中国蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库ESTs序列测定及生物信息学分析

前期我们构建了中国蛇岛蝮蛇(Gloydius shedaoensis shedaoensis,GSS)毒腺(GSSG)的cDNA(GSSG-cD-NA)文库。本文从构建的GSSG-cDNA文库阳性重组子中随机挑选了216个单克隆进行5'端表达序列标签(EST)单向测序,获得了211条高质量的ESTs。生物信息学序列比对分析结果表明84个克隆为已知功能基因,29个克隆为未知功能基因,98个克隆为新基因,分别占总ESTs的39.8%、13.7%和46.5%。成功获得了GSSG的部分ESTs序列,为GSS蛋白活性组分基因的克隆、表达和功能研究奠定了一定基础。

双向电泳结合质谱初步分析蛇岛蝮蛇毒蛋白质组

采用荧光染料(Cy5)标记中国辽宁蛇岛蝮(Gloydius shedaoensis shedaoensis,GSS)蛇毒(snake venom,SV,GSS-SV)蛋白质,获得了该蛇毒的双向十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D SDS-PAGE)图谱,经DeCyder软件分析,分辨出1000多个蛋白点,分子量范围在10～150ku间,等电点在4～7的蛋白质点占78.8%。凝胶后染色(post-staining)采用蛋白荧光染料Deep Purple,选取的5个蛋白点经胶内酶解,产生的肽段经高效液相色谱-电喷雾串联质谱(high performance liquid chromatography/HPLC-electro-spray ionization tandem mass spectrometry/ESI-MS/MS,HPLC-ESI-MS/MS)进行序列测定,质谱数据经Sequest Bioworks软件分析,为蛇毒L-氨基酸氧化酶、金属蛋白酶、类凝血酶、纤溶酶原激活物和磷脂酶A2的同源蛋白。本研究采用的荧光标记2DSDS-PAGE结合HPLC-ESI-MS/MS的技术适于高通量研究蛇毒蛋白组成。

蛇岛蝮蛇及其保护

蛇岛,又名小龙山,位于中国辽东半岛南端的渤海中,东经120°59′,北纬38°57′,与大陆最近距离7海里,面积0.729(公里)~2。蛇岛地势西南高、东北低,主峰在岛的西南角,海拔215.0米,西、南两面是陡立的峭壁,东、北两面是6条向下倾斜的冲击沟。蛇岛以其生存有大量的蛇岛蝮蛇(Agkistrodon shedaoensis Zhao)而闻名于世。这个以蝮蛇为中心的海岛生态系统,是生物学研究的理想基地。随着医学科学技术的发展,蛇岛蝮蛇的医疗作用逐渐被人们所认识.

蛇岛蝮

蛇岛蝮是蝰科蝮亚科亚洲蝮属下的一种具有颊窝的管牙类毒蛇。体型中等大小,短粗,中段背鳞23行。头呈三角形,与颈区分明显,眼后有一道较细的黑褐色眉纹一直延伸到口角。通身背面灰色或灰褐色,体背两侧各有1行中间色浅的深色斑块,斑块常在脊部相融,形成深浅相间的横斑;腹面灰白色,具细密的深褐色细点。卵胎生,每两年繁殖一次。蛇岛蝮栖息于海岛、辽东半岛的山区,以迁徙的候鸟为食,幼体捕食鼠妇、蜈蚣等无脊椎动物。蛇岛蝮是中国特有种,主要分布于中国辽东的蛇岛,在沈阳市及大连市等地区也有少量分布。

中国蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库的构建

为研究中国蛇岛蝮蛇(Gloydius shedaoensis shedaoensis)基因工程产品,采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术构建其毒腺的cDNA表达文库。采用RNAiso试剂提取毒腺总RNA,再采用Poly(A)PuristTM试剂盒分离纯化mRNA,第一链cDNA经反转录合成,双链cDNA经LD-PCR合成并扩增;分级分离去除小片段,收集大于400 bp的cDNA片段,与质粒载体pDNR-LIB连接,采用电转化法将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞DH10B。构建的蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库库容量为8×107cfu/ml,大多数插入片段大于1 000 bp,重组质粒表达率高(100%)。本研究成功构建了高质量的蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库,表达文库质量高,可用于进一步克隆和表达中国蛇岛蝮蛇蛋白活性组分基因,并对其功能进行研究。

神秘的捕食者——蛇岛蝮

这是一个面积不到一平方公里的微型岛屿，至今人们未能解开它的全部秘密，只知道它的主人是2万多条世界上独有的一种毒蛇，它们保持着极为罕见的生存方式：身披树皮颜色，静候在树枝顶端，伺机捕捉路过停歇的小形候鸟，天长地久地重复着捕食与被捕食的惊心动魄的一幕。而这一幕给这个岛屿带来了不可估量的身价。

观蛇者说 老铁山蛇岛日记

蛇岛与辽宁老铁山隔海相望,岛上的蝮蛇和迁徙的候鸟是构成这个岛屿生态系统的主要动物类群,蝮蛇对候鸟有着十分紧密的依赖关系。动物学家李建立用自己的日记记录下了每天发生在蛇岛上的蛇与鸟的故事。

大连蛇岛 遍布蝮蛇的岛屿

今年9月,我有幸获得了到大连蛇岛国家级自然保护区采访的机会,得以踏上这个遍布蝮蛇的岛屿,体验与蛇岛腹近距离接触的感觉。 蛇岛,又名＂小龙山岛＂,位于大连市旅顺口区西北面的渤海之中,距离旅顺港25海里。蛇岛的总面积约1平方公里,地形以低山丘陵为主,植被多是小灌木,无高大乔木。蛇岛的主峰海拔216米,岛上有7条山脊,6条沟,7处岩洞,岛四周除了有一小片卵石滩外,均为悬崖峭壁。蛇岛是世界上唯一的只生存单一类蛇的海岛,岛上只有一种蛇类——蛇岛蝮,估计种群数量约一万余条。登上海岛首先要到位于旅顺的蛇岛国家级自然保护区办公室办理相关手续,之后由旅顺乘船登岛。

蛇岛 大自然的遗产

将中国渤海湾濒临辽宁省大连市旅顺口区的蛇岛视为一种特殊的自然遗产，一点也不过分。该岛面积虽只有0.73平方公里，但却是全世界特有种毒蛇“蛇岛蝮”的唯一栖息地。据近年估计，虽然岛上“蛇岛蝮”的数量尚有两万条左右，但它仍然是极度濒危的物种，原因就在于其分布地域的面积太小，禁不起任何风吹草动。

蛇岛和梧州蛇仓

我国辽东半岛南端的渤海海域,有个世界闻名的“蛇岛”。在面积不到一平方公里的土地上,栖息着一万多条蝮蛇,并以每年5%的速度递增。蛇岛上的蝮蛇以捕食过往的鸟类为生,它们和一般的蛇不同,不吃老鼠,因此蛇岛上老鼠十分猖獗。蛇岛蝮蛇回归性特别强,如果把它抛入海里,仍会游回原处,甚至连栖息的那棵树都不会弄错。蛇岛上的蝮蛇,有专门机构管理,并定期采取蛇毒,为国家创造财富。我国广西梧州市郊,有一个蛇仓。

蛇岛

渤海东部,有个南北狭长,近似菱形的小岛,这就是闻名中外的世界奇岛——蛇岛。若从旅顺港乘船前往,仅有25海里的航程。也许不久的将来,这个世上独一无二的"蛇的王国"会辟为旅游圣地。那时,旅客换上特制的防蛇旅游服,就可以登岛畅游,饱览蛇岛风光了。蛇岛地势西南高东北低,海拔215.5米的主峰像一头狮子坐在西南角。远远望去,岛上草木丛生,葱郁茂密。每当春夏之交,姹紫嫣红的马兰花、石竹花和黄花菜等开遍山野。秋季来临,洁白的芦花如片片云朵,飘落在山谷洼地上。岸边岩石被海浪雕凿成海蚀穴。

将蛇放进冰箱,它会进入冬眠吗

蛇的冬眠期最长可达半年之久。在我国的大连蛇岛上,生活着20000多条剧毒的蛇岛蝮,在非冬眠期,蛇岛上的老鼠会被蛇岛蝮“屠杀”。但是一旦到了冬眠期,蛇岛蝮会沦为老鼠的食物,这就是“蛇吃老鼠半年,老鼠吃蛇半年”的由来。那么,蛇为何要冬眠呢?如果将蛇放进冰箱里,它们会不会进入冬眠呢?

夏眠知多少

流火的7月一到,有的动物便开始“睡长觉”了。生活在多瑙(nǎo)

世界级生态奇观——孤岛雄山禽踪蛇影

辽宁蛇岛老铁山国家级自然保护区籍贯:大连绿色称号:国际自然保护地联盟在位于旅顺口区西北方的渤海中有一座巍峨奇异的小岛矗立于万顷碧波之中,这就是闻名中外的世界奇岛——蛇岛。蛇岛,距陆地最近处10千米,岛屿面积仅73公顷,岛上生存着近2万条单一种类的蛇岛蝮。