克氏原螯虾虾青蛋白A2基因克隆、组织分布及原核表达

虾青蛋白对甲壳类水产品色泽的形成和调控具有重要作用。为探究克氏原螯虾虾青蛋白A2(PcCRA2)的基因结构及原核表达,作者通过基因克隆获得PcCRA2基因编码序列(cra2),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测cra2基因在克氏原螯虾9种组织中的表达模式,并以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,进行PcCRA2异源重组表达。结果表明,克氏原螯虾cra2基因cDNA全长573 bp,编码190个氨基酸。生物信息学分析显示,虾青蛋白A2相对分子质量为21 158.9,理论等电点为5.59。氨基酸序列比对发现,克氏原螯虾cra2编码蛋白质序列与红螯螯虾相似度最高,为91.58%。RT-qPCR结果显示,cra2在所检组织中均有表达,在表皮的表达量最高(P<0.05)。构建了pET28a-cra2原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达。其最佳诱导表达条件为:接种4 h后加入0.5 mmol/L IPTG于30℃诱导6 h;UV-vis结果表明重组蛋白质能与虾青素特异性结合,最大吸收峰为505 nm。该研究结果为进一步研究虾青蛋白质的生物功能奠定基础。

南美白对虾壳中虾青蛋白性质的研究

采用远紫外圆二色光谱法对提取自南美白对虾Litopenaeus vannamei壳中的β虾青蛋白的理化性质进行了研究。结果表明:该蛋白是一种以α螺旋(含量为69%)为主要二级结构存在的二聚物,相对分子质量约为75 000,最大吸收波长为580 nm;在40℃以下加热以及外加盐未加热时,该蛋白会出现可逆变性,升温至40℃以上、改变溶液pH均会对二级结构造成破坏,引起蛋白不可逆变性;加热30 min时,α螺旋损失率最大,约为50%;外加盐在升温时会加速蛋白的不可逆变性,其加速能力与盐浓度成反比;从南美白对虾壳与美国龙虾壳中提取的虾青蛋白在吸收光谱、离子柱亲合力等上有明显区别。研究表明,南美白对虾壳中的虾青蛋白具有水溶性、热不稳定性和遇热显色等性质,可作为食品着色剂或温度敏感指示剂。

pH调节法分离凡纳滨对虾壳中β虾青蛋白的研究

采用pH调节法对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)虾壳中影响虾壳红变的β虾青蛋白进行分离回收,以蛋白质回收率、纯度和二级结构含量为分离特性参数,以1.0为pH变化梯度,研究pH调节法从虾壳中提取β虾青蛋白的规律。结果显示,pH调节法的回收率为47.5%,所得蛋白质纯度为78.23%、分子量为45 000 Da。该蛋白质在pH3.0和11.0时有最大溶解度,分别为60.5%和55.7%;在pH5.0时溶解度最低为15.4%;等电点为5.6。通过圆二色光谱图分析得知β虾青蛋白是一种以α螺旋为主要二级结构存在的物质,pH调节法所得α螺旋含量为70.1%。

克氏原螯虾PcCRCN-L基因的克隆鉴定及在低氧胁迫下的表达响应

虾青蛋白(Crustacyanin,CRCN)在甲壳动物脂类代谢及低氧胁迫应激调控等方面具有重要的功能。为获取虾青蛋白在克氏原螯虾(Procambarus clarkii)性腺发育和低氧胁迫应答中的作用,本研究在克氏原螯虾肝胰腺组织中鉴定出1个类虾青蛋白PcCRCN-L基因的c DNA序列,分析了PcCRCN-L基因的结构特征和进化模式,研究了PcCRCN-L基因在不同组织与性腺不同发育时期的表达特征,探讨了Pc CRCN-L在低氧–复氧胁迫下的表达响应模式。结果显示,PcCRCN-L基因c DNA序列长2700 bp,其开放阅读框(ORF)长度为1587 bp,编码528个氨基酸残基;DNA序列长6130 bp,位于克氏原螯虾基因组的第12号染色体,包含5个外显子和4个内含子,内含子/外显子剪接方式符合GT-AG规则。Pc CRCN-L具有1个完整的lipocalin结构域,包含典型的序列保守区Ⅰ(SCR1)序列G-X-W、保守区Ⅱ(SCR2)序列T-D-Y和保守区Ⅲ(SCR3)序列精氨酸R。多序列比对与系统进化分析结果显示,PcCRCN-L独立于传统虾青蛋白A和C亚族,单独聚为一支。Pc CRCN-L在克氏原螯虾多个组织中均有表达,在肝胰腺中表达量最高;在性腺不同发育时期,肝胰腺以及卵巢组织中的Pc CRCN-L基因表达量显著降低;低氧胁迫下,肝胰腺组织中Pc CRCN-L表达量显著降低,复氧后显著升高。研究结果表明,PcCRCN-L与克氏原螯虾性腺发育密切相关,并参与了克氏原螯虾的低氧–复氧胁迫应激调控。

南美白对虾红变因素及控制技术研究

针对南美白对虾在冷藏及销售过程中的红变现象,研究南美白对虾红变的相关影响因子以及探索最佳抑制红变条件。在pH、温度、盐度和光照条件分别对南美白对虾红变影响的实验基础上,设计正交实验来确定最佳抑制红变条件;通过添加小分子氨基酸进行了红变抑制剂的筛选。结果表明:pH、温度、阳光直射对南美白对虾红变的影响显著(p<0.01),盐度无显著影响(p>0.05);正交实验发现,低温冻藏、避光处理时可减缓南美白对虾的红变;添加1~1.5 mg/mL的L-半胱氨酸或甘氨酸,且调pH至7.3~8.3时可在一定程度上抑制南美白对虾的红变。

向红心鸭蛋要抗氧化剂

虾、蟹加热后为啥会变色虾、蟹受热后会变成橘红色,这几乎人人都知道。但究竟为什么会变色,一直是科学界感到困惑的问题。从1995年起,英国曼彻斯特大学、德瑞斯伯雷实验室、伦敦帝国学院和伦敦大学的研究人员。