蚤休醇提物对H2O2损伤的ECV304细胞的细胞周期与凋亡的影响

目的制备中药蚤休醇提物,研究其对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)损伤的保护作用及其机制。方法体外培养ECV304细胞,建立氧化损伤的细胞模型,然后分为五个实验处理组:①正常对照组;②氧化损伤组;③高浓度蚤休醇提物(EFB500ng.L-1)组;④中浓度蚤休醇提物(50ng.L-1)组,⑤低浓度(5ng.L-1)组。应用流式细胞仪AnnexinV/PI染色检测该药物干预H2O2氧化损伤前后的细胞凋亡、PI染色检测细胞周期与凋亡的关系;RT-PCR检测各实验组caspase-3mRNA表达的变化。结果采用流式细胞仪PI染色检测结果对细胞周期进行分析,表明损伤作用于ECV-304细胞后,细胞在G0/G1期的数目增多,在S期的数目减少,同时流式细胞仪检测可见亚二倍体峰,而蚤休醇提物预处理以后,S期细胞数明显增多。流式细胞仪AnnexinV/PI检测方法显示,损伤组的早期与晚期凋亡率之和最高,预处理后细胞的早期与晚期凋亡率之和降低。caspase-3mRNA水平在各实验组的表达显示损伤组与内参照相比的灰度值最大,经过预处理之后其值明显下降(P<0.01)。结论蚤休醇提物可以保护H2O2造成的ECV304细胞的氧化损伤,是通过保护细胞周期正常进行、抑制凋亡蛋白caspase-3介导的凋亡信号转导通路实现的。

蚤休薯蓣皂苷对内皮细胞的保护作用涉及TLR4/NF-κB途径

目的观察蚤休薯蓣皂苷(Rhizome Dioscin,RD)对氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)损伤对细胞生长、炎症反应Toll样受体4(TLR4)和细胞核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达的影响,探讨RD抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法体外培养HUVEC,RD 3个浓度预处理,加入ox-LDL,运用流式细胞术PI染色检测细胞周期,激光共聚焦显微镜JC-1染色检测线粒体电位(ΔΨm),Western blot检测TLR4和NF-κB蛋白的表达。结果与正常对照组相比,经ox-LDL损伤后HU-VEC细胞周期阻滞在G0/G1期,表现为G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.01),S期细胞比例明显下降(P<0.01);细胞ΔΨm明显下降;TLR4和NF-κB的表达与正常组比较均升高。RD预处理能抑制ox-LDL诱导的细胞生长停滞,使细胞周期S期细胞比例增加(P<0.01),ΔΨm上升,TLR4和NF-κB的表达与损伤组相比均下降。结论抑制TLR4/NF-κB信号转导途径可能是RD抗内皮细胞氧化损伤、阻止经线粒体途径的细胞生长停滞的可能机制之一。

蚤休薯蓣皂苷经Notch1/NF-κB p65信号转导途径抑制巨噬细胞损伤

目的研究蚤休薯蓣皂苷(rhizome dioscin,RD)对氧化损伤的小鼠巨噬细胞(Ana-1)炎症反应的影响及与Notch1/NF-κB p65信号转导途径的关系,探讨RD抗炎性效应的分子机制。方法体外培养Ana-1,RD 3个浓度预处理,加入氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导氧化损伤,MTT比色法检测细胞存活率,ELISA测定培养液中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、流式细胞术Annexin V/PI双染色以及激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡率及凋亡的细胞形态变化,Western blot检测Notch1、NF-κB p65的表达。结果与正常对照组相比,经ox-LDL损伤后,细胞存活率降低(P<0.05、P<0.01)、而IL-6和TNF-α的释放量增加(P<0.05、P<0.01)、凋亡细胞数目增多并呈现典型的凋亡形态学改变、Notch1和NF-κB p65的表达与正常组比较均升高。而RD各剂量组预处理能提高细胞存活率(P<0.05、P<0.01)、降低细胞上清液IL-6和TNF-α含量(P<0.05、P<0.01)、降低细胞凋亡率、改善细胞的凋亡形态以及Notch1和NF-κB p65的表达。结论 RD可抑制ox-LDL炎性损伤和凋亡,提高细胞存活率,其作用机制可能是通过激活Notch1NF-κB p65途径而实现的。

蚤休皂苷对过氧化损伤致ECV304细胞凋亡机制的研究

目的研究蚤休皂苷对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)损伤的保护作用及其机制。方法体外培养ECV304细胞,建立氧化损伤的细胞模型,然后分为5个组:正常对照组,氧化损伤组,蚤休皂苷高浓度(1000pg/ml)组、中浓度(100pg/ml)组、低浓度(10pg/ml)组;应用流式细胞仪Annexin V/PI染色检测药物干预H2O2氧化损伤前后的细胞凋亡情况,应用激光共聚焦显微镜观察其凋亡的形态学变化。并利用激光共聚焦显微镜观察、图像分析仪分析各组细胞中游离Ca2+的表达;结果流式细胞仪Annexin V/PI检测方法显示,损伤组的早期与晚期凋亡率之和最高,预处理后细胞的早期与晚期凋亡率之和降低。在损伤组细胞核着红色,细胞膜绿色或者细胞核将游移出细胞,而蚤休皂苷药物浓度增加,表现为红色细胞核的细胞量即晚期凋亡量逐渐减少。损伤组细胞内游离Ca2+浓度明显高于正常组(P<0.01),而各蚤休皂苷预处理组均使Ca2+荧光强度下降,显著低于损伤组(P<0.01),并呈剂量依赖性效应。结论蚤休皂苷可以保护ECV304细胞因H2O2造成的氧化损伤,并与抑制钙离子介导的凋亡通路有关,达到保护内皮细胞、抗动脉粥样硬化的目的。

蚤休脂溶性化学成分的研究

目的 研究蚤休脂溶性化学成分。方法 应用乙醚超声提取 ,提出脂溶性成分 ,运用 GC- MS技术 ,结合计算机检索鉴定化学成分 ,并计算出各组分的相对含量。结果 共鉴定出 34个成分。结论 棕榈酸和硬脂酸分别占脂溶性化学成分的 5 1.5 5 %和 34.31%。

蚤休复方水煎剂抗癌作用及对肝肾毒副作用的研究

目的:考察治疗量的蚤休复方水煎剂的抗癌作用及其对重要器官的毒副作用。方法:将S180模型小鼠,随机分为模型对照组、环磷酰胺阳性对照组、以及蚤休复方水煎剂高、低剂量组。给药10 d后摘取模型小鼠的肿瘤组织及肝、肾作病理检测并计算抑制率。结果:蚤休复方高、低剂量组小鼠肿瘤均重与模型对照组有显著差异,且量效关系明显。病理切片显示:高剂量组与阳性对照组小鼠癌组织出现重度坏死,低剂量组癌组织出现中度坏死,模型对照组癌组织无坏死;且高、低剂量组与模型对照组小鼠肝、肾组织病理检测均正常,阳性对照组小鼠肝、肾组织有轻度损伤。结论:蚤休复方有较好的抗癌作用,且对模型小鼠肝、肾无明显毒副作用。

蚤休皂苷对氧化损伤的脐静脉内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达的影响

目的研究中药蚤休皂苷对H2O2诱导脐静脉内皮细胞(HUVEC)ECV304损伤的保护作用及其机制。方法体外培养ECV304,建立氧化损伤的细胞模型,然后分为正常对照组、氧化损伤组以及高、中、低浓度蚤休皂苷预处理组;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测蚤休皂苷对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的影响;RT-PCR检测细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)mRNA表达的水平;流式细胞术定量检测各实验组黏附分子ICAM-1、VCAM-1的表达。结果氧化损伤后细胞吸光度(OD)值低于正常对照组(P<0.01);药物预处理后OD值增加,高浓度蚤休皂苷组的OD值与正常组相比差异无显著性(P>0.05);药物预处理氧化损伤后,ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达水平与损伤组相比明显减弱(P<0.01);损伤组中与内参照的灰度值之比最大,与正常组相比差异有显著性(P<0.01);流式细胞仪定量检测ICAM-1、VCAM-1的结果显示,损伤组中表达ICAM-1、VCAM-1的阳性细胞数均最多,与正常组相比差异有显著性(P<0.01);药物预处理氧化损伤后,阳性细胞数明显减少,且此效应呈剂量依赖性(P<0.01)。结论蚤休皂苷可以保护H2O2造成的HUVEC的氧化损伤,是通过抑制内皮细胞黏附分子的表达从而抑制炎症性损伤,达到保护内皮细胞、抗动脉粥样硬化的目的。

蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素及内皮型一氧化氮合酶表达的对比研究

目的:探讨蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素和内皮型一氧化氮合酶表达的影响,并比较两种制剂的药效差别。方法:提取蚤休总皂甙与半边莲生物碱,观察两种制剂对高脂血症大鼠主动脉内皮细胞内皮素(ET)合成、血浆ET浓度和血浆内皮型一氧化氮合酶(ecNOS)浓度的影响。结果:高脂喂养大鼠动脉内皮细胞ET-1的合成与释放明显增高,而ecNOS明显降低;应用蚤休总皂甙60d后,动脉内皮细胞ET的合成与释放显著低于高脂对照组(P<0.05),但血浆ecNOS含量无明显变化;应用半边莲生物碱60d后,动脉内皮细胞ET的合成、释放减少(P<0.05)的同时,血浆ecNOS含量较高脂对照组显著升高。结论:蚤休总皂甙与半边莲生物碱均能抑制ET的合成和释放,半边莲生物碱同时还能够促进ecNOS合成和释放,其药效优于蚤休总皂甙。

蚤休皂苷对氧化损伤脐静脉内皮细胞内钙离子变化的影响

目的利用激光共聚焦显微镜研究蚤休皂苷(Pa)对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)损伤的钙离子(Ca2+)的变化及其机制。方法体外培养ECV304细胞,建立氧化损伤的细胞模型,然后分为5个实验处理组:①正常对照组;②氧化损伤组;③高浓度蚤休皂苷(1μg/ml)组;④中浓度蚤休皂苷(100 pg/ml)组;⑤低浓度蚤休皂苷(10 pg/ml)组;应用激光共聚焦显微镜观察其细胞凋亡的形态学差异。并利用激光共聚焦显微镜观察、图像分析仪分析各实验分组细胞中游离Ca2+的表达、激光共聚焦显微镜描记预处理前后Ca2+的动态表达。结果损伤组细胞内游离Ca2+浓度明显高于正常组(P<0.01),而各蚤休皂苷预处理组均使Ca2+荧光强度下降,显著低于损伤组(P<0.01),并呈剂量依赖性效应。H2O2损伤剂量的刺激下,ECV304胞浆内的游离Ca2+呈现双相变化:由静息状态持续增加到峰值,ΔF为37.22±3.72,平台期与静息状态荧光值的变化ΔP为7.65±0.69,加入蚤休皂苷预处理10 min后,再加入100μmol/L的H2O2,ΔF和ΔP均明显下降(P<0.01)。结论蚤休皂苷可以保护H2O2造成的ECV304细胞的氧化损伤,与抑制了钙离子介导的凋亡通路有关,达到保护内皮细胞、抗动脉粥样硬化的目的。

蚤休合剂镇痛抗炎活血作用实验研究

目的揭示蚤休合剂具有镇痛抗炎活血的药理作用。方法采用热板法及醋酸扭体法研究其镇痛作用;采用小鼠耳肿胀及小鼠足跖肿胀法研究其抗炎作用;采用凝血时间测定法及血肿吸收法测定血肿吸收程度来研究其活血作用。结果蚤休合剂在热板法实验中能显著提高小鼠的痛阈值;在醋酸扭体法实验中能有效减少扭体次数;在耳肿胀实验中能明显减轻鼠耳肿胀度;在足肿胀实验中对鼠足肿胀有良好的抑制作用;在凝血时间测定实验中,可以显著延长凝血时间;在血肿吸收实验中证明其良好的吸收血肿作用。结论蚤休合剂具有较好的抗炎、镇痛、活血作用。

蚤休薯蓣皂苷联合顺铂抑制小鼠移植瘤生长及转移

目的探讨蚤休薯蓣皂苷(RD)联合顺铂对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤生长与转移的抑制作用。方法 40只C57BL小鼠皮下接种Lewis肺癌细胞建立肺腺癌移植瘤模型,随机均分成对照组、RD组、顺铂组及RD联合顺铂组,从接种后第4天开始给予生理盐水或相应药物干预,于接种后第29天处死,通过免疫组化检测皮下移植瘤组织CD34表达,荧光实时定量PCR检测皮下移植瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达,Western blotting测定皮下移植瘤组织VEGF、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 RD联合顺铂组抑瘤率、肺表面结节转移抑制率高于RD组与顺铂组(P<0.01),Q值为1.01;RD联合顺铂组上述指标改善程度优于单独用药组(P<0.01),但RD组与顺铂组相比,差异无显著性(P>0.05)。结论 RD联合顺铂对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤生长与转移有相加抑制作用,其机制可能与拮抗肿瘤血管生成和诱导肿瘤细胞凋亡有关。

中药蚤休治疗衣原体女性生殖道感染的研究

沙眼衣原体引起的女性生殖道感染已成为性传播性疾病中最常见的一种,国内发病率10％—42％;国外(美国)8％—40％。目前,国内外对此病的治疗,均以抗生素四环素族为主,其治疗有效率为45％—60％; 为弘扬祖国医学,开辟中药治疗衣原体女性生殖道感染的新途径,经筛选,采用单味中药蚤休粉宫颈上药治疗,进行200例实例观察,同时设178例四环素治疗对照组比较。 本研究结果:蚤休治疗衣原体女性生殖道感染总有效率达100％,其治愈率81.50％;对照组总有效率85.95％,治愈率53.93％(p<0.001)。证明中药蚤休对衣原体女性生殖道感染有良好的治疗效果。 本研究还对衣原体女性生殖道感染的症状、体征,尤其是对宫颈的损害程度,经蚤休治疗前后对比统计,并与对照组进行比较。结果亦表明经蚤休粉治疗后症状消失、宫颈糜烂愈合或好转均比四环素治疗组佳(p<0.001)。 有天两组治疗的副作用,亦作为本研究重要资料。其结果表明,蚤休局部上药,在首次上药时7例(占3.50％)有轻度的热灼感,数小时内消失,且再无复现,表明蚤休治疗并无不良副作用。 本研究还自行设计了宫颈管上药器,以提高蚤休的治疗效果,并对蚤休的药性、动物实验进行了辅助研究,取得有效资料。并率先用于临床,其治疗方法简单,无副作用,疗效确切,有实用价值。

蚤休皂苷对氧化损伤的脐静脉内皮细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1表达的影响

目的研究中药蚤休皂苷对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞ECV304损伤的保护作用及其机制。方法体外培养ECV304,建立氧化损伤细胞模型,然后分为五个实验处理组:正常对照组、氧化损伤组、高浓度蚤休皂苷组、中浓度蚤休皂苷组和低浓度蚤休皂苷组,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测蚤休皂苷对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的影响,逆转录聚合酶链反应检测细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1mRNA的表达水平,流式细胞术定量检测细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1的表达。结果损伤后细胞吸光度值低于正常对照组(P<0.01),药物预处理后吸光度值增加,高浓度蚤休皂苷组吸光度值与正常组相比差异无显著性;药物预处理氧化损伤后,细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1mRNA的表达水平与损伤组相比明显减弱(P<0.01);损伤组中与内参照的灰度值之比最大,与正常组相比差异显著(P<0.01);损伤组中表达细胞间细胞粘附分子1和血管细胞粘附分子1的阳性细胞数增多,与正常组相比差异显著(P<0.01);药物预处理氧化损伤后,阳性细胞数明显减少,且此效应呈剂量依赖性(P<0.01)。结论蚤休皂苷可以保护H2O2造成的人脐静脉内皮细胞的氧化损伤,是通过抑制内皮细胞粘附分子的表达从而抑制炎症性损伤,达到保护内皮细胞、抗动脉粥样硬化的目的。

蚤休提取物对实验性脑出血大鼠脑损伤的保护作用研究

目的探讨蚤休提取物对实验性脑出血大鼠脑损伤的保护作用及机制。方法 100只健康SD大鼠依据随机数字表法随机分为5组,假手术组、模型组和蚤休提取物低、中、高剂量组(浓度分别为25、50、100 mg/kg),每组各20只。注射Ⅶ型胶原酶建立大鼠脑出血模型,蚤休提取物组给于相应浓度灌胃,模型组和假手术组给于生理盐水。分别于灌胃后第3、5、7天对各组大鼠进行神经功能缺损评分,并每组取6只大鼠进行脑组织含水量、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)含量和血浆中TNF-α含量检测。结果与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P<0.01);与模型组相比,蚤休提取物低、中、高剂量组均能显著降低大鼠神经功能缺损评分(P<0.05,P<0.01)。与假手术组相比,模型组大鼠脑组织SOD活性显著降低(P<0.01);与模型组相比,蚤休提取物中、高剂量组均能显著降低大鼠神经功能缺损评分(P<0.05)。与假手术组相比,模型组大鼠各时间点血浆中TNF-α含量显著升高(P<0.01);与模型组相比,蚤休提取物中、高剂量组均能显著降低大鼠血浆中TNF-α含量(P<0.05,P<0.01)。结论蚤休提取物能够降低Ⅶ型胶原酶诱导的脑出血大鼠的神经功能缺损评分,改善脑组织水肿症状,通过提高脑组织血浆SOD水平,抑制脂质体氧化,减少TNF-α的产生,对脑出血大鼠受损的脑组织具有保护作用。

蚤休水提液对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化晚期斑块的影响

目的研究蚤休水提液对载脂蛋白E基因敲除小鼠(ApoE-/-)晚期斑块的影响。方法将30周龄的ApoE基因敲除小鼠分为三组,两实验组分别在小鼠正常饲料中添加蚤休水提液和药物辛伐他汀粉末,空白对照组喂饲小鼠正常饲料。结果蚤休水提液能显著降低小鼠血清的总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,同时减少无名动脉处的斑块面积,降低斑块中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的含量。结论蚤休水提液能抑制小鼠动脉粥样硬化晚期斑块的进一步的发展。

HPLC法同时测定复方蚤休烧伤油膏中3种皂苷

目的建立HPLC法同时测定复方蚤休烧伤油膏中3种皂苷的含有量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Wondail TM-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;检测波长203 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb_1、重楼皂苷Ⅵ分别在0.040 6~0.812 0、0.040 4~0.808 0、0.040 9~0.818 0 mg/m L范围内线性关系良好(r>0.999 0),平均加样回收率分别为98.0%、97.96%、98.35%,RSD分别为1.05%、0.78%、1.22%。结论该方法准确简便,可用于复方蚤休烧伤油膏的质量控制。

蚤休水提液抗内皮细胞损伤条件培养基诱导脐动脉平滑肌细胞增殖作用的研究

目的观察蚤休对氧化型低密度脂蛋白致内皮细胞损伤后,其培养基损伤诱导人脐动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法①分离制备氧化型低密度脂蛋白。②培养人脐静脉内皮细胞与动脉平滑肌细胞。③制备蚤休(Parispolyphyllavar.yunnanensis)水提液(本实验室提取)。④应用氧化型低密度脂蛋白刺激内皮细胞损伤建立致平滑肌细胞增殖条件培养基,实验分为5组,空白对照组,条件培养基组,条件培养基+10μmol/L蚤休组,条件培养基+30μmol/L蚤休组;条件培养基+100μmol/L蚤休组。经不同浓度蚤休处理后,采用细胞计数以及氚-胸腺嘧啶核苷掺入法检测药物效应。结果①条件培养基组与对照组相比,人脐动脉平滑肌细胞数目增加,氚-胸腺嘧啶核苷掺入率增加。②条件培养基与不同浓度的蚤休同时处理组与条件培养基组相比,细胞数目减少,氚-胸腺嘧啶核苷掺入率也降低,DNA合成下降(r=0.9423,P<0.05)。③随蚤休浓度增加对脐动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用递增。结论①致内皮细胞损伤后培养基可有促平滑肌细胞增殖作用,蚤休表现为剂量依赖性地抑制平滑肌细胞计数及氚-胸腺嘧啶核苷掺入量。②可初步认为蚤休降血压作用可能与其抑制人脐动脉平滑肌细胞增殖有关。

参苓蚤休汤结合穴位埋线治疗慢性萎缩性胃炎疗效观察

目的:观察参苓蚤休汤结合穴位埋线治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效。方法:将84例慢性萎缩性胃炎患者随机分为两组。对照组42例口服维酶素胶囊、猴头菌片、黄连素片,治疗组42例采用参苓蚤休汤结合穴位埋线治疗。均3个月为1疗程,连续治疗2疗程。结果:治疗组临床痊愈18例,显效14例,有效8例,无效2例,总有效率95.24%;对照组临床痊愈10例,显效12例,有效15例,无效5例,总有效率88.10%,治疗组疗效明显优于对照组(P<0.05)。HP阴转率分别为91.4%、54.5%,两组差异有显著性(P<0.01)。结论:参苓蚤休汤结合穴位埋线治疗慢性萎缩性胃炎疗效满意。其作用机制可能与根除HP感染,通过整体的调节促进炎症消除和胃液分泌,改善胃黏膜血液循环,从而加速胃黏膜上皮组织再生有关。