蚓激酶同工酶降解乙型肝炎抗原并保护肝功能

目的蚓激酶同工酶(LKIs)作为肠溶胶囊的有效成分,用于治疗血栓性疾病已有30多年历史。近年来,LKIs在其他危重疾病中的研究时有报道。本文关注LKIs在乙型肝炎方面的作用。方法乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)分别与不同浓度LKIs孵育,观察这些蛋白质的降解和估计肽链的切割位点。Hep G2.2.15细胞与LKIs孵育,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)和蛋白质印迹(Western blotting)检测细胞分泌的HBsAg和HbeAg。LKIs灌胃Balb/c小鼠30天,采用ELISA和Western blotting检测其血清HBsAg和HBeAg,免疫组化染色检测肝组织中的HBcAg。采用苏木精-伊红染色分析乙肝病毒转基因小鼠肝组织的损害,并通过ELISA定量分析血清谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)。腹腔注射后,取大鼠血清和肝组织,测定其中的LKIs含量,从而观察LKIs的吸收。采用LKIs给龙岩麻鸭灌胃30天,通过PCR检测其血清HBV DNA。结果蚓激酶肠溶胶囊的有效成分是含有6种LKIs的复方蛋白酶药物,可以降解HBV编码的蛋白质。LKIs降解HBsAg的位点为K141/P142及R160/F161;HBc Ag为R142/E143;HBeAg为R122/E123。LKIs可显著抑制Hep G2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg。LKIs灌胃,HBV转基因小鼠血清HBsAg和HBeAg水平及肝组织的HBcAg水平均降低,提示病毒的组装和释放可能受到了抑制。在LKIs处理的转基因小鼠中,血清GPT和GOT水平降低,肝组织溶解数量减少,表明LKIs对小鼠肝细胞具有保护作用。LKIs灌胃龙岩麻鸭,血清中DHBV DNA水平明显下降,停药后出现反弹。结论LKIs通过降解HBs、HBc和HBe蛋白,可能干扰HBV的装配和释放,减少病毒在肝细胞之间的传递,从而对肝细胞起到保护作用。