薄层层析和反相高效液相色谱检测木瓜蛋白酶催化合成的Aspartame及其中间产物

本文报道以ＴＬＣ和ＨＰＬＣ法检测以木瓜蛋白酶在水－乙酸乙酯两相反应体系中合成的Ａｓｐａｒｔａｍｅ及其中间产物（Ⅰ）（Ⅱ）。ＴＬＣ条件为：展开剂（正丁醇：冰醋酸：水＝３：１：１），展开时间（４～５ｈ），检测（荧光检测２５３．７ｎｍ，１％茚三酮丙酮溶液显色）。ＨＰＬＣ条件为：流动相（乙腈：水＝４５：５５），流速１ｍｌ／ｍｉｎ，检测（紫外检测２６０ｎｍ），进佯量２０ｕｌ，灵敏度６，纸速１～４ｍｍ／ｍｉｎ，分析周期１０ｍｉｎ。该方法简便、准确、灵敏度高。用该方法也证实以木瓜蛋白酶催化合成的Ａｓｐａｒｔａｍｅ及其中间产物（Ⅱ）与以嗜热蛋白酶（Ｔｈｅｒｍｏｌｙｓｉｎ）催化合成的Ａｓｐａｒｔａｍｅ及其中间产物（Ｃｂｚ－Ａｓｐ－ＰｈｅＯＭｅ）完全一致。