虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

为研究虎源猫传染性鼻气管炎的快速诊断试剂盒和基因亚单位疫苗,根据Genbank公布的猫传染性鼻气管炎病毒的核酸序列,设计了关于虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因的引物并利用PCR扩增出gD序列,成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pmd-gD。将其利用HindⅢ和XhoⅠ酶切后,产物克隆入原核表达载体pet-32a(+)中,获得重组质粒,命名pet-gD。用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-blot检测,结果显示目的基因在pET-32a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白相对分子质量约为60kDa,与虎源猫传染性鼻气管炎病毒阳性血清发生特异性反应。以纯化的表达产物作为包被抗原,建立了检测虎源猫传染性鼻气管炎抗体的间接ELISA检测方法。本实验为虎源性猫传染性鼻气管炎诊断试剂盒和基因亚单位疫苗的研究打下了重要的基础。

虎源传染性鼻气管炎病毒gD基因重组真核表达载体的构建

根据从虎气管组织扩增获得的猫传染性鼻气管炎病毒相关核酸序列,设计扩增编码虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因片段的引物,通过PCR扩增出gD基因片段,并成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为18T-gD。重组质粒通过HindⅢ和XhoⅠ酶切后,插入pcDNA 3.1(+)真核表达载体构建出gD基因的重组真核表达质粒pcDNA-gD。用脂质体将重组真核表达质粒pcDNA-gD转染293T细胞,通过RT-PCR和Western blot检测,结果显示gD基因在真核细胞中得到正确转录和表达,所表达蛋白分子质量约为42.29ku,为虎源猫传染性鼻气管炎基因疫苗的研究奠定了基础。

东北虎和华南虎源传染性鼻气管炎病毒的PCR检测和序列分析

为了鉴定东北虎和华南虎疑似传染性鼻气管炎病料中病毒的种类及进行流行病学分析,我们设计并合成了4对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4用于扩增大小分别为193 bp,288 bp,312 bp和1088 bp的基因片段,同时对PCR扩增产物进行纯化、克隆至PMD18-T Simple载体、转化、酶切鉴定、测序及序列分析。结果显示设计并合成的4对引物Fhv1、Fhv2、Fhv3、Fhv4均扩增出与目的片段大小相符的明亮条带,分别约为200 bp、290 bp、310 bp、1100 bp;对Fhv3进行单酶切鉴定,出现大小分别约为160 bp、150 bp的2条条带;对Fhv4进行测序及序列分析,与GenBank^(TM)中已公布的猫传染性鼻气管炎病毒毒株(序列号:FJ478159.2)序列相似性为100%,与其他基因序列相似性均较低。本研究首次发现东北虎和华南虎源猫传染性鼻气管炎病毒,可为虎类的饲养管理及疾病的防控提供参考,为虎传染性鼻气管炎病毒的相关研究奠定基础。

虎源传染性鼻气管炎病毒巢式PCR检测方法的建立

为了建立虎源传染性鼻气管炎病毒巢式PCR(nested PCR)的快速鉴定方法,根据虎源传染性鼻气管炎病毒(FHV-1)的gD蛋白基因序列设计套式引物,进行特异性、敏感性和重复性实验,特异性试验表明,该方法可以特异扩增出FHV-1的gD基因片断,从猫泛白细胞减少症病毒、猫支原体和阴性对照的VERO细胞均未扩增出该条带,敏感性试验表明,nested PCR检测极限是1×10~2 copies/μl,而一步法PCR的有效扩增最低极限是1×10~5 copies/μl,前者的敏感性明显高于后者,重复性实验表明,不同情况下3次重复性试验,结果相同。用nested PCR对疑似感染FHV-1的样品进行检测,实验结果与病毒分离鉴定结果一致。本研究建立的nested PCR适用于野生猫科动物FHV-1感染的快速诊断与流行病学调查。

抗猫传染性鼻气管炎病毒药物的体外筛选

试验旨在检测抗病毒药物对猫传染性鼻气管炎病毒的有效性。利用F81细胞建立抗猫传染性鼻气管炎病毒药物的体外筛选模型,采用MTT法检测,计算病毒的抑制率。结果显示,阿昔洛韦、利巴韦林、L-赖氨酸、板蓝根和黄芪多糖的半数有效浓度(IC50)分别为9.5、3.3、3.4、161.0和4.7μg/mL,聚肌胞IC_50为6.0mg/mL,治疗指数TI分别为76.8、39.3、2 588.0、4.5、78.7和5.8。结果表明,L-赖氨酸和黄芪多糖为高效抗猫传染性鼻气管炎病毒药物。

猫传染性鼻气管炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

猫传染性鼻气管炎(FIR)病毒是引起猫传染性鼻气管炎的病原,属于猫疱疹病毒1型(FHV-1)。选择FHV-1 gD基因设计1对引物FHV-1F、FHV-1R和探针FHV-1Probe,建立FHV-1实时荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法可以特异地检测出FHV-1的DNA,敏感性达到75fg/μL,反应效率达到107%,R2值为0.9965,Ct值的变异系数低于2%。FHV-1实时荧光定量PCR检测方法敏感性高于普通PCR,特异性好、稳定性好,适用于FHV-1的临床诊断、检测和流行病学调查。利用该方法对上海地区宠物门诊送检的疑似FHV-1感染的样品进行检测,其阳性率达到27.78%,表明上海地区宠物猫FHV-1的发病率处于较高水平。

猫传染性鼻气管炎病毒gB和gD序列比对

【目的】比较猫传染性鼻气管炎病毒gB和gD序列差异。【方法】采用测序方法对传染性鼻气管炎病毒5株分离株和1株疫苗株的gB和gD序列进行序列测定,并比较核苷酸和氨基酸差异。【结果】结果表明分离株gB序列发生了部分变化,并且与疫苗株高度同源,其氨基酸也同样发生部分变化,gD序列没有变化。【结论】猫传染性鼻气管炎病毒分离株gB序列有变化,但与疫苗株同源性一致。

老虎感染猫传染性鼻-结膜炎病毒的研究

用猫肾传代细胞从发病虎的病料中分到了一株杯状病毒粒子样病毒。该病毒大小为 35～ 39nm、无囊膜、在胞浆中病毒前体呈晶格状排列 ,抗乙醚、不能被 5 IUDR所抑制 ,能被来源于标准疫苗的猫传染性鼻 结膜炎病毒 (或杯状病毒Felinecalicivirus ,FCV)抗血清所中和 ,人工感染猫出现典型的FCV感染症状。RT PCR能扩增出与设计值相符的电泳带 ,PCR产物直接测序结果与Genebank发表的FCV序列比较 ,具有较高的同源性。系统鉴定证明所分离的这株病毒为FCV强毒株 ,从老虎中分到FCV在世界上尚属首次报道。

浅谈猫传染性鼻气管炎的诊治

猫传染性鼻气管炎主要是感染猫，尤其是侵害仔猫。多数人都认为猫打喷嚏、流鼻涕是感冒了，但如果该猫外出、或是主人接触流浪猫，那么我说猫不一定是感冒，大部分可能性是猫传染性鼻气管炎。笔者浅谈一下猫传染性鼻气管炎的诊治。1.病原 猫传染性鼻气管炎病毒（FHV-1）在分类上属疱疹病毒科，甲型疱疹病毒亚科病毒。具有疱疹病毒的一般特性。病毒粒子中心致密，外有囊膜，双股DNA病毒。病毒能在猫的鼻、咽、喉、气管、黏膜、舌的上皮细胞内增殖，从而引起急性的上呼吸道炎症。FHV-1对外界环境抵抗力弱，对酸、热和脂溶剂敏感。甲醛和酚可将其灭活。

猫传染性鼻支气管炎的防治

猫传染性鼻支气管炎是一种对猫尤其是幼猫危害严重的传染病,发病后如不及时治疗,会对猫的健康造成严重威胁,甚至引起死亡。因此,寻找一种科学合理的防治方法显得尤为重要。1病原体猫传染性鼻支气管炎的病原体为猫疱疹病毒I型（Fe HVI）,属于疱疹病科甲型疱疹病毒亚科。该病毒对外界因素抵抗力较弱,干燥环境下,12h以上即可丧失毒力。病毒可被甲醛和酚灭活。2流行病学该病毒只感染猫和猫科动物,病猫、

1例猫传染性鼻气管炎的诊断与治疗

猫传染性鼻气管炎是一种由猫疱疹病毒引起的具有高度传染性的猫上呼吸道疾病。猫疱疹病毒主要在猫呼吸道的淋巴细胞和上皮细胞中复制,猫一旦感染将终生携带。猫传染性鼻气管炎临床主要特征表现为结膜炎、上呼吸道感染和流产,以上呼吸道疾病的症状为主。猫疱疹病毒对幼猫危害严重,死亡率可达50%。文章就一例猫传染性鼻气管炎的诊断和治疗以及诊疗体会展开论述,以期为建立科学严谨的防治措施提供参考。

猫传染性鼻支气管炎的概述

猫传染性鼻支气管炎的病原体为猫疱疹病毒I型,属于疱疹病科甲型疱疹病毒亚科,属于传染性极强的恶性疾病,以上呼吸道感染为主要临床症状,宿主为猫和猫科动物,未接种疫苗的幼猫感染后发病率为100%,成年猫感染后一般不致死,但愈后不良,重症病例可见角膜、鼻甲骨造成永久性损伤。FHV-I与杯状病毒、衣原体、支原体等引起的上呼吸道症状极为相似,临床上一般以分子生物学诊断来确诊。

猫传染性鼻气管炎及防治

猫传染性鼻气管炎主要是由猫疱疹病毒1 型(FHV-1)病毒引起的,它是猫的一种急性、高度接触性的上呼吸道传染病,病毒主要感染幼猫。幼猫早期死亡率一般较高,成猫一般很少发生死亡。FHV-1 属于疱疹病毒科甲型疱疹病毒科。该病毒对外界抵抗力较弱,干燥环境下12h 失去活性,可被甲醛和酚灭活。

浅谈猫传染性鼻气管炎的防治

猫传染性鼻气管炎是猫的上部呼吸道感染性非常强的一种急性传染病。该病的病原体是猫鼻气管炎疱疹病毒。主要感染幼猫，发病率100％，死亡率50％。在自然条件下，一般经呼吸道和消化道传染。猫感染本病后，病毒能在病猫的鼻腔、咽喉、器官、结膜和舌的上皮细胞内繁殖，并随其分泌物排到体外，感染其它猫。

一例猫传染性鼻支气管炎的病例报告

猫传染性鼻气管炎(FVRs)是由Ⅰ型猫疱疹病毒引起的一种对猫科动物健康构成严重威胁的病毒性传染病,也是当前宠物医生们临床较为常见的宠物疾病类型之一,易感动物主要是猫,此病的难点就是传播速度异常迅速,病毒潜伏期长,而且患猫很容易感染健康猫,猫一旦受到感染,就会有打喷嚏,流鼻涕等临床表现,治疗时间也会很长,所以在我国宠物医院临床诊疗上,不管是临床诊断还是对症治疗都还是存在着一个很大程度的难度。

猫疱疹病毒1型部分糖蛋白的研究进展

猫传染性鼻气管炎又名猫疱疹病毒1型感染症,是由猫疱疹病毒1型引起的猫的急性和高度接触性的上呼吸道感染,该病毒是具有囊膜的双股DNA病毒,病毒囊膜糖蛋白对病毒的吸附、侵入和细胞间扩散是必需的,可刺激机体产生中和抗体。囊膜糖蛋白的研究不仅能了解病毒分子生物学的结构和功能,而且对该病的预防和诊断也具有重要意义。笔者就gB蛋白和gD蛋白的结构和分子生物学特性作一综述,并对其研究展进行了展望。

猫疱疹病毒1型HR-1毒株的分离鉴定及致病性分析

从哈尔滨市某宠物医院疑似感染1型猫疱疹病毒发病猫的眼、鼻拭子中分离到1株病毒,经过电镜观察、分子生物学、血清学和动物回归试验鉴定,分离到的病毒为猫疱疹病毒1型,命名为HR-1株。HR-1可在猫肾细胞(CRFK)上产生典型细胞病变,病毒滴度可达到108 TCID50/mL。提取病毒基因组DNA经过gD引物扩增后,得到1条1 125 bp大小的特异性条带,经测序表明其与C-27毒株gD基因序列相似性达100%。间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,接种HR-1的单层CRFK细胞出现特异性荧光。电镜观察可见圆形、有囊膜、直径约为150 nm的病毒颗粒。为了解该毒株的毒力及致病性,通过感染中国家猫进行致病性试验。结果表明,HR-1为强毒株,对家猫的致死率为100%;HR-1感染家猫后主要表现为眼结膜炎和鼻气管炎;通过实时荧光定量PCR能从感染家猫的眼、鼻拭子中检测到病毒粒子核酸,并且于感染后4~6 d病毒核酸达到最高峰。本试验为猫疱疹病毒的诊断和致病机制的研究提供了参考价值.

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