新城疫病毒分离株的蚀斑纯化及影响蚀斑形成的主要因素

从西北地区 1979～ 1999年发生新城疫的鸡群中分离和收集的 15株新城疫病毒 ( NDV) ,经蚀斑纯化 ,共得到 11个克隆毒株 ;对其进行了蚀斑形成能力的测定 ,证明蚀斑形成能力与毒力成正比 ;探讨了温度对蚀斑形成能力的影响 ,证明 NDV蚀斑形成能力在 4 1℃比 37℃强 ,表现为蚀斑出现早、蚀斑大、蚀斑形成单位 ( PFU)高 ,同时在 4 1℃时细胞生长状况良好 ,不易污染 ,故认为在 4 1℃进行 NDV的蚀斑纯化值得推荐。

用蚀斑形成试验分离虫媒病毒

本文报告用蚀斑形成试验分离虫媒病毒。从643个蚊虫混合标本中分离到乙脑病毒104株,甲病毒1株。经过C6/36白纹伊蚊细胞增殖后,标本阳性率为14.2％,直接从蚊虫混合标本分离的阳性率为13.2％,前者的蚀斑数显著高于后者(P<0.001)。乙脑病毒蚀斑于接种后第4～9天出现,直径约6mm,边缘较模糊。甲病毒蚀斑于接种后第2～3天出现,直径1～2mm,较乙脑病毒小。用蚀斑形成试验分离虫媒病毒的优点是可以根据蚀斑的形态和出现时间,初步区别分离物是甲病毒属或黄病毒属。

蚀斑克隆技术纯化猪传染性胃肠炎病毒分离株

为了研究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)体外分离纯化方法,试验采用蚀斑技术对TGEV进行克隆纯化,建立了TGEV蚀斑形成方法,并利用该方法对含有TGEV的混合感染病毒进行3次克隆筛选,并对纯化后的病毒进行了一系列检测试验。结果表明:纯化后的病毒产生的蚀斑大小一致且RT-PCR检测TGEV阳性率为100%;对不同代次细胞毒进行RT-PCR检测结果均为阳性;间接免疫荧光试验中,病毒组有特异性荧光产生;直接负染法可看到典型的病毒结构,证明该克隆毒株在ST细胞上能够稳定增殖;纯化后的病毒效价有所提高。说明试验初步建立的TGEV蚀斑形成方法可用于分离毒基础生物学特性及病毒相关应用研究。

兔轮状病毒蚀斑特性研究

从哈尔宾自然腹泻幼兔的粪样中，成功地分离出一株兔轮状病毒（ＬａＲＶ，Ｎ５），经（ＭＡ１０４）细胞适应继代２４代，２４代细胞培养养蚀病斑滴度为１０＾９ＰＦｕ／ｍｌ蚀斑试验培养瓶在３７℃培养５天，形成直径为１～５ｍｍ的圆形蚀斑。

马立克疫苗添加“澳赛康”及稀释液后对蚀斑生长的影响试验

为评价澳赛康(注射用头孢噻呋钠)及其稀释液对马立克疫苗效力的影响,以马立克疫苗蚀斑生成单位为指标,在体外通过马立克氏活疫苗与澳赛康及其稀释液分别作用0、30、60、90min等4个时间点后接种到鸡胚成纤维细胞中孵育,测定疫苗蚀斑形成单位的变化。结果表明,添加药物后的马立克疫苗在各个时间点蚀斑数与空白组之间没有显著性差异(P>0.05),澳赛康及其稀释液对疫苗效力无影响。本试验为澳赛康及其稀释液和马立克疫苗在临床上的联用提供了实际依据。

H5N1亚型禽流感病毒NS第263~277位核苷酸缺失提高病毒对鸡的致病力

为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表达／转录载体（848）和其补加15个核苷酸的NS突变载体（m848）。构建的载体分别与编码WSN（H1N1）内部基因载体进行组合转染，拯救获得4个具不同NS的重组的H5N1亚型流感病毒：RWSN-848和RWSN—m248在263-277位缺失15个碱基。RWSN-m848和RWSN-248则在相同位置不发生缺失。4个重组病毒的平均鸡胚繁殖效价（HA）、鸡胚的平均死亡时间（MDT）和鸡胚半数感染量（EID50）均无显著差异；但RWSN-848和RWSN-m248对6周龄SPF鸡的致病力明显高于RWSN—m848和RWSN-248。结果说明H5N1的NS基因在263～277位核苷酸发生缺失后，不影响重组H5N1在鸡胚中的繁殖性能，但提高了病毒对鸡的致病力。

柴石退热颗粒对乙型脑炎感染BHK-21细胞的抑制作用

目的:研究柴石退热颗粒对乙型脑炎病毒(JEV)感染BHK-21细胞的抑制作用。方法:分别采用不同浓度的柴石退热颗粒药液(40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL及320μg/mL)及10μg/mL利巴韦林处理JEV感染的细胞,24 h后观察各组细胞的形态及蚀斑形成,比较各组的细胞病变效应抑制率(CPE抑制率)及蚀斑抑制率。结果:不同浓度的柴石退热颗粒的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异具有统计学意义(P<0.05)。320μg/mL的柴石退热颗粒及利巴韦林的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异无统计学意义(P>0.05),40μg/mL、80μg/mL及160μg/mL的药液的CPE抑制率及蚀斑抑制率显著低于利巴韦林(P<0.05)。结论:柴石退热颗粒能抑制乙型脑炎病毒感染对BHK-21细胞造成的损伤。

H5N1禽流感病毒实验室检测方法灵敏性比较

目的比对实验室常用的H5N1禽流感病毒检测方法灵敏性。方法增殖H5N1病毒,蚀斑技术定量待检病毒,应用细胞接种、血凝实验、RT-PCR、Real-time RT-PCR等方法检测稀释的病毒悬液,比较检测的最低滴度。结果细胞接种、Real-time RT-PCR、RT-PCR及血凝实验能检测病毒的最低滴度为10 PFU/mL、10 PFU/mL、103 PFU/mL及3.52×105 PFU/mL。结论几种检测方法比较而言,细胞接种与Real-time RT-PCR检测灵敏性最高;血凝实验用时最短,但灵敏性低,结果需要进一步确认;RT-PCR用时较较短,检测灵敏性较高。

柴石退热颗粒对乙型脑炎感染BHK-21细胞的抑制作用

目的：研究柴石退热颗粒对乙型脑炎病毒（JEV）感染BHK一21细胞的抑制作用。方法：分别采用不同浓度的柴石退热颗粒药液（40μg／mL、80μg/mL、160μg/mL及320μg/mL）及10μg/mL利巴韦林处理JEV感染的细胞，24h后观察各组细胞的形态及蚀斑形成，比较各组的细胞病变效应抑制率（CPE抑制率）及蚀斑抑制率。结果：不同浓度的柴石退热颗粒的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异具有统计学意义（P〈0．05）。320μg/mL的柴石退热颗粒及利巴韦林的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异无统计学意义（P〉0．05），40μg/mL、80μg/mL及160μg/mL的药液的CPE抑制率及蚀斑抑制率显著低于利巴韦林（P〈0．05）。结论：柴石退热颗粒能抑制乙型脑炎病毒感染对BHK-21细胞造成的损伤。

冻干水痘减毒活疫苗的稳定性

目的 观察冻干水痘减毒活疫苗的稳定性。方法 将样品分别放37℃、22℃、8℃、-15℃及-70℃,不同时间取出,采用蚀斑形成单位（PFU）分别测定样品毒力滴度。结果-15℃以下保存5年或8℃保存92周,疫苗滴度仍很稳定,8℃保存100～124周滴度缓慢下降,但仍保持在规程规定的标准以上。22℃保存30周滴度不变。37℃（模拟长期老化试验）保存1周,滴度下降不超过一个对数指数。37℃保存4周,病毒滴度下降缓慢。结论 水痘 减毒活疫苗稳定性良好。

规模化鸡场鸡马立克氏病的综合防治

一、疾病概述鸡马立克氏病（Marek’sdiseake M.D）是由马立克病毒引起鸡的高度接触性淋巴细胞恶性增生肿瘤性传染病。据临床和病变发生部位可分内脏型、神经型、眼型和皮肤型。本病死亡率很高,对养鸡业的危害很大,流行普遍,目前种鸡场对该病比较重视免疫,所有1日龄雏鸡都接种马立克氏CVI988疫苗,鸡群发病几率变小,但仍有发病,且内脏型特别明显。

鸡马立克疫苗稀释后置20℃以上环境中对PFU影响的试验

鸡马克氏病(MD)疫苗(HVTFc—126株)用SPG稀释后,在自然温度(20℃～22℃)下,随着时间的延长,蚀斑形成单位(PFU)显著下降,如果在这样的状况下免疫,会严重影响对鸡的防疫效果,如何指导用户正确使用MD疫苗,对有效控制鸡马立克氏病的发生是一关键问题。为了进一步探索在20℃以上温度环境中MD疫苗稀释后随着时间的增加而其PFU下降的程度,特作以下试验。

一种前景广阔的单剂量、四价减毒登革热疫苗候选物

登革病毒的迅速传播在全球范围内造成了巨大的健康威胁,居住在超过100个国家,约占全球40%的人口面临着登革病毒传播的风险,其中包括美国。2010年,全球共报告登革病毒感染案例3.9亿,其中0.96亿出现了感染症状。感染登革病毒会造成一系列临床症状,包括与其他疾病无明显差别的轻微发热、典型登革热或者重症登革热。

鸡对马立克病病毒及可移植性肿瘤细胞株的遗传性抵抗力

用 MD 病毒和移植性马立克氏病肿瘤细胞株,对以正常血清中 IgG 量的高低两个指标选育的两个品系进行了接种试验。试验表明,L 品系鸡对 MD 病毒的抵抗力比 H 品系鸡强;而对可移植性马立克氏病肿瘤细胞的抵抗力,H 品系鸡却明显强于 L 品系鸡。

速克冻干粉与马立克疫苗混合应用的效果观察

用含有不同浓度抗生素的马立克疫苗,接种鸡成纤维细胞,观察不同浓度的抗生素对马立克疫苗蚀斑形成单位的影响。结果表明庆大霉素对马立克蚀斑形成有抑制作用,而头孢噻呋冻干粉对马立克的蚀斑形成没有影响;通过一年多的临床应用也证明了速克冻干粉与马立克疫苗同时使用可以增强雏鸡对细菌疾病的抵抗力,降低鸡白痢、大肠杆菌病和支原体病的发病率,提高雏鸡早期成活率。

鸡传染性喉气管炎实验室诊断

澳大利亚N.S.W.州早在1935年就有鸡传染性喉气管炎(ILT)暴发的报道,随后证实在其它州亦有此病存在。急性型主要发现于N.W.S维多利亚和西澳大利亚,根据临床症状即可作出诊断。温和型则多见于南澳大利亚和昆士兰等地,该型很易和鸡其它呼吸道疾病相混淆,所以需通过ILT病毒感染实验才能确诊。实验室诊断包括细胞学检验、病毒分离和抗体检验三种检验方法,一般根据其一种或几种检验结果就可作出诊断报告。

四株猪轮状病毒蚀斑特性试验

从江苏省自然腹泻病猪粪便中分离获得的四株猪轮状病毒,都能在MA104单层细胞上形成蚀斑,其中三株形成大小不同的蚀斑,另一株仅形成小蚀斑。蚀斑试验培养瓶,在37℃中培养五天,大蚀斑直径达3—6毫米,小蚀斑达1—2毫米。在灯光下,可见蚀斑呈云块状;在低倍显微镜下,蚀斑呈深色的细胞团块;用10％福尔马林结晶紫液固定染色,活细胞层染成深紫色而病毒感染的细胞脱落而成蚀斑。

狂犬病病毒不同毒株的生物学特性研究

目的研究狂犬病不同固定毒株对动物的致病性和对细胞的感染性。方法以小鼠脑内和肌内途径接种比较不同毒株的致病性,研究并建立HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）诱导的空斑形成技术测定病毒空斑形成单位（plaque-forming unit,PFU）和细胞病变感染技术测定病毒感染滴度（CCID50）,并用以比较不同毒株的病毒滴度,实验同时以常规的直接免疫荧光法（direct immunofluorescent assay,dFA）做对照。结果不同固定毒株对10~12g小鼠的脑内致病力普遍很高,但肌内毒力普遍较低,脑腔感染致病力比肌内感染致病力高3.0~5.0lg LD50,CVS株相差最大为5.0lg LD50。用两种新的方法 （PFU和CCID50）测定不同毒株的病毒滴度与dFA法测定的结果比较,除个别株外无明显差异,如CVS-11、4aG、PV株用三种方法测定的滴度均在7.1~7.9lg。结论用dFA法测定病毒滴度的结果与小鼠脑内测定的结果有可比性,用以替代小鼠脑内法测定病毒滴度是可行的。两种细胞感染法测定的病毒滴度操作简便,无需贵重仪器和昂贵试剂,可以更广泛地应用于狂犬病病毒和疫苗发展的研究。