河南省首次从蚊体中分离出乙型脑炎病毒

河南省首次从蚊体中分离出乙型脑炎病毒余福勋，吴振溢，张彦平，李林村，曾贵金，夏占国流行性乙型脑炎是由蚊媒传播的自然疫源性疾病，严重危害人民健康，病死率高。约１／３患者治愈后存在不同程度后遗症。河南省１９８９、１９９０、１９９１连续三年乙脑发病率在全国...

蚊体内马来丝虫幼虫的基因检测

目的 :探索蚊体内马来丝虫幼虫基因检测的新方法 ,并用于丝虫病监测。方法 :利用基因工程技术合成马来丝虫寡核苷酸片段 ,经32 P标记后作为探针 ,以斑点杂交法检测蚊体内马来丝虫幼虫。结果 :该探针可从多种标本中特异地检出马来幼丝虫DNA ,敏感性为 2ng靶DNA量 ,蚊体内含 1条幼虫即可出现阳性杂交。结论 :该技术具有良好的实用性 。

DNA探针聚合酶链反应免疫发光技术鉴定蚊体内班氏丝虫幼虫

在丝虫病防治和监测过程中,对蚊体内幼丝虫的感染率和感染度的检测,从而了解丝虫病传播强度和动态,评价丝虫病防治效果,是流行病学研究中非常重要的内容之一。传统鉴定蚊媒体内幼丝虫的方法是以形态学为依据,往往不易鉴别动物丝虫或人丝虫(特别Ⅰ、Ⅱ期幼虫)。近年来由于分子生物学和基因工程技术的发展,对丝虫生物学的研究开始进入基因水平。DNA 重组技术是鉴定寄生虫的基因,了解丝虫病的发病机制,传播规律,虫种鉴定,诊断及丝虫病防治与鉴测评价具有重要实用价值的新技术。我们应用非放射性同位素标记物标记实验室内制成的班氏丝虫种特异性 DNA 探针,通过聚合酶链反应(PCR)以便增加要分解出靶 DNA 量。在最初实验中。

西藏墨脱县疟疾流行区多斑按蚊复合体种型鉴定

目的鉴定西藏林芝地区墨脱县疟疾流行区多斑按蚊复合体的种型。方法墨脱县捕获的5190只按蚊经形态学鉴定为多斑按蚊复合体后,随机取575只,酚-氯仿法提取单蚊DNA作为模板,根据伪威氏按蚊、多斑按蚊、威氏按蚊、达罗毗按蚊和塞沃按蚊分别设计5对特异性引物,PCR扩增rDNA第二转录间隔区(ITS2)片段,进行种型鉴别。对目标片段进行测序、同源性比对,并运用MEGA(3.1)软件构建多斑按蚊复合体的系统进化树。结果575份DNA样本中有11份扩增出约231bp的条带,即威氏按蚊(1.9%);564份扩增出约119bp的条带,为伪威氏按蚊(98.1%)。PCR种型鉴定结果与同源性比对及系统进化树的结果一致。结论西藏林芝地区墨脱县疟疾流行区多斑按蚊复合体由伪威氏按蚊和威氏按蚊构成,伪威氏按蚊为优势蚊种。

我国多斑按蚊复合体成员种的分子鉴别研究

目的 建立我国多斑按蚊复合体5成员种的分子鉴别方法。 方法 测定并分析各成员种的rDNA-ITS2序列,并设计种特异引物,应用PCR法鉴别。结果 多斑按蚊复合体5成员种的ITS2序列长度和GC含量分别为伪威氏按蚊328 bp、58.54％、多斑按蚊330 bp、57.85％、威氏按蚊337 bp、59.05％、达罗毗按蚊334 bp、58.68％和塞沃按蚊338 bp、57.69％,各种内的ITS2序列保守,而种间的差异率范围为9.7％～18.9％。应用5.8S引物和5个种特异引物可以分别扩增出119、186、231、327和406 bp等5条清晰不同的种特异条带,以鉴别各蚊种。 结论 基于ITS2序列差异建立的我国多斑按蚊复合体5成员种的PCR鉴别简便易行、可靠。

应用PCR-SSCP鉴别我国多斑按蚊复合体成员种(双翅目:蚊科)

测定并分析了我国多斑按蚊复合体5个成员种(多斑按蚊、威氏按蚊、伪威氏按蚊、达罗毗按蚊和塞沃按蚊)核糖体DNA28S-D3序列,应用PCR-SSCP技术对该复合体成员种进行分子鉴别。结果显示:我国多斑按蚊复合体5个成员种的D3序列长度范围为388～394bp,GC含量为58.12%～59.79%,D3序列在种内保守,在种间存在差异,种间差异最大的是达罗毗按蚊与伪威氏按蚊为6.55%,最小的是达罗毗按蚊与多斑按蚊为2.58%,平均差异率为4.59%。用SSCP分析多斑按蚊复合体5个成员种的28S-D3扩增产物,结果显示电泳条带具种特异性,可用于鉴别各蚊种。

西藏墨脱县多斑按蚊复合体尚未发生击倒抗性突变

目的探明西藏林芝地区疟疾流行区墨脱县多斑按蚊复合体是否发生击倒抗性突变,并获得我国多斑按蚊复合体5成员种钠离通道蛋白基因(VGSC)IIS4-S6区段基因序列信息。方法采用简并引物扩增我国多斑按蚊复合体5成员种的VGSC基因IIS4-S6区段,扩增产物双向测序拼接;PCR扩增墨脱县背崩乡、德兴乡、墨脱镇和达木乡捕获的共161只多斑按蚊复合体VGSC基因,对PCR产物双向测序,观察L1014位点是否发生突变。结果获得我国多斑按蚊复合体5成员种VGSC基因IIS4-S6区段基因序列,5成员种L1014位点均为TTA,对墨脱县的背崩乡、墨脱镇和达木乡捕获的伪威氏按蚊和威氏按蚊进行VGSC扩增并测序,均未发生击倒抗性突变。结论西藏林芝地区墨脱县多斑按蚊复合体尚未发生击倒抗性突变。

我国赫坎按蚊复合体成员种的rDNA-ITS2区序列差异及系统发育分析

测定了我国赫坎按蚊复合体 9成员种的核糖体DNA第二内转录间隔区 (rDNA ITS2 )序列 ,根据序列差异分析各蚊种间的系统发育关系。结果显示 :( 1 )ITS2区序列最长的是中华按蚊 ( 4 6 8bp) ,最短的是克劳按蚊和赫坎按蚊 ( 4 36bp) ;GC含量为 4 4 9%～ 4 6 8% ;( 2 )发现该复合体 4成员种的ITS2区序列存在种内个体间差异 ,幅度为 0～ 3 8% ,明显小于种间差异 ;( 3)将各蚊种的ITS2区序列进行同源排序比较 ,发现其变异大多是简单重复单元的拷贝数不同 ;种间差异性最大的是克劳按蚊与嗜人按蚊( 32 3% ) ,最小的是贵阳按蚊与凉山按蚊 ( 9 0 % )平均差异率为 2 2 3% ;( 4 )根据ITS2区序列特征 ,用 3种方法构建的树状图拟合一致。以上结果表明赫坎按蚊复合体各成员种rDNA ITS2序列在种内非常保守 ,以种间序列差异分析为基础的分子鉴别技术是甄别蚊种分类地位混淆和错误的有效方法。

山东省赫坎按蚊复合体成员种的分子鉴别研究

目的 进一步确认山东省赫坎按蚊复合体成员种。方法 采用鉴别PCR方法,对采自山东省8个地点经形态学初步鉴定的645只蚊虫进行检测,并对已检测的标本随机抽取数个样本,进行rDNA-ITS2序列测定。结果 645份样本中,中华按蚊占90.85％(586/645)、雷氏按蚊占5.27％(34/645),无扩增条带的标本占3.88％(25/645)。测定已鉴别的山东省中华按蚊、雷氏按蚊的ITS2序列长度分别为469bp和451hp,经Blast比对分析,显示与已公布的序列完全相同;3份无扩增条带标本的序列经核对为库蚊。结论 山东省分布的赫坎按蚊复合体成员种主要为中华按蚊、雷氏按蚊,其它成员种有待进一步证实。

微小按蚊复合体研究进展

摘要 近年来,有关微小按蚊复合体的研究相继开展,尽管现代分子生物学技术在按蚊复合体研究中日渐重要,但传统的生物学方法在微小按蚊复合体近缘种鉴别研究中仍占主导地位。本文从以上两方面对其研究进展进行综述。

尼日利亚南部阿贝奥库塔地区冈比亚按蚊复合体的形态特征研究(双翅目：蚊科)

对采自尼日利亚南部城市阿贝奥库塔冈比亚按蚊复合体Anopheles gambiae complex的形态特征进行了研究。依据2005年8月至2006年7月灯诱捕获的364个冈比亚按蚊复合体标本,分别对它们的触角、翅、喙、前足、中足和后足6个部位的长度进行了测量,对月平均值进行回归分析,同时利用差异系数(coefficient of difference,CD)进行近缘分析。分析显示,各特征的长度平均值雨季大于旱季,但是回归分析表明长度变化与季节不显著相关(P>0.05)。差异系数分析结果表明,仅触角长度和翅长显示此复合体为两个不同的种群(CD>1.28),而其他特征值表明为同一种群。因此,该研究结果提示触角长度及翅长对冈比亚按蚊复合体近缘种的区分有重要参考价值。

库态按蚊复合体A、B和C种对约氏疟原虫和文氏疟原虫的易感性

在印度众多的传疟媒介中,广泛分布的库态按蚊(Anopheles culicifacies)复合体所引起的疟疾病例占总数的60％-70％。4个成员种A、B、C和D间存在许多生物学差异,其中媒介潜能的差异可能最具流行病学意义。研究显示,A、C、D种在印度各地具有明确的疟疾传播作用,而B种虽与其它成员种同域分布,但在印度南北部的传疟作用不同。本文比较库态按蚊复合体A、B和C种对2种鼠疟原虫的易感性。

巢氏PCR判定西藏疟疾流行区传疟媒介

目的确定西藏墨脱县疟疾流行区的疟疾传播媒介。方法根据2005、2006和2007年疟疾发病情况,在墨脱县选择了3个疟疾发病较高的自然村,采用人诱、牛诱、灯诱及清晨人房全捕等方法捕获成蚊,经形态学鉴定后麻醉处死,密封干燥,带回实验室-20℃冻存备用,采用混合样本法随机抽取10只多斑按蚊复合体为一份混合标本,提取蚊虫DNA。根据文献采用巢氏PCR扩增疟原虫小亚单位核糖体脱氧核糖核酸(SSUrDNA),并对阳性结果克隆测序,比对证实。结果共捕获按蚊5345只,其中多斑按蚊复合体5190只,带足按蚊155只,提取的360份多斑按蚊复合体混合样本DNA中发现子孢子阳性扩增样品2份,种型鉴定2份阳性混合样本均为伪威氏按蚊,PCR产物经克隆测序,NCBIBLAST同源性比对证实为疟原虫SSurDNA基因片段。结论多斑按蚊复合体中的伪威氏按蚊为西藏林芝疟疾流行区的传疟媒介。

PCRRFLP单酶切法鉴别赫坎按蚊复合体的研究

目的建立一种新的赫坎按蚊复合体近缘种按蚊基因鉴别技术,应用于现场按蚊样本的鉴别。方法用分子生物学软件Vector NTI 9.0,对赫坎按蚊复合体的嗜人按蚊、雷氏按蚊、中华按蚊、八代按蚊4个近缘种按蚊rDNA基因的ITS2区段序列进行限制性内切酶酶切位点预测分析,选择特异性内切酶,建立一种能同时鉴别4种近缘种按蚊的聚合酶链反应限制性片段长度多态(PCR RFLP)单酶切法鉴别技术,并对现场捕获的452只按蚊样本进行基因鉴别。结果软件预测赫坎按蚊复合体近缘种4种按蚊的rDNA基因的ITS2区段可被限制性内切酶Dde I切成大小易于区分的不同片段,PCR RFLP单酶切实验结果和软件预测结果完全吻合。4个疟疾流行区捕获的452只按蚊样本经PCR RFLP Dde I单酶切法鉴定有20只嗜人按蚊、6只雷氏按蚊、391只中华按蚊、35只八代按蚊,与形态学鉴别结果符合率为93.4%,与PCR RFLP双酶切法结果符合率为100%。结论新建立的PCR RFLP Dde I单酶切法基因鉴别技术可准确鉴别赫坎按蚊复合体,比传统的形态学鉴别更为简便、可靠,适合用于复合媒介地区的媒介监测。

我国多斑按蚊复合体mtDNA-COⅠ基因序列特征与系统发育学研究

目的测序并比较多斑按蚊复合体5成员种(伪威氏按蚊、多斑按蚊、威氏按蚊、达罗毗按蚊及塞沃按蚊)mtD-NA-COⅠ基因序列差异,并探讨其系统进化关系。方法多斑按蚊复合体经形态学和ITS2分子鉴定种型后,PCR扩增多斑按蚊复合体mtDNA-COⅠ基因序列,采用Chromas软件核对,必要时手动调整,采用Bioedit软件进行比对分析,采用Mega3.0软件构建系统进化树。结果 PCR扩增mtDNA-COⅠ基因序列全长约645～660bp,平均G+C含量为29.1%,A+T含量为70.9%。5种不同算法计算的5成员种成对种间距离有较小偏差,但种间遗传距离范围基本趋于一致,以塞沃按蚊、达罗毗按蚊及多斑按蚊亲缘关系最近,其后依次为威氏按蚊和伪威氏按蚊。结论根据mtDNA-COⅠ基因序列,采用不同方法构建的多斑按蚊复合体系统进化树结果基本一致,该基因序列适用于多斑按蚊复合体分析系统学分析。

云南省库态按蚊复合体的亲缘种型研究(双翅目,蚊科)(英文)

库态按蚊是1个由5种亲缘种型组成的按蚊复合体,这些种型分别被命名为A、B、C、D 和 E 型。在使用PCR 检测还没有条件的地区,鉴定库态按蚊亲缘种型的一个重要方法是作染色体组型分析。使用库态按蚊幼虫作染色体涂片,对云南地区的库态按蚊种型作了初步研究,并首次报道了该地区存在的亲缘种型成员,认为在云南省库态按蚊 A型和 B 型在同一个地区并存。同时,还展示了库态按蚊复合体的染色体组型、核型模式图及种型在中国毗邻国家的分布地图。

重组AcMNPV感染家蚕后造成宿主组织液化的机制分析

杆状病毒的组织蛋白酶(V-CATH)和几丁质酶(V-CHIA)是病毒感染宿主后造成宿主组织液化的关键酶。家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染家蚕后会导致宿主组织的液化,而苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)感染家蚕后不会造成宿主组织的液化。为了分析AcMNPV不造成家蚕宿主组织液化的原因,利用Bac-to-Bac系统将BmNPV的v-cath(Bmcath)、v-chiA(BmchiA)同时或分别重组到AcMNPV的极晚期强启动子p10和polh下游,并以同样的方法将AcMNPV的v-cath(Accath)、v-chiA(AcchiA)同时或分别重组到AcMNPV的p10和polh下游,从而构建6种重组AcMNPV。结果显示6种重组AcMNPV均能感染家蚕,并造成家蚕宿主组织的液化,说明重组AcMNPV中v-cath和v-chiA的过量表达在病毒对家蚕组织液化过程中发挥了重要作用。通过对感染6种重组AcMNPV之间的蚕体液化发生时间和液化率进行比较,发现相对于v-chiA,v-cath对组织液化的作用可能更加直接。检测比较感染AcMNPV和重组AcMNPV家蚕血淋巴中的组织蛋白酶和几丁质酶活性,两种酶的活性均随v-cath和v-chiA基因拷贝数的增加而增加。AcMNPV感染后不会造成家蚕宿主组织液化可能是由于病毒的组织蛋白酶活性太低,而不是由Bmcath和Accath、BmchiA和AcchiA之间的序列差异造成的。