基于PI3K/Akt通路研究蛇伤胶囊调节血小板活化功能治疗竹叶青蛇伤凝血障碍机制

目的基于PI3K/Akt通路研究蛇伤胶囊调节血小板活化功能治疗竹叶青蛇伤凝血障碍机制。方法24只新西兰大白兔被随机分为正常对照组、模型组、蛇伤胶囊组,每组8只雌雄各半,根据前期研究方法模型组和蛇伤胶囊组以兔耳缘静脉注射0.75 mg/kg竹叶青蛇毒液,建立竹叶青蛇伤兔模型,正常对照组注射等量生理盐水。注射后6 h后予正常对照组和模型组以10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃,蛇伤胶囊组予10 ml/(kg·d)蛇伤胶囊所配药液灌胃。以上3组连续灌胃1周后兔耳缘静脉采血5 ml,血小板分离提取后Western blot检测各组血小板细胞PTEN、PI3K、Akt蛋白表达,qPCR检测各组血小板活化指标CD62P mRNA表达。结果与正常对照组相比,模型组血小板细胞PTEN蛋白表达增加(P<0.01),PI3K、Akt蛋白及CD62P mRNA表达减少(P<0.01);与模型组相比,蛇伤胶囊组血小板细胞PTEN蛋白表达减少(P<0.01),PI3K、Akt蛋白及CD62P mRNA表达增加(P<0.01)。结论蛇伤胶囊可通过上调PI3K/Akt通路,改善竹叶青蛇伤导致的血小板活化功能受抑制,从而治疗竹叶青蛇伤凝血障碍。

基于miR-155/TLR4/MyD88信号通路探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤的抗炎作用

目的探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤miR-155/Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路及炎症的影响。方法将18只雄性新西兰大白兔分为对照组、模型组和蛇伤胶囊组,每组6只。对照组正常饮食饮水,另两组注射7.5 mg/kg竹叶青蛇毒液6 h后,模型组灌胃348 mg/(kg·d)生理盐水,蛇伤胶囊组灌胃348 mg/(kg·d)蛇伤胶囊,均连续灌胃1周。观察实验兔的一般行为学,qRT-PCR检测外周血中miR-155a-5p、TLR4和MyD88表达,ELISA检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)含量。结果与对照组比较,模型组精神和食欲变差,排便稀软带血,伤口溃烂,miR-155-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达均显著增加(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著下降(均P<0.01)。蛇伤胶囊组较模型组情况明显好转,miR-155a-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达显著下降(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著增加(均P<0.01)。结论蛇伤胶囊抑制竹叶青蛇伤造成的炎症反应,维持Th1/Th2细胞平衡,其作用机制可能与抑制miR-155/TLR4/MyD88轴的表达有关。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤兔血小板活化功能影响的研究

目的研究蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤兔血小板活化功能的影响。方法选取24只新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型组、蛇伤胶囊组,每组各8只,雌雄各半,根据前期研究方法模型组和蛇伤胶囊组以兔耳缘静脉注射0.75 mg/kg竹叶青蛇毒液建立竹叶青蛇伤兔模型,正常对照组注射等量生理盐水。注射6 h后予正常对照组和模型组10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃,蛇伤胶囊组予10 ml/(kg·d)蛇伤胶囊所配药液灌胃。以上3组连续灌胃1周后兔耳缘静脉采血5 ml,血小板分离提取后应用实时荧光定量聚合酶链式反应技术(qPCR)检测各组血小板活化指标αⅡb整合素(CD41)、整合素β链Ⅲ(CD61)、血小板P选择素(CD62P)、溶酶体颗粒膜糖蛋白(CD63)信使核糖核酸(mRNA)表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)水平。分析比较各组血小板活化指标CD41、CD61、CD62P、CD63 mRNA表达及GPⅡb/Ⅲa水平差异。结果各组血小板细胞CD41、CD61、CD62P、CD63 mRNA表达及GPⅡb/Ⅲa水平组间比较,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。两两组间比较,与正常对照组比较,模型组CD41、CD61、CD62P、CD63 mRNA表达及GPⅡb/Ⅲa水平显著降低,差异有显著统计学意义(P<0.01),蛇伤胶囊组CD41、CD61、CD62P、CD63 mRNA表达显著降低,差异有显著统计学意义(P<0.01),GPⅡb/Ⅲa水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,蛇伤胶囊组CD41、CD61、CD62P、CD63 mRNA表达显著增加,差异有显著统计学意义(P<0.01),GPⅡb/Ⅲa水平显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论竹叶青蛇伤时血小板活化功能受抑制,蛇伤胶囊可通过提高CD41、CD61、CD62P、CD63、GPⅡb/Ⅲa水平,减轻血小板活化功能抑制,改善血小板活化功能。

蛇伤胶囊的质量标准建立

目的建立蛇伤胶囊的质量标准。方法采用显微鉴别法对蛇伤胶囊中红背丝绸和半边莲进行鉴别;采用薄层色谱(TLC)法对小叶三点金、红背丝绸、半边莲和通城虎进行鉴别;利用高效液相色谱(HPLC)法对主要有效成分岩白菜素和异荭草苷,以及有效成分兼有毒成分马兜铃酸A进行含量测定。结果在显微鉴别中,红背丝绸的草酸钙针晶,半边莲的气孔和菊糖,组织特征明显且具有专属性;TLC鉴别专属性强,斑点清晰,分离度良好;岩白菜素、异荭草苷及马兜铃酸A在0.0304~0.6072 mg·mL^(-1)(r=0.9999)、0.0101~0.2028 mg·mL^(-1)(r=0.9998)及0.0139~0.2784 mg·mL^(-1)(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为95.75%,99.05%及100.61%,RSD分别为1.84%,2.89%及2.57%;11批蛇伤胶囊中岩白菜素、异荭草苷及马兜铃酸A的含量范围分别为4.74~5.93,0.26~0.34及0.27~0.32 mg·g^(-1)。结论建立的鉴别方法专属性强,含量测定方法稳定性、重复性和准确度良好,该质量标准可用于蛇伤胶囊的质量控制。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤患者凝血功能的影响

目的：研究中药蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤患者凝血功能障碍的机制。方法采用前瞻性研究方法，将70例竹叶青蛇伤且符合火毒证诊断标准的患者按随机数字表法分为治疗组和对照组，每组35例。对照组在基础治疗（包括伤口消毒，肌注破伤风抗毒素1500 U，使用常规剂量抗菌药物、地塞米松10 mg、奥美拉唑40 mg）的同时口服季德胜蛇药片10片，每天3次；治疗组在基础治疗的同时口服蛇伤胶囊（院内制剂，由大黄、黄连、山慈菇、土木香、杨梅皮、冰片等组成）5粒，每天3次；两组疗程均为1周。用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定两组患者治疗前后血清血小板α-颗粒膜糖蛋白（CD62p）、血栓素B2（TXB2）、血小板第3因子（PF3）和血管性血友病因子（vWF）的含量。结果治疗组和对照组治疗前CD62p、TXB2、PF3、vWF含量比较差异均无统计学意义〔CD62p（μg/L）：3.81±1.64比3.52±1.43，TXB2（μg/L）：13.04±1.67比13.31±1.14，PF3（μg/L）：2.84±1.08比2.88±1.23，vWF（μg/L）：12.36±2.42比11.89±2.08，均P＞0.05〕；两组治疗后CD62p、TXB2、PF3含量均较治疗前升高，vWF较治疗前降低，且以治疗组的变化更显著〔CD62p（μg/L）：6.73±1.77比5.81±1.62，TXB2（μg/L）：18.65±1.77比17.90±1.68，PF3（μg/L）：5.61±1.48比4.77±1.24，vWF（μg/L）：3.87±1.01比4.58±1.09，P＜0.05或P＜0.01〕。结论蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤后的凝血功能障碍可能是通过改善血小板活化功能、减轻血管内皮细胞损伤来实现的。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮功能影响

目的:研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的机制。方法:根据前期实验复制竹叶青蛇伤的动物及细胞模型。均设置空白组(KB)、模型组(MX)和低、中、高剂量蛇伤胶囊药液组(DY、ZY、GY)5组,每组10个样本。在动物实验中,KB经兔右后腿皮下注射0.75 m L/kg生理盐水,6 h后灌胃10 m L/kg生理盐水。MX、DY、ZY和GY经兔右后腿皮下注射0.75 m L/kg竹叶青蛇毒液,6 h后分别灌胃10 m L/kg生理盐水和10 m L/kg低、中、高剂量蛇伤胶囊药液。各组均每日灌胃1次,连续灌胃1周。于末次灌胃后24 h经耳缘静脉采血,分离出血清。在细胞实验中,KB加入10%正常兔血清培养,MX在KB的基础上加入5μg/m L竹叶青蛇毒液培养,DY、ZY和GY在MX基础上培养6 h后分别加入5%、10%和15%的含中药兔血清继续培养。各组分别培养72 h后,收集细胞培养液及细胞。以酶联免疫吸附法检测兔血清及细胞培养液中的内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(Nitric Oxide,NO)和血管性血友病因子(von Willebrand Factor,v WF)水平。流式细胞术检测细胞中NO含量。结果:MX的ET-1和v WF水平相对KB均出现了显著的升高(P<0.01,P<0.05),NO水平显著降低(P<0.01);DY、ZY和GY的ET-1及v WF水平相对MX均出现不同程度降低,NO水平出现不同程度的升高,其中ZY组变化有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:蛇伤胶囊可通过抗血管内皮细胞损伤途径治疗竹叶青蛇伤凝血障碍。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤兔CD62p、CD63、GPⅡb/Ⅲa的影响

目的研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤兔凝血障碍的机制。方法将50只新西兰大白兔按随机数字表法分为5组,每组10只。正常对照组经右后腿皮下注射0.75 m L/kg生理盐水,6 h后灌胃10 m L/kg生理盐水。模型组和蛇伤胶囊低、中、高剂量组均右后腿皮下注射0.75 m L/kg竹叶青蛇毒液,6 h后分别予10 m L/kg生理盐水和低、中、高剂量蛇伤胶囊药液灌胃,均每日灌胃1次,连续灌胃1周后测定P-选择素(CD62p)、溶酶体颗粒膜糖蛋白(CD63)、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)的含量。结果与正常对照组比较,模型组CD62p、CD63、GPⅡb/Ⅲa含量均降低(P<0.05);与模型组比较,蛇伤胶囊中剂量组CD62p、CD63、GPⅡb/Ⅲa含量均升高(P<0.05)。结论蛇伤胶囊可以通过促进血小板活化治疗竹叶青蛇伤的凝血障碍。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮细胞TM/PC系统的影响

目的研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的机制。方法选取新西兰大白兔20只,随机分为中药组和空白组,每组10只,分别以696mg·kg-1·d-1蛇伤胶囊药液和生理盐水灌胃,每天2次,连续5天,末次灌胃2h后心脏采血,常规方法制备含药血清和空白血清。采用噻唑蓝法对竹叶青蛇毒进行细胞毒性试验,确定蛇毒干预浓度为5μg/ml。人脐静脉血管内皮细胞常规培养、传代后,随机分为空白组(KB组),模型组(MX组),低、中、高剂量含药血清组(DY组、ZY组、GY组)5组,每组10个样本。KB组加入10%正常兔血清培养,MX组在KB组的基础上加入5μg/ml竹叶青蛇毒液培养,DY组、ZY组、GY组在MX基础上培养6h后分别加入5%、10%、15%的含中药兔血清继续培养。各组分别培养72h后收集细胞培养液,以酶联免疫吸附法检测TM、T-TM、APC、EPCR、PS水平。结果 MX组的TM、T-TM、APC、EPCR、PS水平相对KB组均显著升高(均P<0.05,其中T-TM、EPCR和PS的P值<0.01);DY组、ZY组、GY组的TM、T-TM、APC、EPCR、PS水平相对MX组均出现不同程度的降低,其中ZY组降低效果显著(均P<0.05,其中T-TM和EPCR的P值<0.01)。结论竹叶青蛇毒可造成血管内皮细胞损伤,增加机体出血风险;蛇伤胶囊可通过作用血管内皮细胞TM/PC系统改善机体的凝血功能,是治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的部分机制。

蛇伤胶囊治疗毒蛇咬伤500例临床观察

目的回顾我院2006至2011年收治500例蛇伤患者口服蛇伤胶囊治疗的临床疗效观察。方法采取中西医结合施治,观察计算治疗前与出院时患者局部和全身症状体征的尼莫地平积分指数。结果:500例患者治愈351例(70.20%),有效124例(24.8%),无效25例(5.00%),总有效率95.00%。结论口服蛇伤胶囊能有效改善局部和全身症状,临床疗效显著。

蛇伤胶囊在竹叶青蛇咬伤规范化治疗中的应用效果

目的观察蛇伤胶囊在竹叶青蛇咬伤规范化治疗中的应用效果。方法选取2020年3月—2021年8月福建中医药大学附属人民医院诊治的竹叶青蛇咬伤脚踝部的患者58例,依就诊时间顺序进行编号,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组29例。患者入院后均接受规范化治疗,观察组在上述治疗基础上加用蛇伤胶囊治疗,2组患者治疗时间≥5 d。比较2组患者治疗前与治疗后3、5 d患肢疼痛评分变化,患肢与健侧周径差及血小板计数差异。结果治疗后3、5 d时,2组患肢VAS评分、患肢与健侧周径差均较同组治疗前降低或减小,PLT计数则升高,且观察组降低、减小或升高的程度大于同期对照组(P均<0.01)。结论蛇伤胶囊在竹叶青蛇咬伤规范化治疗中的应用效果显著,能够明显缓解患处疼痛与肿胀症状,改善PLT水平,值得临床推广应用。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇咬伤患者炎症指标影响的临床研究

目的观察蛇伤胶囊对竹叶青蛇咬伤患者炎症指标的影响。方法选择2019年3月-2020年12月治疗的竹叶青蛇咬伤患者100例,随机分为治疗组和对照组各50例。治疗组采用蛇伤胶囊治疗,对照组给予季德胜蛇药治疗,观察两组患者第1、3、5、7天的患肢肢体周径差,比较两组患者的肢体肿胀消退时间、疗程以及第3、5、7天的血清白细胞比值、降钙素原水平(PCT)。结果两组患者治疗后第1、3天的患肢与健侧周径差比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);治疗后第5、7天的患肢与健侧周径差比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。两组患者肿胀消退时间及疗程比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。两组患者治疗后第3、5、7天的白细胞比值及降钙素原水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论蛇伤胶囊可明显改善竹叶青蛇咬伤患者肢体肿胀症状,缩短肢体肿胀消退时间及疗程,降低血清白细胞计数和降钙素原水平。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤患者t-PA、PAI-1、TAT及SFMC的影响

目的研究中药蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤患者凝血障碍的机制。方法将40例竹叶青蛇咬伤患者随机分为两组,均给予常规治疗,如伤口消毒清创处理,肌注破伤风抗毒素1500u,常规使用抗生素,给予地塞米松10mg、奥美拉唑40mg。对照组在常规治疗的基础上给予口服季德胜蛇药10片,每天3次;治疗组在常规治疗的基础上给予口服蛇伤胶囊5片,每天3次。检测治疗前及治疗后1周各组患者血浆中t-PA、PAI-1、TAT及SFMC水平。结果两组患者治疗前t-PA、PAI-1、SFMC、TAT值无明显差异(P>0.05)。治疗后两组患者t-PA、SFMC值均降低,差异均无统计学意义(P>0.05);PAI、TAT值均升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗前后两组患者的t-PA、PAI、SFMC、TAT差值比较无统计学意义(P>0.05)。结论蛇伤胶囊和季德胜蛇药对竹叶青蛇咬伤均有显著疗效,两种蛇药可能通过促进凝血酶的生成、增强凝血酶的活性,同时抑制纤溶系统而发挥止血作用。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮细胞IL-8、VCAM-1、MIP-1α表达的影响

目的观察蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮细胞IL-8、VCAM-1、MIP-1α表达的影响。方法根据课题组前期实验方法制备蛇伤胶囊兔含药血清及复制竹叶青蛇伤细胞模型,设空白组(KB组)、模型组(MX组)和低、中、高浓度蛇伤胶囊药液治疗组(DY组、ZY组、GY组)5组,每组10个样本。在细胞实验中,KB组加入10%正常兔血清培养,MX组在KB组的基础上加入5μg/ml竹叶青蛇毒液培养,DY组、ZY组和GY组在MX组基础上培养6h后分别加入5%、10%和15%的含中药兔血清继续培养。各组分别培养72h后,收集细胞培养液,以酶联免疫吸附法检测细胞培养液中的IL-8、VCAM-1、MIP-1α含量。结果MX组的IL-8、VCAM-1及MIP-1α水平相对KB组均显著升高(均P<0.01),蛇伤胶囊药液治疗组IL-8、VCAM-1及MIP-1α水平相对MX组均不同程度降低,其中ZY组变化有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论蛇伤胶囊可通过降低IL-8、VCAM-1及MIP-1α表达治疗竹叶青蛇伤所致血管内皮炎症反应。

蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇咬伤270例

我国每年毒蛇咬伤患者达10余万人次，其中致死率5～10％，致残率25～30％[1]、。我院为福建省蛇伤救治中心，每年诊治大量蛇伤患者，其中竹叶青蛇咬伤占首位[2]。2007年1月～2010年12月，我科采用中西医结合方法治疗竹叶青蛇咬伤270例，报告如下：

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤凝血因子FVa、FⅧa、FIXa、FXa的影响

目的研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的机制。方法选取新西兰大白兔20只,随机分为中药组和空白组各10只,分别以696mg·kg-1·d-1蛇伤胶囊药液和生理盐水灌胃,每天2次,连续5天,末次灌胃2h后心脏采血,常规方法制备含药血清和空白血清。采用噻唑蓝法对竹叶青蛇毒进行细胞毒性试验,确定蛇毒干预浓度为5μg/ml。人脐静脉血管内皮细胞常规培养、传代后,随机分为空白组(KB组),模型组(MX组),低、中、高剂量含药血清组(DY组、ZY组、GY组),每组10个样本。KB组加入10%正常兔血清培养,MX组在KB组的基础上加入5μg/ml竹叶青蛇毒液培养,DY组、ZY组、GY组在MX组基础上培养6h后分别加入5%、10%、15%的含中药兔血清继续培养。各组分别培养72h后,收集细胞培养液,以酶联免疫吸附法检测FVa、FⅧa、FIXa、FXa水平。结果 MX组的FVa、FⅧa、FIXa、FXa水平相对KB组显著下降(均P<0.05,其中FVa和FXa的P值<0.01);DY组、ZY组、GY组的FVa、FⅧa、FIXa、FXa水平相对MX组均出现不同程度的升高,其中ZY组升高效果显著(均P<0.05,其中FVa和FXa的P值<0.01)。结论竹叶青蛇毒损伤血管内皮细胞导致凝血因子FVa、FⅧa、FIXa、FXa水平下降,蛇伤胶囊可以升高血管内皮细胞凝血因子FVa、FⅧa、FIXa、FXa水平,对竹叶青蛇伤引起的凝血障碍有显著治疗作用。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤患者血小板及凝血时间的影响

目的研究中药蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤患者凝血障碍的机制。方法将70例竹叶青蛇伤(均符合火毒证诊断标准)患者按SPSS统计软件产生随机数分为治疗组和对照组各35例。两组基础治疗方法均为伤口消毒处理,肌注破伤风抗毒素1500u,使用常规量抗生素,给予地塞米松10mg、奥美拉唑40mg等。对照组在基础治疗上口服季德胜蛇药片10片,每天3次;治疗组在基础治疗上口服蛇伤胶囊5粒,每天3次。两组疗程均为1周。观察两组治疗前后血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)水平。结果治疗前,两组TT、PT、APTT、FIB、PLT、MPV、PDW比较,差异无统计学意义(均P>0.05);治疗后,治疗组FIB、PLT、MPV、PDW升高值(差值)高于对照组(P<0.05或P<0.01),而且治疗组TT、PT、APTT下降值(差值)高于对照组(P<0.01)。结论蛇伤胶囊具有减少凝血因子消耗、抗纤溶、改善血小板及其止血功能而治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的作用。

蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇咬伤63例

我院为福建省蛇伤救治中心,每年均诊治福州及周边地区大量蛇伤患者,其中竹叶青蛇咬伤占首位。2009年1月—2010年12月,笔者采用蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇咬伤63例,疗效满意,现报道如下：

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮细胞Cyt-C/Bcl-2信号通路的影响

目的研究蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤血管内皮细胞Cyt-C/Bcl-2信号通路的影响。方法 20只新西兰大白兔被随机分为空白组和中药组,每组10只,分别制备常规兔血清和含药兔血清。人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)传代后随机分为正常组、模型组、低、中、高剂量含药血清组5组。正常组以10%正常兔血清培养,模型组在正常组的基础上以5μg/mL竹叶青蛇毒液培养,低、中、高剂量组分别在模型组基础上培养6 h后加入5%、10%、15%的含药兔血清培养。各组培养72 h后,收集细胞,流式细胞术检测HUVEC细胞凋亡率,Western blot法检测HUVEC细胞浆及线粒体内Cyt-C、AIF蛋白表达,RT-qPCR法检测HUVEC中Bax、Bak、Bad、Bid、Bcl-xl、Bcl-w、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组细胞凋亡率明显提高(P<0.01);细胞浆Cyt-C、AIF的蛋白表达明显提高(P<0.01),线粒体内Cyt-C、AIF的蛋白表达明显下降(P<0.01);Bax、Bak、Bad、Bid、Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达明显提高(P<0.01),Bcl-xl、Bcl-w、Bcl-2 mRNA表达明显下降(P<0.01)。与模型组比较,低、中、高剂量组细胞凋亡率明显降低(P<0.01);细胞浆Cyt-C、AIF蛋白表达明显降低(P<0.01),线粒体内Cyt-C、AIF蛋白表达明显提高(P<0.01);Bax、Bak、Bad、Bid、Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达明显降低(P<0.01),Bcl-xl、Bcl-w、Bcl-2 mRNA表达明显提高(P<0.01)。与中剂量组比较,低、高剂量组细胞凋亡率明显增加(P<0.01);细胞浆Cyt-C、AIF蛋白表达明显提高(P<0.01),线粒体内Cyt-C、AIF蛋白表达明显下降(P<0.01);Bax、Bak、Bad、Bid、Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达明显增加(P<0.01),Bcl-xl、Bcl-w、Bcl-2 mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论蛇伤胶囊能够通过调控Cyt-C/Bcl-2信号通路抑制竹叶青蛇伤血管内皮细胞凋亡,从而治疗竹叶青蛇伤及其引起的血管损伤。

蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤t-PA、PAI-1和AT-Ⅲ的影响

目的研究蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的机制。方法根据前期实验复制竹叶青蛇伤的动物及细胞模型,均设置空白组(KB),模型组(MX),低、中、高剂量蛇伤胶囊药液组(DY、ZY、GY),共5组,每组10个样本。在动物实验中,KB组经兔右后腿皮下注射0.75ml/kg生理盐水,6h后灌胃10ml/kg生理盐水。MX、DY、ZY和GY组经兔右后腿皮下注射0.75ml/kg竹叶青蛇毒液,6h后分别灌胃10ml/kg生理盐水和10ml/kg低、中、高剂量蛇伤胶囊药液。各组均每日灌胃1次,连续灌胃1周。于末次灌胃后24h经耳缘静脉采血,分离血清。在细胞实验中,KB组加入10%正常兔血清培养,MX组在KB组的基础上加入5μg/ml竹叶青蛇毒液培养,DY、ZY、GY组在MX组基础上培养6h后分别加入5%、10%、15%的含中药兔血清继续培养,各组分别培养72h后,收集细胞培养液。以酶联免疫吸附法检测兔血清及细胞培养液中组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator,t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)和抗凝血酶-Ⅲ(Antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)水平。结果 MX组的AT-Ⅲ和t-PA水平相对KB组均显著升高(P<0.01),PAI-1水平较KB组显著降低(细胞实验中,P<0.05;动物实验中,P<0.01);DY、ZY和GY组的AT-Ⅲ及t-PA水平相对MX组均明显降低(动物实验:ZY组t-PA和DY组AT-Ⅲ,均P<0.05;细胞实验:ZY组AT-Ⅲ,P<0.05;其余均P<0.01),DY、ZY和GY组的PAI-1水平较MX组明显升高(P<0.01)。结论蛇伤胶囊具有促凝和抗纤溶、改善机体凝血功能的作用,是蛇伤胶囊治疗竹叶青蛇伤凝血障碍的部分机制。

HPLC法测定蛇伤胶囊中盐酸小檗碱含量

目的:建立蛇伤胶囊中盐酸小檗碱含量的测定方法。方法:色谱柱为Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈(75∶25);柱温:35℃;流速:1.0 m L/min;检测波长:346 nm;进样量:10μL。结果:盐酸小檗碱含量在0.101μg^1.008μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率为97.36%,RSD=1.23%(n=6)。结论:该方法简便快速,重复性好,可为蛇伤胶囊的质量控制提供依据。