冬虫夏草与虫草发酵菌丝体的HPLC指纹图谱比较研究

目的:研究冬虫夏草与虫草发酵菌丝体的高效液相指纹图谱。方法:利用高效液相色谱法,梯度洗脱,测定冬虫夏草与虫草发酵菌丝体样品,色谱条件为:Agilent C18色谱柱(4.6mm×25mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速0.5mL/min,检测波长260nm。结果:测定冬虫夏草与虫草发酵菌丝体指纹图谱中共有6个峰为共有峰,并确定其中的3个色谱峰分别为尿嘧啶、腺苷、虫草素。结论:本研究所建立的方法可作为虫草发酵菌丝体质量标准制定的参考依据。

虫草发酵菌丝体对胰岛素抵抗大鼠氧化应激的缓解作用

探究虫草发酵菌丝体对胰岛素抵抗(IR)大鼠氧化应激的影响。采用低中高剂量虫草发酵菌丝体(剂量分别为1.65g/kg饲料,3.30g/kg饲料和6.60g/kg饲料)分别干预IR大鼠。口服葡萄糖耐量实验观察不同剂量虫草发酵菌丝体的降糖效果,同时观察血脂、氧化应激水平的变化情况。RT-PCR法测肌肉、肝脏组织氧化应激相关基因Nrf2、HO-1和NQO1mRNA相对表达量,Westernblot法测其蛋白相对表达量。结果发现CM干预能够显著改善IR大鼠空腹血糖、血脂和机体氧化应激水平,肌肉、肝脏组织Nrf2、HO-1和NQO1mRNA相对表达量显著上升,肝脏Nrf2和NQO1蛋白相对表达量显著上调,并且具有剂量依赖性。说明CM具有缓解IR大鼠氧化应激的作用。

响应面法优化微波辅助提取发酵虫草菌丝体多糖工艺

为优化发酵虫草菌粉多糖的微波辅助提取工艺,在单因素实验基础上,以液固比、微波功率以及提取时间为自变量,多糖提取率为响应值,采用中心组合设计的方法,研究各自变量及其交互作用对多糖提取率的影响。利用SAS软件和响应面分析相结合的方法对发酵虫草菌粉多糖的微波辅助提取工艺进行优化,确定了微波辅助提取多糖的最佳条件:液固比值12.2,微波功率650.5 W,提取时间11.8 min,在此条件下,多糖提取率达到6.41%。采用此法提取的虫草菌丝体多糖,当质量浓度为1 mg/mL时,对二苯代苦味肼基自由基(DPPH)清除率达到76%。

发酵虫草菌丝体多糖提取条件优化及其结构分析

采用响应面法优化蝙蝠蛾拟青霉菌丝体多糖的提取工艺,并对提取所得多糖的结构进行初步分析。结果表明:发酵虫草菌丝体多糖提取最佳工艺条件为提取温度98.0℃、提取时间4.5 h、液固比25∶1(mL/g),该条件下多糖得率为9.69%。菌丝体多糖主要由中性糖(84.7%)和糖醛酸(9.5%)组成。采用高效体积排阻色谱、红外光谱扫描和离子色谱对多糖结构进行光谱分析和单糖组成分析,结果表明该多糖主要为分子质量61.6 kD的单一色谱峰且可能呈吡喃环结构。另外,菌丝体多糖由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和半乳糖醛酸组成,其物质的量比为2.5∶31∶36∶1∶15∶4。研究成果可为日后发酵虫草菌丝体多糖精细结构与活性研究以及产品开发提供一定理论依据。

人工发酵虫草菌丝体干粉对糖尿病大鼠肾脏组织色素上皮衍生因子和基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的 观察人工发酵虫草菌丝体干粉对糖尿病大鼠肾组织中色素上皮衍生因子（PEDF）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响.方法 依照随机区组设计将45只体质量为180～220 g的8周龄雄性SD大鼠随机分为3组：正常对照组（A组,n=15）、糖尿病对照组（B组,n=15）、人工发酵虫草菌丝体干粉干预组（C组,n=15）.B组和C组大鼠腹腔注射55 μg/g链脲佐菌素制作糖尿病动物模型.造模成功后第3天,C组给予4 μg·g-1·d-1人工发酵虫草菌丝体干粉定时灌胃,A组、B组以等体积生理盐水灌胃.实验12周末,观察比较3组肾脏指数（KI）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24 h尿量、24 h尿白蛋白排泄量（UAE）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）.免疫组化方法分析比较3组PEDF、MMP-2和TGF-β1在肾组织中的表达,实时定量-聚合酶链反应（RT-PCR）分析比较3组PEDF mRNA的表达情况.两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析.结果 B、C组大鼠KI、BUN、SCr、UAE、TC、TG均高于A组（均P〈0.01）,C组均较B组降低（均P〈0.01）.免疫组化显示,B组和C组肾脏PEDF（1.53±0.12、2.60±0.15）、MMP-2（1.8±0.5、3.3±0.4）表达均低于A组（3.96±0.14、4.3±0.6）（均P〈0.01）,TGF-β1（4.60±0.15、2.60±0.09）表达均高于A组（1.57±0.09）（均P〈0.01）,而C组PEDF、MMP-2表达高于B组（P〈0.01）,TGF-β1表达低于B组（P〈0.01）.RT-PCR分析显示B、C组肾脏组织中PEDF mRNA表达量为0.3±0.1和0.8±0.2,显著低于A组（1.2±0.3）（均P〈0.01）,而C组高于B组（P〈0.01）.结论 肾脏组织中PEDF、MMP-2和TGF-β1表达的改变可能参与了糖尿病肾病的发生.人工发酵虫草菌丝体干粉可改善肾功能、调节血脂,还可通过调节PEDF、MMP-2及TGF-β1在肾脏的表达发挥肾脏保护作用.

人工发酵虫草菌丝体干粉对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠心脏NF-κB和TGF-β1表达影响的研究

目的观察人工发酵虫草菌丝体干粉(CM)对糖尿病大鼠心肌核因子-κB(NF-κB)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠53只,鼠龄8周,体重(220±20)g。采用数字表法将大鼠随机分为正常对照组(NC,n=10)、单纯糖尿病组(n=10)、CM小剂量组[n=12;CM 0.6g/(kg.d)灌胃]、CM中剂量组[n=11;CM 2.5g/(kg.d)灌胃]、CM大剂量组[n=10;CM 5g/(kg.d)灌胃]。单次尾静脉注射STZ(45mg/kg)造模,成模8周后处死大鼠。采用免疫组织化学法、RT-PCR法检测心肌NF-κB、TGF-β1蛋白和mRNA的表达水平。结果单纯糖尿病组心肌NF-κB、TGF-β1蛋白和mRNA表达均上调(P<0.05),CM干预可下调NF-κB、TGF-β1蛋白和mRNA的异常表达(P<0.05)。结论心肌组织中,NF-κB和TGF-β1表达的改变可能参与了糖尿病心肌病(DC)的发生,CM可能通过调节NF-κB和TGF-β1在心肌的表达发挥对心肌的保护作用。

高产D-甘露醇虫草菌种分离纯化的研究

本试验系用生物工程技术分离纯化虫草菌种的研究。先用组织分离法从野生虫草整体组织上分离出虫草菌种 ,再用平板稀释法将菌种纯化 ,获得一株高产D -甘露醇 (虫草酸 )的优良菌种。该菌种被鉴定为蝙蝠蛾拟青霉。使用该菌种经一级种子培养和发酵培养 ,获得含D -甘露醇 9 9% (野生虫草约 7% )、总氮 5 1% (野生虫草约 4% )的虫草菌丝体。原种斜面培养基组成 (% ) :琼脂 2、葡萄糖 2、蛋白胨 0 2、磷酸二氢钾 0 1、硫酸镁 0 0 3、麦麸 5。种子培养基组成 (% ) ;葡萄糖 2、蛋白胨 0 5、磷酸二氢钾 0 1、硫酸镁 0 0 3、麦麸 5。原种培养温度 2 3- 2 4℃、培养时间 4- 5天 ;平均稀释纯化所用稀释菌液为 10 -1、 10 -2 、 10 -3 、 10 -4 、 10 -5、 10 -6,挑菌培养温度分别为 2 3- 2 4℃、 2 8℃、 37℃。种子培养条件 :一级种子培养 :摇床转速 180r/min ,培养温度 2 4- 2 5℃ ,时间 2 - 3天 ;二级种子培养 ;摇床转速 90r/min ,培养温度 2 4- 2 5℃ ,时间 2天。发酵培养条件 ;接种量 5 - 10 % ,温度 2 4- 2 6℃ ,搅拌速度 15 0 - 180r/min ,通气培养 ,时间 5 - 6天 ,PH4 5 ,残糖量降至 0 3%。

中国名贵药材冬虫夏草

冬虫夏草具有许多功效,食药两用。本文详述了冬虫夏草的和各种药理功能和化学成分;论述了冬虫夏草菌丝体的品质分析与市场前景。

冬虫夏草性状鉴别与含量标准存在的问题

目的:提供和完善冬虫夏草的性状鉴别特征与资料,探讨含量标准存在的问题。方法:系统查阅相关文献,结合市场情况,全面论述冬虫夏草的同属真菌入药、无性型、寄主基原鉴定、药材的性状鉴别、质量标准等方面的问题。结果:只有冬虫夏草菌Cordyceps sienesis是《中国药典》法定的正品,其他同属真菌均系伪劣品;冬虫夏草药材的性状鉴别要特别注意虫与"草"的长度比和粗细比,以及"草"从虫的什么部位长出与是否分枝等;冬虫夏草及发酵产物质量标准仅根据腺苷(虫草素)、甘露醇(虫草酸)和多糖等非特异性成分的定性定量结果就声称代用冬虫夏草是欠妥当的。结论:应加强特异性化学成分质量标准的研究,并加强有关冬虫夏草和各种发酵产物作为食品、保健品和药品的质量监管。