热水浴法解除蚕卵滞育的条件优化及应用效果分析

【目的】通过Box-Behnken响应面优化热水浴法解除蚕卵滞育的处理条件,并测试以不同来源水处理蚕种的孵化效果,为热水浴法在蚕业生产中的推广应用提供科学依据,探索出可替代传统盐酸孵化法且更安全环保、成本低廉的蚕种人工孵化方法。【方法】选用两广二号为供试蚕种,以卵龄(A)、处理时间(B)和处理温度(C)为变量,以蚕卵实用孵化率(Y)为响应值,通过Box-Behnken响应面优化热水浴法解除蚕卵滞育的处理条件;选择自来水、纯净水及矿泉水等不同来源的水,并选取萨尼斯、932、湘晖和春5等4个蚕种品种,分别采用优化后的条件对蚕卵进行热水浴处理,检验热水浴法解除蚕卵滞育的效果。【结果】蚕卵实用孵化率对3个变量因素的二项式拟合方程为:Y=91.03-2.01A-4.60B+22.89C+0.040AB+4.03AC+0.89BC-10.46A~2+3.25B~2-19.60C~2,响应面设计模型拟合程度较好。各因素对蚕卵实用孵化率的影响排序为处理温度(C)>处理时间(B)>卵龄(A),其中,处理温度影响极显著(P<0.01),处理时间影响显著(P<0.05,下同),卵龄影响不显著(P>0.05,下同);两因素间交互作用对蚕卵实用孵化率的影响排序为AC>BC>AB。修正后的热水浴法最佳处理条件:卵龄17.5 h,处理时间13 s,处理温度50℃,此条件下的实际蚕卵实用孵化率为97.94%,与理论预测值(98.81%)接近。不同来源水对两广二号正、反交种进行热水浴处理后的实用孵化率均在95.00%以上,仅阳山自来水和纯净水1在热水浴处理两广二号正交种时的实用孵化率显著低于盐酸即时浸酸法,但其实用孵化率仍高于93.00%;萨尼斯、932、湘晖、春5等4个家蚕品种的热水浴实用孵化率与盐酸即时浸酸法相比均无显著差异,表明热水浴法具有较强的普适性。【结论】热水浴法能有效解除蚕卵滞育,具有较强的普适性,且成本低廉、操作简单,可作为蚕业生产上替代传统盐酸孵化法的新方法。

电晕处理阻断滞育条件下蚕卵及卵壳观察

为探究电晕解除家蚕卵滞育的机理,比较了即时浸酸处理、电晕处理及对照处理蚕卵的催青期发育经过及卵壳表面变化。孵化率调查结果表明,电晕处理与即时浸酸处理的蚕卵孵化率没有显著差异。电晕处理与即时浸酸处理的蚕卵在发育过程中,蚕卵的形态及卵色均有差异,且电晕处理的蚕卵发育快于即时浸酸处理的蚕卵。扫描电镜观察发现,即时浸酸处理的蚕卵卵壳表面出现很多裂纹,而电晕处理及对照处理的卵壳表面没有观察到明显的刻蚀痕迹。电晕处理和即时浸酸处理的卵壳表面气孔均随着蚕卵的发育而增大。这些结果为研究浸酸和电晕解除蚕卵滞育的机理提供线索。

家蚕蚕卵孵化率影响因素的研究进展

昆虫是自然界最为丰富的生物类群,其中大多数为农林业害虫,但也有少数为人类服务的经济昆虫,如作为鳞翅目模式生物的家蚕,数千年来一直是丝织品原料的主要来源。孵化是卵生昆虫后续生命活动的基础,了解影响家蚕孵化的因素,有利于提高家蚕孵化率,增加蚕茧产量和经济效益。本文介绍了影响家蚕蚕卵孵化率的温度、湿度、光照等环境条件及家蚕发育过程中基因调控的研究进展。

中瑞微视6SXZ-68L蚕卵色选机原理与应用

中瑞微视6SXZ-68L色选机(以下简称色选机),依据不良卵与良卵颜色差异的特征,把经过分选箱内观察区的蚕卵,使用高清镜头扫描利用高速图像处理系统,产生输出信号,驱动电磁阀工作,通过自喷式吹嘴把异色卵吹至次品腔内,未吹到的蚕卵则继续下滑至接料斗良品腔内,把不良卵从蚕种中分选出来,准确率可达到95%以上,操作简便,效果良好。

雌雄蚕卵光电自动分选仪器的基本结构设计与工作原理分析

依据雄蚕品种和限性卵色蚕品种不同性别的卵色差别,实现雌雄蚕卵全部存活的前提下自动、快速、准确分离。应用光电识别等原理设计的雌雄蚕卵分选仪器通过单通道光电计数控量供卵、多通道分流和转盘斜刮排序等技术,使蚕卵整齐有适当间距地排列成辐射状的48路,形成同时运行的48个单元,经可编程颜色传感器检测识别后,通过电磁分离器分选,将雌雄蚕卵分离。该雌雄蚕卵自动分选仪器的基本结构设计与工作原理可实现预期目标:不损伤雌蚕卵,使雌雄蚕卵都能存活;分选效率高,设计分卵速度达12万粒/h,准确率超过95%。

天蚕卵面浴消标准初探

通过漂白粉、盐酸、甲醛等不同的药物以及同一药物不同的浓度、不同的浸药时间和脱药时间等进行天蚕卵面浴消，调查孵化率及１～５龄蚕的发病率。发现药物之间差异并不显著。但同一药物，不同浓度或不同的浸药时间有明显的差异。用０．４％有效氯漂白粉液浸５ｍｉｎ，不仅孵化率高，而且发病率低。１．５％有效氯漂白粉液浸５ｍｉｎ或者用０．４％有效氯漂白粉液浸１０ｍｉｎ以上，对孵化率有严重影响，且不同地区的天蚕卵差异很大，如用０．２％以下的氯漂白粉液浸药时间少于３ｍｉｎ，消毒不彻底。

利用精子介导法向蚕卵导入外源基因的研究

为建立家蚕转基因中切实可行、操作简便的外源基因导入方法 ,进行了精子介导法探索 ,以精子介导法的三种方式向家蚕导入所构建质粒 pFbGFP ,并通过PCR扩增和DNA印迹等手段 ,已连续两代从基因组DNA检测到导入外源基因GFP的存在 ,其中的一种导入方式到第二代阳性率约 30 % .结果表明该法可有效进行家蚕转基因的外源基因导入 .

盐酸刺激量对家蚕卵酯酶A4活性的影响及其与蚕卵活化的关系

将产卵后 2 4～ 96h( 2 5℃ )的蚕卵 ,用相同或最佳盐酸刺激量 (浸酸后点青最快、点青卵率最高 )浸酸处理 ,卵龄越大 ,蚕卵点青越迟。蚕卵的点青时间在一定范围内随盐酸刺激量增大而提前 ,超过这一范围 ,则随刺激量增大而延迟。卵龄增大 ,蚕卵酯酶A4和ATPase特征性活性峰出现时间延迟 ;蚕卵经盐酸处理 ,该时间明显提前。产卵后 96h盐酸处理蚕卵 ,酯酶A4的活性峰出现时间随盐酸刺激量增大而提前。随着浸酸卵龄和盐酸刺激量的改变 ,蚕卵酯酶A4的活性峰出现时间与蚕卵点青时间发生一致的变化。盐酸刺激量能够影响蚕卵的活化 (或滞育发育期 )和发育速度。

家蚕卵黄原蛋白及其受体基因

家蚕小卵突变体 (Smalleggmutant ,sm) ,其卵体积仅及正常卵的 2 / 3,不能受精而致死。因其卵母细胞不能正常吸收卵黄原蛋白 (Vg) ,人们认为其原因可能是卵黄原蛋白受体基因 (VgR)突变所致。本研究首先通过克隆筛选和基因组序列分析 ,获得了 2 5 6 4bp含有 ployA的家蚕卵黄原蛋白受体基因 (BmVgR)片段。将该基因片段的预测蛋白与其它物种的VgR/YPR和低密度脂蛋白受体 (LDLR)家族比较 ,发现该基因具有LDLR家族的基本结构特征。其次 ,经RT PCR检测 ,结果表明BmVgR在sm的不同时期的卵母细胞中都能正常转录。最后 ,分别对sm不同发育时期的体液和卵的总蛋白进行SDS PAGE分析 ,发现该突变体的卵母细胞不能正常摄取体液蛋白 (包括Vg)。综合分析 ,sm不能正常摄取Vg ,可能并不是VgR的功能异常导致 。

家蚕卵线粒体DNA限制性内切酶长度多态性研究

利用 2 9种限制性内切酶对 34个不同品种家蚕卵mtDNA进行酶切分析 ,发现一化、二化品种与多化品种的HaeⅢ酶切图谱有差异 ,但不同的地理品种间没有出现酶切多态性现象。另外 ,一些家蚕品种的受精卵和非受精卵mtDNA在BglⅠ和PstⅠ酶切下 ,呈现不同的酶切带型。同时 。

^(12)C^(6+)离子辐射对细胞存活增殖及模拟失重和辐射对家蚕卵发育的影响

目的:观察重离子辐射后人骨肉瘤细胞MG-63、人胚胎皮肤成纤维细胞ESF-1和人胚胎肝正常细胞HEL-1的生存和增殖情况,及重离子辐射和模拟失重环境处理后家蚕卵的孵化和发育情况,初步探讨重离子辐射对细胞及复合环境对家蚕卵的一些生物学效应.方法:利用超导磁体模拟失重环境,利用重离子加速器产生12C6+离子,用不同剂量辐射细胞和家蚕卵,检测在重离子辐射后细胞的存活和克隆形成能力及复合条件下家蚕卵的发育情况.结果:HEL-1细胞在0.1Gy时存活率已经开始降低,且随辐射剂量的增大这种影响也增加,到1.5Gy时存活率降低50%.ESF-1细胞在1.5Gy时存活率下降约20%,但辐射对骨肉瘤MG-63细胞的存活率影响不大.HEL-1和ESF-1细胞受到0.1Gy的辐射后克隆形成能力就明显降低90.2%和79.1%,而MG-63细胞一直保持较高的克隆形成率,直到1.5Gy时迅速降低75%.家蚕的出蚁率随辐射剂量的增大而降低,到30Gy时出蚁率降到2.22%.当辐射剂量为0～10Gy时,家蚕卵在两种不同重力条件下的孵化率没有明显差异.但当辐射剂量增加到15,20和30Gy时,失重环境明显促进了家蚕卵的孵化.另外,失重环境下家蚕卵的孵化时间比正常条件下缩短约3d左右.同时,高剂量的辐射处理会延迟家蚕幼虫的生长.结论:重离子辐射降低了细胞的存活和增殖能力,同时影响了家蚕从受精卵到幼虫的发育,降低了出蚁率.失重环境可以缩短家蚕卵的孵化时间.

蚕卵高温即时浸酸阻断家蚕微粒子病胚种垂直传播的效果

由家蚕微孢子虫（Nosema bombycis,Nb）感染引发的家蚕微粒子病可以通过胚种垂直传播,如能在蚕种人工孵化处理过程中杀灭家蚕微孢子虫,阻断其胚种传播,将有效控制病害对养蚕业尤其是蚕种制造业造成的危害。对家蚕二化性四元杂交组合两广二号的带毒卵进行高温即时浸酸处理,考察浸酸温度和浸酸时间对蚕卵中Nb的灭活作用及实用孵化率的影响。结果表明：产卵后20 h的带毒蚕卵用47.5℃或48℃质量浓度为1.075 g/m L的盐酸溶液分别浸渍6.0、6.5和7.0 min,对蚕卵实用孵化率无明显影响;依据蚕卵孵化后饲养至3龄眠蚕用显微镜镜检Nb的数据,测算高温即时浸酸处理对家蚕微粒子病的相对防治效果可达90%~97%。此外,采用Real-time PCR扩增方法,检测高温即时浸酸处理组蚕卵孵化蚁蚕样本中的Nb孢子目标基因的相对拷贝数,较常规浸酸处理组蚕卵孵化蚁蚕样本下降了97%~99%。上述结果表明高温即时浸酸处理对蚕卵中的Nb孢子有显著的杀灭作用,能有效阻断家蚕微粒子病的胚种垂直传播,可作为防治家蚕微粒子病的一种重要措施。

家蚕多化性品种蚕卵冷藏省力继代法

多化性品种的保种问题,清水文信和中水流操已提供了一整套方案。但若按照清水文信的单式冷藏效果不太好,若按复式冷藏法其孵化率良好,不过入库胚子和中间处理时的胚子掌握是比较繁琐的。山下兴亚只从孵化率角度上认为冷藏多化性蚕种应以10℃较好。为了验证山下兴亚的论点,使之趋臻完善。1988—1989年对我所保存的七个多化性品种进行冷藏试验,现简报如下。

合成滞育激素对家蚕卵碳水化合物代谢的影响

为了进一步阐明家蚕滞育激素在诱导滞育卵发生以及对蚕卵滞育过程中碳水化合物代谢的调节作用 ,对低温 (16℃ )暗催青的二化性品种大造 ,在化蛹初期注射合成滞育激素 ,诱导其产下滞育卵 ,然后将这种滞育卵分别用 2 5℃和 5℃保护 ,调查其在滞育过程中糖元、海藻糖、山梨醇和甘油量的变化。结果发现 ,从化蛹第 3天开始 ,每天注射 15 0pmol/头合成滞育激素 ,连续 3次 ,可得到 70 %左右的滞育卵。这种滞育卵在产卵初期糖元的含量与自然滞育卵相似 ,但山梨醇的含量仅有自然滞育卵的 5 0 %左右。诱导滞育卵在 5℃中保护时 ,解除滞育的时间比自然滞育卵提前 ,孵化率比自然滞育卵低 2 0 %左右。未孵化卵大多在转青期死亡。由上述结果推测 ,这种诱导滞育卵在产卵初期糖元与山梨醇的代谢间存在某种障碍 ,从而影响山梨醇的合成 ,导致滞育的提前解除和胚胎发育异常。

雌雄蚕卵激光自动分选仪的工作原理和基本结构与设计思路

为促进雄蚕品种的选育与繁育推广,研制成功了雌雄蚕卵激光自动分选仪。该仪器可依据雄蚕品种雌雄蚕卵具有不同卵色的特点,通过图像采集和计算机图像处理及识别,指令激光器精确地射杀雌卵,从而只保留雄卵,为雄蚕品种的选育和繁育推广提供了快速精确的分卵设备与方法,解决了人工分选雌雄蚕卵效率低的难题。重点阐述了该仪器的工作原理和蚕卵图像的计算机处理软件等部分的设计思路,介绍了仪器的基本结构与基本配置及主要工作流程,以及分选平附种和散制种蚕卵的方法与主要的技术参数。

催青过程中温、湿度对蚕卵孵化率的影响

为了提高蚕卵的孵化率。将蚕卵放置在不同温度、湿度的环境中进行催青,通过对比研究温、湿度对蚕卵孵化率的影响。室温催青经过10 d完成,孵化率90.0%以上,温度大于30.0℃的催青时间是8 d,孵化率只有60.0%-70.0%。在其他催青标准相同条件下,空气湿度在70.0%-80.0%的孵化率比湿度在90.0%以上的要高。室温19.9-24.5℃,1日孵化率高,催青效果好;在相同温度下,湿度在70.0%-80.0%1日孵化率较高。蚕卵催青过程中温度设置在19.9-24.5℃,湿度保持在70.0%-80.0%,蚕卵孵化率最高,达98.3%。

单粒蚕卵DNA的制备方法

文章对含量甚微的单粒蚕卵ＤＮＡ的抽提方法进行了探讨。结果表明，将蚕卵出库催青，在收蚁前１天用针刺破，再用改进的酚抽提法抽提制备。此法简单实用，从１粒蚕卵中获得了平均４００ｎｇ的总ＤＮＡ，其分子量大，断裂少，纯度高，完全能满足酶切、连接和ＰＣＲ扩增的需要。

蚕卵抗菌物质的诱导及其蚁蚕的动物试验

不同强度的超声波和热冲击处理越年蚕卵后，将孵化的蚁蚕匀浆、离心，取上清液，抑菌试验表明，当超声波强度在０．３Ａ以上，处理时间为５ｍｉｎ时，能有效诱导抗菌物质的产生；４５℃热冲击则无明显效果．将超声波诱导后的蚁蚕进行冷冻干燥和粉碎处理，经动物急性毒性试验，表明对人安全；对动物的应激能力（耐缺氧、耐高温以及游泳时间）试验表明，经超声波处理的蚁蚕能显著提高动物的应激能力（ｐ＜０．０５）．同时蚕卵孵化率在９５％以上，说明各处理强度对蚕卵均属安全范围，其蚁蚕可以继续饲养．

蚕卵粉对糖尿病小鼠超氧化物歧化酶和其mRNA表达的影响

本实验通过小鼠模型,研究了蚕卵粉对诱导型糖尿病小鼠的血糖、SOD酶和SOD基因mRNA表达的影响。结果显示,喂食含5%蚕卵粉饲料的糖尿病小鼠的血糖显著降低,蚕卵粉对正常小鼠的血糖值没有影响。蚕卵粉对由于高血糖引起的超氧化物歧化酶(SOD)活性降低具有明显保护作用,可以有效地增强糖尿病小鼠的SOD酶活性。RT-PCR和Northern Blotting结果显示,蚕卵粉可以加强糖尿病小鼠地超氧化物歧化酶基因(SOD)的mRNA的表达水平。上述结果进一步研究蚕卵粉的生理功能及其利用提供理论依据。