蚊浓核病毒的研究进展

蚊浓核病毒是一类可以特异性感染蚊类的病原体,感染蚊类后可引起宿主特征性的细胞核致密增生病变,并可最终导致宿主发病或死亡。本文对近年蚊浓核病毒的生物学、分子生物学、病原学等研究进展作一综述,并对其发展为蚊类生物杀虫剂用于蚊媒防治进行展望。

蚊浓核病毒·Bti油悬剂与常用杀蚊幼剂对蚊幼防制效果比较

目的评价蚊浓核病毒·Bti油悬剂在实验室条件下对淡色库蚊幼虫和白纹伊蚊幼虫的防制效果,为蚊幼控制的药剂选择提供参考。方法采用幼虫浸渍法,将30只蚊幼分别置于含有不同杀蚊幼剂的搪瓷盆中,观察并记录幼虫的死亡时间、化蛹及羽化情况;利用SPSS 18.0软件计算半数致死时间(LT50)及95%可信区间(CI)、毒力回归方程,并进行统计学分析。结果蚊浓核病毒·Bti油悬剂、双硫磷和Bs对淡色库蚊低龄幼虫的LT50分别为85.7、73.2和109.8 min,对淡色库蚊高龄幼虫的LT50分别为82.8、71.6和128.2 min;蚊浓核病毒·Bti油悬剂、双硫磷、Bs对淡色库蚊低龄幼虫100%的死亡率所需的时间分别为260、160和200 min,对淡色库蚊高龄幼虫100%的死亡率所需的时间分别为240、140和300 min;Bti对淡色库蚊低龄幼虫和高龄幼虫的24 h死亡率均为0;新药1、新药2和新药3对白纹伊蚊高龄幼虫100%的死亡率所需时间分别为280、260和180 min,LT50分别为95.8、68.8和54.3 min;双硫磷和Bti对白纹伊蚊幼虫24 h死亡率均为100%,LT50分别为222.0和272.5 min。结论蚊浓核病毒·Bti油悬剂在实验室条件下对淡色库蚊和白纹伊蚊幼虫均具有较好的控制效果,且与常用的3种杀蚊幼剂相比防治效果各有优势,可用于蚊幼的防治。

蚊浓核病毒介导的人工内含子在蚊体内外的初步应用

根据人β-球蛋白基因第一内含子5′-端供位序列与免疫球蛋白重链可变区基因3′-端受位序列构建人工内含子,将人工内含子插入重组蚊浓核病毒质粒载体p7NS1-GFP中GFP融合表达的病毒非结构蛋白NS1的编码框内,构建成载体p7NS1-Intron-GFP,与辅助载体pUCA共转染蚊C6/36细胞系,荧光显微镜下观察细胞内GFP的表达情况。纯化、回收共转染后形成重组病毒与野生病毒,共感染白纹伊蚊二龄幼虫并观察幼虫体内GFP的表达情况。结果在C6/36细胞与蚊幼虫体内均观察到GFP的高效表达,证实人工内含子无论在蚊细胞系内还是在活体幼虫内均可正常行使其自我剪切的功能,未影响到下游蛋白GFP的表达。本研究为人工内含子在蚊虫细胞内的应用奠定基础,为蚊虫及其病原体相关基因工程技术提供新的策略。

共感染白纹伊蚊浓核病毒-3对登革2型病毒在蚊细胞内复制的影响研究

目的研究病毒共感染白纹伊蚊C6／36细胞后，白纹伊蚊浓核病毒-3（AalDV-3）对登革2型病毒（DENV-2）在细胞内的复制的影响。方法C6／36细胞感染AaIDV-3后5d，共感染DENV-2，设立单独感染AalDV-3与DENV-2为对照组。共感染后不同时间点，qPCR法检测病毒的拷贝数；共聚焦显微镜检测DENV-2感染率；共感染后37℃孵育24h后，于1～2d以流式细胞术检测细胞凋亡率。结果共感染后不同时间点，共感染组相对于DENV-2单独感染组，DENV-2基因拷贝数均明显下降（P〈0．05），其中第8d病毒滴度降低率达到最高的67％。共感染组DENV-2细胞阳性率均低于40％，明显低于DENV-2单独感染（〉70％，P〈0．05）。流式细胞术结果显示，共感染组1～2d细胞凋亡率分别为23．43±1．02％和52．83±1．18％，明显低于DENV-2单独感染组凋亡率59．43±1．23％和96．21±1．87％（P〈0．05）。结论病毒共感染白纹伊蚊C6／36细胞后，AalDV-3可降低对DENV．2拷贝数，降低DENV-2细胞感染率，减少DENV-2诱导的细胞凋亡，AalDV-3具有防制蚊媒传染病的潜在价值。