液相芯片技术同时检测对虾桃拉病毒和虾黄头病毒的研究

为建立一种同时检测对虾桃拉病毒、虾黄头病毒的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中对虾桃拉病毒的CP2基因和虾黄头病毒的N基因进行序列分析,设计对虾桃拉病毒、虾黄头病毒特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与对虾桃拉病毒、虾黄头病毒病毒RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。该检测体系对对虾桃拉病毒、虾黄头病毒病毒核酸检测灵敏度高,其最低检测限为100pg,且与白斑病毒、鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死病毒核酸等无交叉反应。该方法灵敏度及特异性高,为同时快速检测对虾桃拉病毒、虾黄头病毒提供了简捷快速的技术手段。

虾桃拉病毒、黄头病毒和白斑病毒液相芯片快速检测方法的建立

本研究通过设计、合成并修饰基因特异性引物和寡核苷酸探针并标记生物素,利用该探针与荧光编码微球偶联后与虾黄头病毒(Yellow head virus,YHV)、虾桃拉综合征病毒(Taura syndrome virus,TSV)和白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Luminex200)检测荧光信号,初步建立了虾黄头病毒、桃拉病毒和白斑病毒的快速同步检测方法。结果显示,建立的该方法具有较好的特异性,偶联特异性探针的微球只与相应的病毒基因的PCR产物反应,而不与其他虾病病毒基因反应,YHV、TSV和WSSV检测灵敏度高分别为401.5、251.5和75.2 copies。