日本蛇根草化学成分的提取分离及其抗氧化活性研究

以日本蛇根草(Ophiorrhiza japonica Bl.)作原料,无水乙醇浸提后利用不同极性有机溶剂萃取,在对不同萃取部位的抗氧化活性初步分析的基础上,通过硅胶及Sephadex LH-20柱层析等色谱分离技术对各萃取部位的化学成分进行分离和纯化。研究结果表明:日本蛇根草的各萃取部位均具有抗氧化活性,其中氯仿萃取部位的活性最高,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·),以及2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑-6-磺酸二胺盐自由基(·ABTS^(+))的清除率分别为86%和89%。从不同萃取部位共分离得到10个化合物,分别鉴定为(E)-3-((9H-吡啶[3,4-b]吲哚-1-基)甲基)-2-亚乙基戊烷-1,5-二醇(1)、 6-羟基哈曼碱(2)、哈曼碱(3)、对羟基苯甲醛(4)、东莨菪素(5)、 3-氧代-α-紫罗兰醇(6)、黑麦草内酯(7)、β-谷甾醇(8)、 3-表-坡模酸(9)和1-油酸甘油酯(10)。其中,化合物1、4、6、7、9和10为首次从蛇根草属中发现。自由基清除实验结果显示:化合物2具有显著的抗氧化活性,对DPPH·和·ABTS^(+)的半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.209和0.212 mmol/L。

日本蛇根草OjDFR5基因的克隆与真核表达载体的构建

二氢黄酮醇4-还原酶具有明显的底物特异性,是类黄酮代谢途径中的关键酶,对不同花青素的合成与积累起到决定作用,直接影响植物的颜色性状。日本蛇根草是一种具有较好药用价值的研究材料。通过分子生物学方法克隆获得日本蛇根草中的二氢黄酮醇4-还原酶的编码基因,OjDFR5,并对该基因的序列进行分析,同时将其与真核表达载体pBI121进行连接,获得真核重组表达质粒pBI121-OjDFR5,并将重组质粒转入农杆菌GV3101感受态细胞中。研究结果一方面为该基因的功能解析奠定基础,同时也为探究日本蛇根草类黄酮代谢机制研究提供基因资源。

加工及干燥方式对短小蛇根草活性成分的影响

为进一步推进短小蛇根草Ophiorrhiza pumila在喜树碱产业上的应用,本研究利用高效液相色谱法、紫外可见分光光度法,分析了加工方法(杀青、不杀青)及干燥方式(晒干、阴干、烘干、真空冷冻干燥、真空干燥)对短小蛇根草中活性成分(喜树碱、总黄酮、粗多糖)的影响。结果表明,加工方法及干燥方式均对短小蛇根草活性成分影响较大,喜树碱在晒干后含量最高(1.90 mg·g^(-1)),总黄酮含量在真空干燥后含量最高(1.38 mg·g^(-1)),粗多糖在冷冻干燥后含量最高(50.01 mg·g^(-1)),均显著高于其他处理组(P<0.05);杀青会导致喜树碱含量普遍降低,总黄酮含量显著提高,粗多糖含量普遍降低。在实际生产中,以晒干作为短小蛇根草的首选干燥方式,干燥前不宜采取杀青处理。

湘西产两种蛇根草中喜树碱含量的比较研究

首次以湘西产日本蛇根草(Ophiorrhiza japonica)和广州蛇根草(Ophiorrhiza cantoniensis Hance)为材料,采用乙醇浸取法提取其茎、叶中喜树碱,并用高效液相色谱法分析其含量.报道了湘西产两种蛇根草中均含有喜树碱,日本蛇根草茎、叶中喜树碱含量分别为0.00684%、0.00546%;广州蛇根草茎、叶中喜树碱含量分别为0.00275%、0.00153%,结果表明湘西产日本蛇根草中喜树碱含量较广州蛇根草高.

中国蛇根草属(茜草科)二新记录种

报道了中国云南省南部发现的中国蛇根草属(Ophiorrhiza)2新记录种:中泰蛇根草(O.ripicola)和小果蛇根草(O.rosacea),其中后者在中国被错误鉴定为变红蛇根草(O.subrubescens)。

国产尖叶蛇根草(茜草科)的订正（英文）

中国文献中记载的尖叶蛇根草(Ophiorrhiza hispida Hook.f.)以及采自中国鉴定为该种的标本均实为近簇花蛇根草(O.pseudofasciculata Schanzer),在此予以纠正。

美丽蛇根草正丁醇部生物碱成分研究

采用柱色谱技术进行分离纯化,利用薄层色谱法及波谱方法分别鉴定药用植物美丽蛇根草Ophiorrhiza rosea Hook全草甲醇提取物正丁醇萃取部分化合物结构,研究美丽蛇根草的生物碱成分。结果表明:从美丽蛇根草中共得到4个吲哚生物碱化合物,分别鉴定为Harman(1)、Strictosidinic acid(2)、5-Carbomethoxylyaloside(3)、Lyalosidic acid(4);化合物2~4为首次从该种植物中分离得到。

大苞蛇根草化学成分的研究

利用柱色谱技术进行分离纯化,通过理化性质及波谱方法对大苞蛇根草单体化合物进行了结构鉴定。从中共得到6个单体化合物,分别为豆甾醇(1)、β-谷甾醇(2)、胡萝卜甙(3)、3β-乙酸基-20-羽扇豆烷(4)、无羁萜(5)、铁力木酸(6)。均为首次从该植物中得到。

中国纤细蛇根草(茜草科)的订正

通过标本考证和野外研究,证实中国文献记载的纤细蛇根草(Ophiorrhiza gracilis Kurz)实为尾瓣蛇根草(O.caudipetala Deb&Monda)错误鉴定,而后者之前仅被报道分布于印度,因此为中国新记录。尾瓣蛇根草具有明显不等大的对生叶片,花冠裂片背部具长0.6~1 mm的角状突起,易与中国蛇根草属其它种类区分。

大孔树脂法分离纯化胆木中短小蛇根草苷

目的:考察不同型号大孔树脂分离纯化胆木提取液中短小蛇根草苷(Pum iloside,PML)的工艺条件及参数。方法:采用水煎法提取,HPLC法测定含量;以静态饱和吸附量、洗脱量、洗脱率为指标比较5种大孔树脂,并对AB-8树脂的吸附容量、洗脱溶剂、洗脱体积进行筛选;采用甲醇重结晶法纯化PML,并用波谱方法鉴定其化学结构。结果:5种树脂中,AB-8型树脂具有较好的吸附及洗脱参数,对PML的吸附容量为2.44 mg/g干树脂。适宜的工艺条件为:6倍柱体积蒸馏水洗脱后,再用4倍柱体积的30%乙醇以2 BV/h的流速洗脱,减压回收溶剂后过滤,沉淀甲醇重结晶。PML得率为75.1%,纯度>99.5%。结论:AB-8树脂附性能良好,适合胆木中PML的分离纯化。

广州蛇根草化学成分及其抗菌活性的研究

利用硅胶、大孔树脂等色谱分离手段从广州蛇根草中分离得到了3个化合物,利用理化性质及波谱方法对试验得到的单体化合物进行了结构鉴定,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、β-胡萝卜苷(2)、喜果苷(3)。化合物1、2、3均为首次从该植物中得到。采用滤纸片法测定广州蛇根草乙醇提取物的不同溶剂萃取部分的抗菌活性。结果表明,广州蛇根草氯仿部分和石油醚部分均含有抑菌活性物质,而化合物1(β-谷甾醇)由石油醚萃取物中得到且量很大(3.2 g),则说明该甾醇化合物可能为广州蛇根草中主要的抑菌活性物质。

滇南蛇根草化学成分的研究

采用柱色谱技术从药用植物滇南蛇根草Ophiorrhiza austroyunnanensis Lo.全草的甲醇提取物分离得到9个化合物,利用理化性质及波谱方法分别鉴定为β-谷甾醇(1)、β-豆甾醇(2)、β-胡萝卜苷(3)、白桦脂醇(4)、叶黄素(5)、东莨菪素(6)、熊果酸(7)、茜根酸-1-甲醚(8)和豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(9)。所有化合物均为首次从该植物中得到。

抗癌药物在日本蛇根草中的检测(英文)

利用HPLC技术在日本蛇根草中检测到了抗癌药物喜树碱(CPT)和羟基喜树碱(HCPT),而这2种药物是当今世界应用比较广泛的抗癌药物.蛇根草是中国传统的中草药,检测到日本蛇根草中含有CPT和HCPT,为获得这2种抗癌药物提供了新的生药途径,同时也为利用基因工程手段提高蛇根草中CPT和HCPT含量奠定了基础.

蛇根草属植物资源与喜树碱及类似物的生产

随着市场需求的不断扩大,持续提取抗癌药物喜树碱及类似物已成为当务之急。在蛇根草属植物中发现喜树碱及其类似物,是获取该类物质重要的替代途径。对蛇根草属植物的主要用途、生物学特征以及主要活性次生代谢产物进行了介绍,论述了运用生物技术从蛇根草属植物中产生喜树碱及其类似物的研究,并对该类植物资源的开发利用进行了展望。

中国蛇根草属(茜草科)几种植物的分类学订正

根据对中国蛇根草属Ophiorrhiza植物标本的研究和野外调查,将琼崖蛇根草O.aureolina f.qiongyaensis Lo和溪畔蛇根草O.humilis Tseng归并入短小蛇根草O.pumila Champ.ex Benth.,将海南蛇根草O.hainanensis Tseng归并入垂花蛇根草O.nutans C.B.Clarke,将广西蛇根草O.kwangsiensis Merr.exLi和变黑蛇根草O.nigricans Lo归并入日本蛇根草O.japonica Bl.,将龙州蛇根草O.longzhouensis Lo和圆锥蛇根草O.paniculiformis Lo归并入广州蛇根草O.cantoniensis Hance。

蛇根草水培体系中喜树碱、金丝桃苷及其他组分的初步鉴定

采集广东肇庆市鼎湖山的野生型广州蛇根草,进行室内水培优化,并初步构建了广州蛇根草水培体系.采用HPLC和GC-MS技术分析鉴定根部分泌物中的喜树碱、金丝桃苷以及其他成分.结果表明：广州蛇根草水培体系需建立在无强阳光直射,温度适宜（18～25℃）的条件下.利用大孔树脂AB-8吸附结合固相萃取技术富集根系分泌液,以石油醚/乙酸乙酯（6∶4）为洗脱液进行柱色谱分离,获得浓缩液经HPLC检测含有喜树碱和金丝桃苷,表明广州蛇根草根系分泌物中存在喜树碱和金丝桃苷,同时GC-MS鉴定分析表明广州蛇根草根系分泌物中还含有各种热稳定的化感物质,如邻苯二甲酸二丁酯和苯二甲酸,单（2-乙基己基）酯等化合物.本研究初步表明通过构建蛇根草水培体系,以其根系生物合成喜树碱和金丝桃苷有一定的可行性.

HPLC法测定日本蛇根草不同组织器官中绿原酸的含量

目的：测定日本蛇根草不同组织器官及发育周期中绿原酸的含量。方法：建立高效液相色谱法。色谱柱ODS Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相乙腈：0.4%磷酸溶液（1∶9）,流速：1.0 ml·min-1,检测波长：327 nm;柱温：30℃。结果：绿原酸在0.022～1.320μg（r=0.999 9）范围内线性关系良好。2月花期采收的日本蛇根草根、茎、叶、花中绿原酸的含量分别为7.076 7,1.030 7,10.609 5,24.110 3 mg·g-1,其全草与四月果期的全草绿原酸含量分别为18.600 4,14.082 6 mg·g-1。结论：日本蛇根草不同组织器官绿原酸含量差异较大,其中花的含量最高。不同发育周期绿原酸的含量也不同,花期含量明显高于果期。

日本蛇根草生物群落种间的联结性

对日本蛇根草群落进行野外调查,运用种间联结指数及2×2列联表的χ2统计量,分别测定了日本蛇根草群落中物种总体关联性和群落中主要植物物种对间的联结性。结果表明,群落物种总体表现出一定程度的正关联,群落处于比较稳定的阶段。群落中13种主要植物物种的78个种对中,有37个种对表现出正关联,有40个种对表现出负关联,一个种对表现为相互独立的关系,正负关联种对比例接近1∶1。而日本蛇根草与其它12个物种之间有8对表现为正联结,有4对表现为负联结,但均未达到显著水平。

变红蛇根草(茜草科)的二个新异名

根据对保存于湖南师范大学生命科学学院植物标本馆(HNNU)、中国科学院华南植物园植物标本馆(IB-SC)、中国科学院昆明植物研究所植物标本馆(KUN)和中国科学院植物研究所植物标本馆(PE)的茜草科(Rubiaceae)蛇根草属(Ophiorrhiza Linn.)标本的研究,将金黄蛇根草(Ophiorrhiza aureolinaLo f. aureolina)和绿春蛇根草(O.luchunensis Lo)处理为变红蛇根草(O.subrubescens Drake)的新异名。

中国蛇根草属种类订正

蛇根草属Ophiorrhiza Linn.是我国西南部至东南部热带、亚热带山地森林中很常见的一类草本植物。我国各主要标本室收藏的蛇根草属标本甚多,即使最保守的估算也超过3000号份,这些标本中未经鉴定的约占75％。上述数字说明对我国产的蛇根草属植物作一次较全面的订正很有必要。作者参加《中国植物志》茜草科的编写,蛇根草属是所承担任务的一部份,本文就是清理我国主要标本室历年收集的这属标本的小结。