性上升,Fas和Bax蛋白表达水平变化不大,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平则呈浓度依赖性下降。结论新藤黄酸通过诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡,抑制细胞增殖,其诱导凋亡的分子机制与死亡受体及线粒体凋亡途径密切相关。

新藤黄酸对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移的影响及机制研究

目的:研究新藤黄酸对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其机制。方法:不同浓度新藤黄酸(0.00、0.63、1.25、2.50、5.00、10.00 mg/L)作用于HeLa细胞72 h,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;荧光显微镜和DNA ladder检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移;RT-PCR、Western blot检测BCL-2、BAX、NF-κB及E-cadherin的mRNA和蛋白表达。结果:不同浓度新藤黄酸作用HeLa细胞72 h后,细胞抑制率随药物浓度升高而升高;穿过Transwell小室的细胞数随药物浓度升高而减少;BCL-2、NF-κB mRNA及蛋白表达随新藤黄酸浓度升高而降低;BAX、E-cadherin mRNA及蛋白表达随新藤黄酸浓度的升高而升高。结论:新藤黄酸在一定范围内能以剂浓度依赖性抑制HeLa细胞增殖,促进其凋亡,并抑制其迁移。

薄层扫描法测定不同温度藤黄炮制品中藤黄酸及新藤黄酸的含量

薄层扫描法测定不同温度藤黄炮制品中藤黄酸及新藤黄酸的含量刘幸平，程康华，叶定江（南京中医药大学２１００２９南京林业大学２１００３７）关键词滕黄，藤黄酸，新藤黄酸，薄层扫描法藤黄为藤黄科植物（ＧａｒｃｉｎｉａｈａｎｂｕｒｙｉＨｏｏｋＦ．）分泌的干燥树脂...

大鼠血浆中的新藤黄酸HPLC测定及其药代动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中新藤黄酸浓度的HPLC方法,并用于新藤黄酸在大鼠体内的药代动力学研究。方法以藤黄酸为内标,建立大鼠血浆中新藤黄酸的HPLC测定方法。采用该方法测定大鼠单剂量静脉注射1、2、4 mg.kg-1新藤黄酸后不同时间点大鼠血浆中的新藤黄酸的浓度,对其血药浓度-时间采用BABP 3.0软件拟合,计算药动学参数。结果血浆中新藤黄酸在0.07～18.0 mg.L-1浓度范围,其线性关系良好(r=0.999),定量下限为0.07 mg.L-1,提取回收率分别为大于70%,其日内、日间RSD均小于10%。新藤黄酸以1、2和4 mg.kg-1静脉给药后,在大鼠体内的T12分别为(43.61±0.61)、(46.07±2.11)和(46.73±1.14)min,AUC0-t分别为(158.52±6.27)、(211.13±9.33)和(361.37±14.97)min.mg.L-1。结论所建立的HPLC法样品前处理简便、操作简便、能满足新藤黄酸在大鼠体内的药代动力学研究。

透明质酸修饰新藤黄酸脂质体的制备及其在大鼠体内药动学及肝靶向研究

目的考察透明质酸修饰的新藤黄酸脂质体在大鼠体内的药动学过程及其肝靶向性。方法大鼠尾静脉注射新藤黄酸溶液(GNA)、新藤黄酸脂质体(GNA-L)和透明质酸修饰的新藤黄酸脂质体(HAGNA-L),分别于给药后不同时间点取血及肝脏,样品经处理后进行HPLC分析,考察3种制剂的药动学参数及肝靶向性差异。结果研究结果显示,GNA、GNA-L和HA-GNA-L血浆半衰期(t_(1/2))分别为34.575、70.780和154.588 min,AUC(0～∞)分别为104.379、209.656和414.818μg·min·m L^(-1)。肝靶向实验结果表明,HA-GNA-L在肝脏中的分布显著高于GNA和GNA-L。结论与GNA和GNA-L相比,HA-GNA-L具有优异的药物代谢动力学过程,肝脏靶向指数高,对肝脏具有特异的靶向性。

炮制对藤黄中新藤黄酸含量的影响

采用高效液相色谱对藤黄生品及６种炮制品进行了分析。结果表明，生品与炮制品检出组分一致，新藤黄酸的含量无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。

新藤黄酸体外抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用

目的研究新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用及其相关机制。方法不同浓度GNA分别作用A549细胞24、48和72 h,甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测药物对A549细胞增殖的抑制率,吖啶橙/溴化乙啶（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）染色荧光显微镜检测细胞的凋亡;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）法检测GNA对A549细胞损伤作用。结果 MTT法检测结果显示,GNA在0-8μmol/L浓度范围内、24-72 h时间范围内对A549的生长有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系;相差显微镜观察表明GNA作用A549细胞48 h后,细胞变圆,呈半贴壁状态;AO/EB染色荧光显微镜观察显示GNA作用48 h后,细胞出现典型的凋亡特征;LDH实验进一步证实GNA在0-4μmol/L浓度范围内对正常细胞未见明显毒性作用。与空白对照组比较,8μmol/L GNA显著降低LDH释放。结论 GNA具有体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖的作用,在0-4μmol/L浓度范围内GNA可能是通过诱导细胞凋亡而发挥抑制A549细胞增殖的作用。

新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

目的:研究新藤黄酸(Gambogenic Acid,GNA)对黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用,并探讨细胞凋亡机制在其中的角色。方法:MTT法检测新藤黄酸对B16细胞生长和增殖的作用;采用acridine orange/ethidium bromide(AO/EB)荧光染色观察新藤黄酸对B16细胞的影响;采用流式细胞仪检测新藤黄酸处理B16细胞后细胞内活性氧(ROS)的产生;Western blotting法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的变化。结果:MTT结果表明新藤黄酸在一定浓度下对黑色素瘤B16细胞的增殖有明显抑制作用,并呈一定的时效和量效关系;AO/EB染色观察表明新藤黄酸处理的细胞呈现明显的凋亡状态;新藤黄酸处理细胞后,细胞内活性氧的急剧增加,与未给药组比较有统计学意义(P<0.01),同时线粒体膜电位也随之下降;Western blotting检测发现新藤黄酸作用后cleaved-Caspase-3蛋白表达量增加。结论:新藤黄酸在一定的时间和浓度范围内能够抑制黑色素瘤B16细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡。