虎杖苷通过AMPK/Nrf2途径调控糖尿病大鼠伤口愈合和血管生成的机制研究

目的:基于AMPK/Nrf2途径探讨虎杖苷(PD)对糖尿病(DM)大鼠伤口愈合和血管生成的作用机制。方法:建立DM大鼠模型,将45只DM大鼠随机分为DM组、DM+PD组和DM+PD+ML385组(n=15),另取15只健康大鼠作为对照组,建立伤口愈合受损的模型,DM+PD组大鼠予PD灌胃(20mg/kg),DM+PD+ML385组大鼠在PD的基础上腹腔注射ML385抑制AMPK/Nrf2通路(30mg/kg)。比较各组大鼠伤口愈合情况,通过免疫组化染色检测分析微血管密度,Westernblot及RT-qPCR分析转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)以及AMPK/Nrf2通路转录和翻译水平。结果:四组小鼠的上述指标比较差异显著(P<0.05)。DM组的伤口愈合百分比、生成血管数目、TGF-β1和VEGF蛋白水平、AMPK和Nrf2 mRNA和蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。DM+PD组的伤口愈合百分比、生成血管数目、TGF-β1和VEGF蛋白水平、AMPK和Nrf2mRNA和蛋白表达水平显著高于DM组(P<0.05)。DM+PD+ML385组的伤口愈合百分比、生成血管数目、TGF-β1和VEGF蛋白水平、AMPK和Nrf2 mRNA和蛋白表达水平显著低于DM+PD组而显著高于DM组(P<0.05)。结论:PD可能通过调控AMPK/Nrf2通路诱导血管生成,进而促进DM模型大鼠的伤口愈合。

虎杖苷通过Hippo/YAP通路影响甲状腺癌8505C细胞的恶性生物学行为和顺铂敏感性

目的:探究虎杖苷通过Hippo/Yes相关蛋白(YAP)通路对人甲状腺癌8505C细胞的恶性生物学行为和顺铂(DDP)敏感性的影响。方法:体外培养8505C细胞,构建其DDP耐药细胞8505C/DDP,用CCK-8法检测0、25、50、75、100 nmol/L虎杖苷处理8505C和8505C/DDP细胞的增殖能力,以筛选虎杖苷的最佳作用浓度。将8505C细胞分为对照组、虎杖苷组、空载组、虎杖苷+YAP1过表达组;将8505C/DDP细胞分为对照组、DDP组、DDP+虎杖苷组、DDP+空载组、DDP+虎杖苷+YAP1过表达组。WB法检测各组8505C细胞中Hippo/YAP通路[YAP1、转录辅激活因子(TAZ)]和EMT(E-cadherin、N-cadherin)相关蛋白,8505C/DDP细胞中YAP1、TAZ、耐药相关蛋白[P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)]、凋亡相关蛋白(C-caspase-3、BAX、Bcl-2)的表达。Transwell小室和细胞划痕实验分别检测各组8505C、8505C/DDP细胞的侵袭、迁移能力。结果:虎杖苷可显著抑制8505C细胞的增殖活性(P<0.05)明显抑制8505C细胞中YAP1、TAZ蛋白、N-cadherin的表达(均P<0.05),提升E-caderin蛋白的表达(P<0.05),显著抑制8505C细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.05),而8505C/DDP细胞对低浓度的虎杖苷具有耐药性(P<0.05);过表达YAP1则可逆转虎杖苷对8505C细胞的影响。50 nmol/L虎杖苷明显抑制DDP处理的8505C/DDP细胞中YAP1、TAZ、P-gp、MRP1、Bcl-2的蛋白的表达(均P<0.05),提升cleaved caspase-3、BAX蛋白的表达(均P<0.05)并诱导其细胞凋亡(P<0.05),过表达YAP1则可逆转虎杖苷对8505C/DDP细胞的影响。结论:虎杖苷抑制Hippo/YAP信号通路,从而抑制8505C细胞的恶性生物学行为和增强其对的DDP敏感性。

虎杖苷对间质性肺病模型小鼠免疫炎性代谢性损伤的影响

目的 探讨虎杖苷(Polydatin, PD)对博来霉素(Bleomycin, BLM)诱导肺间质病变小鼠的干预作用及机制。方法 采用SPF级雄性C57/BL6小鼠,体质量(20±2)g,经BLM气管内滴注诱导间质性肺病模型,将造模成功的30只小鼠按随机数表法分为模型组6只、阳性药组6只、PD高、中、低剂量组各6只,另选6只未造模小鼠作为正常对照组。正常对照组和模型组予蒸馏水10 ml/(kg·d),阳性药组给予泼尼松7.5 mg/(kg·d),PD高、中、低剂量组分别给予PD 200 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)剂量灌胃给药,其中PD高剂量组2次/d灌胃给药。干预4周后处死小鼠,采集肺组织标本。以HE染色观察肺组织病理改变;RT-PCR技术检测肺组织AMPKα1、PPARγ、PGC-1α mRNA转录水平;Western Blot技术检测肺组织AMPKα1、pAMPKα1、PPARγ、PGC-1α、HMGB1、TGF-β1、NF-κB p65蛋白表达水平。结果 模型组小鼠较正常对照组有明显病理改变(P<0.01),主要表现在肺组织炎症细胞浸润、间质纤维化;阳性药组肺组织炎症病变较模型组有改善(P<0.05);PD各治疗组小鼠出现肺组织炎症细胞浸润、间质纤维化较模型组有改善(P<0.05)。RT-PCR结果显示模型组小鼠肺组织中AMPKα1、PPARγ、PGC-1α mRNA转录水平较正常对照组有下降趋势,阳性药及PD各治疗组小鼠肺组织中AMPKα1、PPARγ、PGC-1α mRNA转录水平较模型组均有升高趋势;阳性药组及PD各组间变化无明显差异。Western Blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠肺组织中HMGB1、NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.01),AMPKα1、pAMPKα1、PPARγ、PGC-1α蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组及PD高剂量组AMPKα1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),PD高、低剂量组pAMPKα1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),PD中剂量组PPARγ蛋白表达水平明显升高(P<0.05);阳性药组HMGB1、PD低剂量组NF-κB p65蛋白表达水平明显下降(P<0.05),其余各治疗组HMGB1、TGF-β1、NF-κB p65较模型组均有下降趋势;阳性药组及PD各组间变化无明显差异。结论 PD能够改善CTD-ILD模型小鼠肺组织炎症病理损伤,改善肺间质纤维化病理改变,抑制免疫炎性损伤,其作用机制可能是通过激活AMPKα1/PPARγ/PGC-1α信号通路,抑制下游免疫炎性因子HMGB1、NF-κB的高表达,改善肺组织免疫炎性损伤;抑制纤维化细胞因子TGF-β1的释放,改善肺组织免疫炎性损伤及间质纤维化。

虎杖苷调节Akt/MDM2/p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的探讨虎杖苷(PD)调节蛋白激酶B/原癌基因MDM2/抑癌基因p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响。方法以人胆囊癌细胞株(GBC-SD)为研究对象,体外培养人胆囊癌细胞株(GBC-SD),使用浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,确定最佳实验浓度。将GBC-SD细胞分为对照组(Control组)、虎杖苷低、中、高浓度组(PD-L组、PD-M组、PD-H组)、虎杖苷+Akt激活剂组(PD+SC79组),Transwell小室法评价细胞的迁移能力,Hoechst染色观察细胞的凋亡,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,Western blot检测Akt、MDM2、p53磷酸化水平,建立荷瘤小鼠模型评价虎杖苷对胆囊癌肿瘤生长的影响。结果浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24 h,可显著抑制GBC-SD细胞的增殖活性,选择10、20、40 mmol/L的虎杖苷进行后续实验;与Control组比较,PD-L组、PD-M组、PD-H组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著降低,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PD-H组比较,PD+SC79组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著升高,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著降低(P<0.05);虎杖苷干预治疗后,小鼠移植瘤的生长速度显著降低(P<0.05)。结论虎杖苷可以通过调节Akt/MDM2/p53信号通路使细胞周期阻滞,抑制胆囊癌细胞增殖、迁移。

虎杖研究进展及质量标志物预测

虎杖是我国常用的大宗中药材,资源丰富且分布较广,具有广阔的开发利用前景。虎杖中化学成分类型丰富,包括二苯乙烯、醌、黄酮等类化合物,虎杖的药理作用主要体现在抗炎、抗氧化、抗病毒、抗菌、抗癌、肝保护、心血管保护、免疫调节等方面。在对其化学成分、药理作用综述的基础上,根据中药质量标志物(Q-marker)理论,从生源途径、化学成分有效性、化学成分可测性及不同配伍环境几方面对虎杖Q-marker进行预测分析,为明确虎杖的Q-marker和制定科学的质量标准提供参考。

虎杖根不同溶剂提取物的抗氧化活性研究

为探究虎杖根6种不同溶剂提取物的抗氧化活性,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、2,2-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)铵盐(ABTS)自由基清除法和总还原力检测法对6种不同溶剂虎杖根提取物进行抗氧化能力评价。选用抗氧化活性较强的95%乙醇提取物进行细胞层面内源性抗氧化能力的研究,评价其对抗氧化基因Nrf2、SOD、CAT、HO-1的调控作用。结果表明,相较于其他5种提取物,95%乙醇提取物的抗氧化能力最强且具有最高的多酚含量。95%乙醇提取物可显著增加Nrf2、SOD、CAT、HO-1等抗氧化基因的表达。95%虎杖根乙醇提取物具有较好的抗氧化活性,具有开发成为天然抗氧化剂的潜力。

一测多评法测定虎杖药材中6种成分的含量

目的建立一测多评法测定虎杖药材中6种成分的分析方法,并对其进行方法学考察,验证该方法的可行性与准确性。方法以大黄素为内参物,分别建立虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚的相对校正因子,计算其他5种成分的含量,用该方法测定不同产地虎杖药材中6种成分含量,同时利用外标法测定各成分含量,测得的结果与外标法测定值进行比较。结果9批不同产地的虎杖中6种有效成分采用一测多评法测得的结果与外标法测定值之间不存在显著性差异,6种成分在测定范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.1%~101.4%,RSD为1.0%~2.3%。结论一测多评法简单快捷,可用于测定虎杖药材中6种成分的含量,可为虎杖药材的质量控制及提取工艺的评价提供参考。

虎杖苷调节YAP1/TAZ信号通路对缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探究虎杖苷(PD)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法 将新生大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+Hippo通路抑制剂(PD高剂量+XMU-MP-1)组,每组10只。缺氧2周后,检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并计算肺动脉管壁厚度占总厚度的百分比(WT%)和管壁面积占总面积的百分比(WA%)。分离各组新生大鼠PASMCs,分为NC组、低氧(Hypoxia)组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+XMU-MP-1组。CCK-8和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)检测肺组织和PASMCs中Yes相关蛋白1(YAP1)、PDZ结合域的转录共刺激因子信号通路(TAZ)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠肺动脉管壁明显增厚,管腔变窄,RVSP、RVHI、WT%、WA%、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著升高(均P<0.05);与模型组相比,PD低、中、高剂量组大鼠肺动脉增厚减少,管腔变大,RVSP、RVHI、WT%、WA%、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著降低,且PD各组间差异存在剂量依赖性(均P<0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果。与NC组相比,Hypoxia组细胞A_(450nm)值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(均P<0.05);与Hypoxia组相比,PD低、中、高剂量组细胞A_(450nm)值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达显著升高,且PD各组间有剂量依赖性(均P<0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果。结论 PD可能通过抑制YAP1/TAZ信号通路抑制HPH新生大鼠PASMCs增殖,促进凋亡。

虎杖苷调节Sirt1-FoxO1信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响

目的 基于沉默信息调节因子1(silence information regulator1,Sirt1)-叉头状转录因子O1(forkhead transcription factor O1,FoxO1)信号通路研究虎杖苷(polydatin,PD)抑制高糖诱导的心肌细胞焦亡的作用机制。方法 以心肌细胞H9c2为研究对象,使用不同浓度PD处理筛选PD浓度。将细胞分为模型组、PD低、中、高剂量组(PD-L、M、H,20、40、80μmol/L)、空白对照(control)组、Sirt1抑制剂[PD-H+sirtinol (10μmol/L)]组。细胞计数试剂盒(cell counting Kit-8,CCK8)法检测细胞活性;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa)法检测细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量、白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平;二氯荧光素双醋酸盐(dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;流式细胞术检测细胞焦亡情况;实时荧光定量PCR检测细胞中Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3) mRNA、消皮素D(gasdermin D,GSDMD) mRNA表达水平;Western blot检测蛋白表达。结果 与control组比较,模型组细胞活性下降(P<0.01),经过PD不同浓度处理后,细胞活性逐渐上升(P<0.01);与control组比较,模型组LDH释放量、IL-1β水平、ROS水平、细胞焦亡率、NLRP3 mRNA、GSDMD mRNA表达、焦亡蛋白NLRP3、裂解的半胱氨酸天冬氨酸酶(cleaved-caspase-1,c-caspase-1)、GSDMD、GSDMDN表达均上升,Sirt1-Foxo1信号通路蛋白表达下降(P<0.01);与模型组比较,PD各组及PD-H+sirtinol组LDH释放量、IL-1β水平、ROS水平、细胞焦亡率、NLRP3 mRNA、GSDMD mRNA表达、焦亡蛋白NLRP3、c-caspase-1、GSDMD、GSDMD-N表达均下降,Sirt1-FoxO1信号通路蛋白表达上升(P<0.05)。sirtinol可以逆转PD对于高糖诱导的心肌细胞焦亡的保护作用。结论 PD可以通过上调Sirt1-FoxO1信号通路蛋白表达,改善细胞炎症损伤,抑制高糖诱导的心肌细胞焦亡。

虎杖苷对β淀粉样蛋白诱导体外皮质神经元线粒体氧化应激和功能障碍的保护作用

目的探讨虎杖苷对β淀粉样蛋白25~35(Aβ_(25~35))诱导的原代培养大鼠皮质神经元损伤的保护作用及可能的作用机制。方法原代培养SD大鼠皮质神经元,分为对照组、虎杖苷组、Aβ_(25~35)组和联合组(Aβ_(25~35)+虎杖苷)。采用四甲基偶氮唑盐检测皮质神经元活力,2,7-二氯荧光素二乙酸酯探针或红色线粒体超氧化物荧光探针染色检测细胞内和线粒体活性氧水平,线粒体膜通透性转换孔(MPTP)试剂盒检测MPTP开放程度,蛋白免疫印记法检测细胞色素C及线粒体转录因子A(TFAM)表达。另外,测定细胞内电子传递链复合物(包括复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)活性和三磷酸腺苷(ATP)水平。采用高效液相色谱法测定线粒体中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)。结果与对照组比较,Aβ_(25~35)组皮质神经元细胞活力、线粒体荧光强度、线粒体呼吸链酶活性(复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)、细胞内ATP、线粒体内TFAM表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与Aβ_(25~35)组比较,虎杖苷组线粒体荧光强度、线粒体呼吸链酶活性(复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)、细胞内ATP、线粒体内TFAM表达明显增高,皮质神经元暴露3、6、12、24h细胞内和线粒体内活性氧明显降低(P<0.05,P<0.01),联合组细胞色素C细胞质/线粒体比值、线粒体内8-OHdG水平明显低于Aβ_(25~35)组[3.02±0.28 vs 5.73±0.45,P<0.05;(8.07±1.45)×10^(6)dG vs(16.07±2.29)×10^(6)dG,P<0.05]。结论虎杖苷可有效地保护皮质神经元免受Aβ_(25~35)诱导的损伤,至少部分作用是通过抑制线粒体氧化应激和改善线粒体功能实现。

虎杖苷对AML细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长的影响

目的探讨虎杖苷(PD)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长的影响。方法将人AML细胞KG-1分为正常组,低、中、高浓度PD组(10、30、60μmol/L的PD),SQ22536组[环磷酸腺苷(cAMP)抑制剂,100μmol/L],高浓度PD和SQ22536联用组(60μmol/L的PD+100μmol/L的SQ22536),考察PD对细胞活力、凋亡率、侵袭和迁移能力、cAMP水平和上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白、蛋白激酶A(PKA)蛋白表达的影响。以BALB/c裸鼠为对象,通过皮下接种KG-1细胞悬液建立AML裸鼠移植瘤模型,并分为对照组、PD组、SQ22536组、PD+SQ22536组(每组6只),考察PD对其瘤体体积及质量的影响。结果与正常组细胞或对照组裸鼠比较,PD各浓度组的细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数和波形蛋白、锌指转录因子Snail蛋白的相对表达量,以及PD组裸鼠的瘤体体积及质量均显著降低,而细胞凋亡率、cAMP水平、PKA和上皮钙黏素的相对表达量均显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);SQ22536对细胞和裸鼠的作用效果与PD相反,并可显著逆转PD的抗肿瘤活性(P<0.05)。结论PD可能通过激活cAMP/PKA信号通路来抑制AML细胞的增殖、迁移、侵袭,诱导细胞凋亡,抑制EMT进程及肿瘤生长,从而发挥抗AML作用。

基于网络药理学和分子对接探讨虎杖-金钱草药对治疗肝癌作用机制

目的:通过网络药理学及分子对接方法探究虎杖-金钱草药对治疗肝癌的作用机制。方法:以TCMSP、TCMIP、BATMAN-TCM、HERB、GeneCards、OMIM、DisGeNET、TTD数据库为来源,获取虎杖及金钱草的活性成分、作用靶点及肝癌疾病靶点。使用STRING数据库和Cytoscaape软件对共同靶点绘制蛋白质相互作用网络(PPI)获取核心靶点。应用DAVID数据库进行GO功能富集分析与KEGG通路富集分析。应用Cytoscape构建“药物-活性成分-靶点-疾病-信号通路”网络。最后运用AutoDock Tools、PyMOL进行分子对接验证。结果:经过筛选得到“虎杖-金钱草”治疗肝癌的潜在核心靶点17个。GO功能分析得到663条结果,KEGG通路富集分析主要涉及癌症通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等139条通路。分子对接结果显示,虎杖-金钱草主要活性成分与关键潜在作用靶点Akt1、Src、EGFR、HSP90AA1和ErbB2均能自发结合且具有较好的亲和力。结论:虎杖-金钱草可能结合多个成分和靶点,调控多条通路发挥靶向治疗肝癌的作用。

虎杖苷抗氧化活性研究进展

虎杖苷是从中药虎杖的干燥根茎中提取的单体化合物,是白藜芦醇的葡糖苷衍生物。现代药理学研究发现,虎杖苷在许多生物过程中发挥重要作用,包括氧化应激、炎症和细胞凋亡等。与白藜芦醇相比,虎杖苷因具有更高的抗氧化活性和生物利用度受到广泛关注。近年来研究发现虎杖苷可以显著改善多种氧化应激相关疾病,如神经退行性疾病、糖尿病、心血管相关疾病等。文章就虎杖苷在多种临床常见疾病中的抗氧化作用进行综述,以期为虎杖苷的后续研究及开发利用提供参考。

虎杖活性成分及其方药治疗NAFLD的研究进展

虎杖具有清热解毒、止咳化痰等功效,可用于高血脂、痛风性关节炎、病毒性感染疾病、呼吸系统疾病等的治疗。研究表明,虎杖治疗NAFLD活性成分主要包括二苯乙烯类、蒽醌类、黄酮类,其作用机制主要体现在改善脂质过氧化、降血脂、改善肝功能及改善炎症反应等方面。现对近年来相关研究中所提到的虎杖及其类方药的临床应用、药理研究、治疗NAFLD活性成分等进行系统综述。

A New Flavonoid Glycoside from Polygonum capitatum

[Objectives]To discover novel compounds with significant anti-inflammatory activity in the alcohol extract of Polygonum capitatum.[Methods]Firstly,a new flavonoid glycoside,capitaone B(1),was isolated from the ethyl acetate extract from P.capitatum,and then 27 compounds were screened using NO anti-inflammatory activity model.[Results]Four compounds,such as kaempferol(12),1,2,6-trigalloyl-β-d-glucose(15),catechin(16)andβ-sitosterol(26),could significantly inhibit LPS-induced NO production in macrophages,with IC 50 values of 15.31,8.43,6.92 and 5.72μM,respectively.[Conclusions]The chemical composition and anti-inflammatory activity of P.capitatum were preliminarily studied,and the results provide a theoretical basis for further research on the action mechanism of subsequent anti-inflammatory active compounds of P.capitatum.

虎杖苷调控HIF-1α/VEGF信号通路对绝经后骨质疏松症大鼠H型血管生成的影响

目的探讨虎杖苷对绝经后骨质疏松症大鼠(PMOP)H型血管生成的影响。方法采用随机数表法将大鼠分为空白组、模型组、虎杖苷组(45 mg/kg),每组10只。除空白组外,其余组采用去卵巢法构建PMOP大鼠模型,灌胃给予相应药物。干预8周后,HE染色观察胫骨近端骨组织病理变化,Micro-CT分析膝关节组织形态变化和骨量变化,免疫组化和免疫荧光分析膝关节HIF-1α、VEGF、CD31、Emcn蛋白表达。结果与空白组比较,模型组骨小梁数量减少,骨小梁不连续,BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th值降低(P<0.01),Tb.Sp值升高(P<0.01),膝关节组织HIF-1α、VEGF、CD31及Emcn蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,虎杖苷组BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th值升高(P<0.05,P<0.01),Tb.Sp值降低(P<0.01)膝关节组织HIF-1α、VEGF、CD31及Emcn蛋白表达升高(P<0.01)。结论虎杖苷可能通过上调HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白表达来促进H型血管的生成,改善PMOP大鼠的血流供应,从而达到对PMOP的保护作用。

虎杖苷调节JAK2/STAT3信号通路对高血压脑出血大鼠神经炎症的影响

目的:探讨虎杖苷调节JAK2/STAT3信号通路对高血压脑出血(HICH)大鼠神经炎症的影响。方法:Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、HICH组、虎杖苷低、中、高剂量(虎杖苷-L、虎杖苷-M、虎杖苷-H)组(25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg虎杖苷)、虎杖苷-H+JAK2/STAT3通路激活剂(Colivelin)(100mg/kg虎杖苷+1mg/kg Colivelin)组,10只/组,假手术组仅进行钝性分离双侧肾动脉以及注射生理盐水操作,其余各组通过银夹狭窄双侧肾动脉以及注射自体血建立HICH大鼠,随后进行相应药物或生理盐水干预,3d后进行改良神经功能缺损程度评分(mNSS)评分及脑水量检测;分离血清,ELISA检测白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;分离脑组织,HE检测其病理变化;免疫荧光检测IL-10、IL-4表达;Western blot检测JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果:与假手术组相比,HICH组mNSS评分、血清IL-1β、TNF-α水平、含水量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达显著增加,但IL-10、IL-4表达降低(P<0.05);与较HICH组相比,虎杖苷-L组、虎杖苷-M组、虎杖苷-H组mNSS评分、血清IL-1β、TNF-α水平、含水量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达显著降低,但IL-10、IL-4表达增加,不同浓度虎杖苷组有统计学差异(P<0.05);与虎杖苷-H组相比,虎杖苷-H+Colivelin组mNSS评分、血清IL-1β、TNF-α水平、含水量、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达显著增加,但IL-10、IL-4表达降低(P<0.05)。结论:虎杖苷通过抑制JAK2/STAT3信号通路,降低HICH大鼠促炎因子水平,提高抗炎水平,减轻HICH大鼠病理损伤。

虎杖苷激活MEK/ERK信号通路改善东莨菪碱诱导的干眼症大鼠眼表功能障碍和病变

目的:探究虎杖苷对干眼症(DED)大鼠眼表功能障碍和病变的影响及其保护机制。方法:90只SD大鼠随机选取18只为对照组,其余皮下注射氢溴酸东莨菪碱建立DED模型,建模后分为模型组、0.05%虎杖苷组、0.5%虎杖苷组、0.5%虎杖苷+U0126[丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)抑制剂]组,每组18只;各组给予相应剂量药物进行干预,对照组和模型组大鼠给予等量生理盐水。干预第7、14、21、28天,进行Schirmer测试检测各组大鼠泪液分泌量,荧光素染色检测各组大鼠泪膜破裂时间(BUT)和角膜损伤;RT-qPCR检测角膜和结膜组织促炎因子TNF-α、IFN-γ和IL-1βmRNA表达;HE染色观察角膜组织病理学变化;PAS染色评估结膜杯状细胞数量;Western blot检测角膜和结膜组织MEK/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠泪液分泌量、BUT、结膜杯状细胞数量显著减少(P<0.05),角膜损伤评分、TNF-α、IFN-γ和IL-1βmRNA水平显著升高(P<0.05),角膜上皮层变薄,可见大量炎症细胞浸润和新生毛细血管;与模型组相比,0.05%虎杖苷组和0.5%虎杖苷组泪液分泌量、BUT、结膜杯状细胞数量、p-MEK1/2/MEK1/2和p-ERK1/2/ERK1/2显著升高(P<0.05),角膜损伤评分、TNF-α、IFN-γ和IL-1βmRNA水平显著降低(P<0.05),角膜组织病理损伤明显缓解;U0126可显著减弱虎杖苷对DED大鼠眼表功能障碍和病变的保护作用。结论:虎杖苷可能通过激活MEK/ERK通路改善东莨菪碱诱导的DED大鼠眼表功能障碍和病变。

虎杖中白藜芦醇提取工艺的优化及其抗氧化性

利用单因素和响应面试验考察了超声功率、提取时间、乙醇体积分数和料液比对从虎杖中提取白藜芦醇工艺的影响。利用大孔吸附树脂和反相柱层析联合分离及高效液相色谱对产物进行鉴,并对细胞内外抗氧化性和对紫外照射成纤维细胞的保护作用进行试验。白藜芦醇最佳提取条件为超声功率496W、提取时间33min、乙醇体积分数64%、料液比1∶17,最佳条件下提取率为4.80mg/g,白藜芦醇纯度达99.90%。白藜芦醇为2.5和0.5mg/mL时,DPPH和羟自由基清除率最高,分别为94.92%和94.65%,IC_(50)分别为0.926和0.165mg/mL。白藜芦醇能显著降低紫外照射皮肤成纤维细胞内SOD、CAT、GSH和MDA。

虎杖(Polygonumcuspidatum)茎尖愈伤组织诱导及高频植株再生

以虎杖（Polygonumcuspidatum）茎尖为外植体进行离体再生研究，探讨苗龄、接种方式、不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖等对虎杖茎尖愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响．结果表明：愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋蔗糖28g·L^-1＋琼脂5．5g·L^-1＋2，4一D1．5mg·L^-1＋6-BA1．0mg·L^-1诱导率为100％；3～7d苗龄的虎杖茎尖愈伤组织诱导能力无显著差异，诱导率均达到95％以上，此后随着苗龄的增加，愈伤组织诱导能力快速下降，苗龄为12d时愈伤组织诱导率只有55．6％；以正插（形态学下端插入培养基）方式接种的外植体愈伤组织诱导率显著大于反插（形态学上端插入培养基）和平放；不定芽分化最佳培养基为MS4-AgNO3 4．0mg·L^-1＋蔗糖30g·L^-1＋琼脂6．0g·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1＋TDZ0．8mg·L^-1，分化率为83，9％，增殖系数为7．63；生根培养基选用1／2MS＋蔗糖26g·L^-1＋琼脂6．5g·L^-1＋活性碳3％＋IBA0．2mg·L^-1＋NAA0．3mg·L^-1生根率为89．6％，用聚氟乙烯（PVF）透气膜封口比用聚乙烯（POLY）菌膜生根率明显提高（达到100％），生根明显提前．