虫草益肾颗粒对膜性肾病大鼠生化指标及肾组织形态学影响的研究

目的:观察虫草益肾颗粒对阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)所致膜性肾病大鼠的治疗作用。方法:72只SD大鼠,除12只作为空白对照组外,余60只采用多次尾静脉注射C-BSA的方法制备膜性肾病大鼠模型,造模结束后根据24h尿蛋白定量(24hUPQ)随机分为模型组、虫草益肾颗粒低、中、高剂量组以及西药对照组,每组12只。分组后开始灌胃给药,虫草益肾颗粒低、中、高剂量组分别给予中药溶液2.7g/kg/d,5.4g/kg/d,10.8g/kg/d(含颗粒量),西药组给予环孢素A(31.5mg/kg/d)联合醋酸泼尼松(0.945mg/kg/d)混悬液。空白组及模型组给予等体积生理盐水。连续灌胃4周。多时间点测定24hUPQ,治疗结束采血检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)等生化指标,取肾组织行光镜、电镜检查。结果:虫草益肾颗粒各剂量组24hUPQ减少,与模型组相比差异具有统计学意义(P<0.01);血清TP、ALB水平升高,而TG、CHOL降低,与模型组相比差异具有统计学意义(P<0.01),光镜下显示虫草益肾各剂量组肾脏病理损害较模型组减轻,电镜下肾小球基底膜(GBM)轻度增厚,上皮细胞下仅少量电子致密物沉积,足突部分融合。结论:虫草益肾颗粒可降低膜性肾病大鼠尿蛋白、升高血浆蛋白水平,调节脂质代谢紊乱,改善肾脏病理改变。

虫草益肾颗粒对人肾小球系膜细胞megsin及p38MAPK信号转导通路的影响

目的:探讨虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMC)增殖影响中megsin、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调控作用。方法:体外采用高糖(30 mmol/L)刺激HMC,分别加入不同浓度的虫草益肾颗粒(高、中、低)及福辛普利含药大鼠血清进行干预,收集细胞。采用Western印迹及实时定量PCR法分别检测p38MAPK、p-p38MAPK、megsin蛋白的表达。结果:虫草益肾颗粒及福辛普利药物血清对高糖刺激下的HMC增殖均有抑制作用,且高糖刺激后HMC细胞p38MAPK、pp38MAPK、megsin的表达均较正常组增多(均P<0.05);虫草益肾颗粒高、中剂量组干预后均可致其表达下降(均P<0.05);其抑制作用与福辛普利组作用效果相近。结论:虫草益肾颗粒具有抑制高糖环境下HMC增殖的作用,抑制高糖诱导的p38MAPK、p-p38MAPK和megsin的表达,其作用机制可能与虫草益肾颗粒抑制p38MAPK信号活化及megsin表达有关。

虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞增殖和CAT、MDA表达水平的影响

目的观察虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMC)的增殖及过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)表达水平的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法将HMC随机分为6组:正常组、高糖组、福辛普利组、虫草益肾颗粒低、中、高剂量组,分别给予相应的含药血清处理后,用2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(CCK-8)检测24 h、48 h及72 h细胞增殖情况;收集48 h和72 h细胞上清液,用比色法分别检测各组CAT、MDA的表达水平。结果 HMC经高糖刺激后表现出明显增殖现象,且在24~48 h时增殖速度最快,48~72 h时增殖速度受抑制。各治疗组对高糖刺激下的HMC增殖均有抑制作用(P<0.01),且虫草益肾颗粒对HMC增殖的抑制作用呈时间与剂量依赖性关系。48 h、72 h时,与正常组比较,各组的CAT活性均明显下降(P<0.01),各组的MDA含量均明显上升(P<0.01),与高糖组比较,福辛普利组、虫草益肾颗粒低、中、高剂量组的CAT活性有明显上升趋势(P<0.05或P<0.01),MDA含量有明显下降的趋势(P<0.01)。结论虫草益肾颗粒益肾颗粒防治DKD的作用机制可能与促进自由基清除,抑制或阻断自由基引起的脂质过氧化反应,增强CAT活性,提高机体抗氧化能力有关。

虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:研究虫草益肾颗粒对体外高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMC)增殖的影响,探讨其在防治糖尿病肾病(DKD)中的意义。方法:将常规培养的HMC分为正常组、高糖组、虫草益肾颗粒高、中、低剂量组及福辛普利组,分别给予相应对照的动物含药血清处理后,用CCK-8法检测24 h、48 h及72 h细胞增殖情况。结果:HMC经高糖刺激后表现出明显的增殖现象,且在48 h增殖效果最明显,72 h时呈下降趋势。虫草益肾颗粒及福辛普利药物血清对高糖刺激下的HMC增殖均有抑制作用,其中虫草益肾颗粒高剂量组血清对HMC的抑制作用优于福辛普利组,且虫草益肾颗粒对HMC增殖的抑制作用呈时间与剂量依赖性关系。结论:高糖可促进HMC的增殖,虫草益肾颗粒能明显抑制高糖条件下HMC增殖,从而预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,延缓DKD病情进展。

虫草益肾颗粒治疗维持性血液透析患者微炎症状态临床研究

目的:观察虫草益肾颗粒对维持性血液透析(MHD)患者微炎症状态的影响。方法:将60例维持性血液透析患者随机分为治疗组、对照组各30例。两组均给予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加服虫草益肾颗粒,疗程12周。观察两组治疗前后血清肌酐、尿素氮、红细胞计数、血红蛋白、红细胞比积的变化;采用免疫比浊法检测血清C-反应蛋白(hs-CRP),采用ELISA法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:治疗后两组患者血清肌酐、尿素氮水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后两组红细胞计数、血红蛋白、红细胞比积较治疗前均有所改善,且治疗组优于对照组(P<0.05);对照组hs-CRP、IL-6、TNF-α水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗组hs-CRP水平较治疗前下降且低于对照组(P<0.05),治疗组IL-6、TNF-α水平有下降趋势,但无统计学意义。结论:虫草益肾颗粒可以降低维持性血液透析患者的血清C-反应蛋白水平,并能改善其贫血状态。

虫草益肾颗粒剂对糖尿病肾病大鼠WT_1和nephrin表达的影响

目的:观察虫草益肾颗粒剂对糖尿病肾病(DN)模型大鼠nephrin、WT1表达的影响。方法:将70只雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组和DN组。DN组大鼠行右肾切除后腹腔单次注射链脲佐菌素(STZ)造模成功后,再随机分为模型对照组、虫草益肾低剂量组、虫草益肾高剂量组和福辛普利组。于给药后的第2、4、6、8周末测定24小时尿蛋白量、空腹血糖、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)的变化。第8周末处死大鼠,HE染色观察肾小球、肾小管病理变化。WesternBlot法检测大鼠肾组织WT1的表达。RT-PCR检测大鼠肾组织nephrin表达。结果:①虫草益肾颗粒剂有降糖作用,且以高剂量组为明显。②虫草益肾颗粒各剂量组大鼠24小时尿蛋白定量在第6、8周时均低于模型组;福辛普利组大鼠24小时尿蛋白定量和虫草益肾低剂量组比较没有明显差别。③虫草益肾各剂量治疗组大鼠的BUN、SCr水平在第6周时均低于模型组;虫草益肾各剂量组大鼠的TC、LDL水平在第6、8周时低于模型组。④模型组nephrin表达增多,虫草益肾颗粒可减少其表达。⑤模型组WT1的表达比正常组对照组明显增多,虫草益肾高剂量组其表达量明显减少,与福辛普利组和虫草益肾低剂量组比较有明显差别。结论:虫草益肾颗粒对大鼠糖尿病肾病具改善作用,调节肾组织WT1和nepnmin表达是其机制之一。

虫草益肾颗粒剂对5/6肾切除大鼠α-平滑肌动蛋白表达的影响

目的:观察虫草益肾颗粒剂对5/6肾切除模型大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法:将SD雄性大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组B组、治疗组(C组)、对照组(D组),除假手术组外均行5/6肾切除手术制作肾衰竭动物模型。给药方案:第1次手术后,各组开始灌胃给药,直至第2次手术后12周结束。C组给予虫草益肾颗粒剂水煎剂灌胃,D组给予福辛普利氯化钠溶液灌胃,1次/d。假手术组与模型组每天给予等量的蒸馏水灌胃。每组设4个采样点,即第2次手术后0、4、8、12周,每组大鼠同一时间点处死10只大鼠,观察肾脏组织形态学改变及α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果:虫草益肾颗粒剂可抑制肾脏组织α-平滑肌肌动蛋白的表达,与对照组比较有显著性差异,优于福辛普利组。结论:虫草益肾颗粒剂可抑制肾脏组织α-平滑肌肌动蛋白的表达,从而延缓肾纤维化的进展。

虫草益肾颗粒剂的制备工艺研究

目的确立虫草益肾颗粒剂的制备工艺。方法虫草益肾方以出膏率、浸出物和大黄总蒽醌、迷迭香酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为指标。单独考察浸泡时间与药材吸水率间的关系,通过L9(34)正交试验对虫草益肾方的加水量、水提取时间、提取次数进行考察,确定该方法的最佳的提取工艺;考察常压与减压下浓缩与干燥的最佳工艺;经过对不同辅料制成颗粒后的粒度、休止角、溶化率吸湿率四项指标的的综合考察,确定了虫草益肾方的最佳辅料及其最适宜比例,从而确立虫草益肾颗粒剂的制备工艺。结果经实验得出黄芪、大黄、肾茶、水蛭,加水提取3次,第一次加浸泡90min,分别加入8倍、6倍、4倍水量,冷凝回流煎煮90、60、30min,合并3次提取液,药液浓缩至相对密度为1.26~1.32,烘干,粉碎,加入虫草被孢菌粉,过筛,混匀,加入辅料,混匀,制软材,干燥,整粒,包装。结论该制备工艺合理、可行、简便,为工业化大生产奠定了基础。

虫草益肾颗粒对高糖条件下肾小球系膜细胞氧化应激及p22phox表达的影响

[目的]研究虫草益肾颗粒对高糖环境下人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)氧化应激及p22phox表达水平的影响,探讨其防治糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)的作用机制。[方法]将50只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级Wistar大鼠随机分为正常组,福辛普利组,虫草益肾颗粒低、中、高剂量组,每组10只。以细胞增殖检测(cell counting kit-8,CCK-8)法检测HMCs在24、48、72 h的细胞增殖情况;分别于48、72 h时,以流式细胞术检测各组HMCs的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;以免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)法检测各组p22phox的表达情况。[结果] HMCs经高糖培养后增殖明显,48 h时的增殖率最高,随后便进入增殖平台期,增殖速度逐渐趋于平缓。各给药组对高糖培养下的HMCs的增殖均有抑制作用(P<0.01),且虫草益肾颗粒对HMCs增殖的抑制作用呈时间-剂量依赖性关系。与正常组比较,48、72 h时各组细胞ROS水平均增高(P<0.05),p22phox的mRNA及蛋白表达量明显升高(P<0.01)。与高糖组比较,福辛普利组、虫草益肾颗粒低、中、高剂量组细胞的ROS水平、p22phox的m RNA及蛋白表达量均明显下降(P<0.05或P<0.01)。[结论]虫草益肾颗粒可能是通过抑制p22phox基因转录,下调p22phox蛋白表达来减少细胞内ROS的生成,从而减轻氧化应激反应,延缓DKD发生发展。

虫草益肾颗粒对高糖诱导人肾小球系膜细胞氧化应激及p47phox表达的影响

目的:研究虫草益肾颗粒对高糖培养下人肾小球系膜细胞(HMCs)的氧化应激及p47phox表达水平的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法:将HMCs随机分为6组:正常组、高糖组、福辛普利组和虫草益肾颗粒低、中、高剂量组,分别给予相应的动物含药血清处理后,收集48 h和72 h细胞上清液,用流式细胞术检测各组细胞的活性氧簇(ROS)水平,用比色法分别检测各组超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。用Western Blot和Real-time PCR法分别检测p47phox蛋白和mRNA表达。结果:48 h、72 h时,与正常组比较,各组SOD活性均明显下降(P<0.01),各组ROS及MDA含量均明显上升(P<0.01),HMCs p47phox mRNA及蛋白表达量明显升高(P<0.01);与高糖组比较,福辛普利组、虫草益肾颗粒低、中、高剂量组SOD活性明显上升(P<0.05或P<0.01),ROS、MDA含量明显下降(P<0.01),p47phox mRNA及蛋白表达量均明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:虫草益肾颗粒可通过增强SOD活性,降低ROS、MDA含量,改善HMCs氧化应激状态,延缓DKD进程。