蛇毒毒素的抗肿瘤作用及其在医药领域的应用

目的探讨蛇毒毒素的抗肿瘤作用及其在医药领域的应用。方法综述蛇毒毒素的抗肿瘤组分、抗肿瘤作用及其机制的研究进展。结果蛇毒毒素对多种肿瘤均有抑制作用,具有直接杀伤肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制血管再生等作用。结论对蛇毒毒素抗肿瘤组分及其作用机制进行深入研究,是当前抗肿瘤药物研究的重要方向。

蛇毒神经毒素国内专利技术分析研究

眼镜蛇毒神经毒素(neurotoxin,NT)是眼镜蛇毒中最主要的致死成分,主要存在于眼镜蛇科和海蛇科的蛇毒中。它的主要作用是选择性的与骨骼肌运动神经终板上的乙酰胆碱受体结合,从而起拮抗乙酰胆碱的作用。本文对眼镜蛇毒神经毒素国内专利技术申请概况、专利技术主题构成、技术发展脉络及重点专利进行分析,以期为我国相关医药企业的蛇毒神经毒素研发、生产及专利布局提供参考。

蛇毒膜毒素抗肿瘤作用的研究进展

蛇毒膜毒素抗肿瘤作用的研究进展杨惠玲，郭禹标蛇毒含有各种酶类和多种不同生理与药理活性蛋白。自１９３６年ｓａｒｋｅｒ［１］用盐析法从眼镜蛇（Ｎａｊａｎａｊａａｔｒａ）蛇毒中分离出一个能使离体猫心停搏的毒素以来，各种类似毒素如心脏毒素（Ｃａｒｄｉｏｔｏｘ...

广西产眼镜王蛇毒α-神经毒素基因的分子克隆及序列分析

为获得眼镜王蛇 (Ophiophagus hannah ,简称 Oh)蛇毒 α-神经毒素 (α- NT)的基因序列 ,依据眼镜蛇科不同毒蛇种类来源的 α- NT基因有较高的同源性 ,设计 1对上下游引物 ,为克服引物带来模糊扩增 ,在蛋白编码部分再设计 1对上下游特异引物 ,用 Nacleospin RNA Kit法从 3条活眼镜王蛇毒腺中提取 m RNA,以 3′端引物合成的 c DNA作为模板进行 PCR扩增反应 ,测定产物的核苷酸序列 ,得到全长 4 74 bp的眼镜王蛇 c DNA基因核苷酸序列。该核苷酸序列的信号肽与眼镜蛇树属 Pseudonnaja textilis(Pt)、海蛇 L aticauda semif asciata (L s) 10 0 %同源 ,与眼镜蛇南洋亚种 N aja sputatrix (Ns)、银环蛇 (Bungarusmulticinctus) (Bm) 96 .8%同源 ;蛋白密码部分有83.3%与 Ns、79.2 %与 Pt、76 .4 %与 L s、74 .1%与 Bm同源。信号肽后紧接着的 72个氨基酸有 90 .3%与已发现的眼镜王蛇毒长链α- NT Toxin a同源 ,大约有 73.6 %与 Toxin b、6 9.7%与 Oh- 4、6 6 .7%与 Oh- 5、5 6 .9%与 Oh-6 A和 6 B同源 ,并与 α-银环蛇毒素 5 4 .2 %同源。说明新发现的眼镜王蛇 c DNA是一条长链 α- NT基因。

20种蛇毒膜毒素同源蛋白质等电点的理论确定

本文根据蛇毒膜毒素(MT)蛋白的一级结构,采用一个数学模型并辅以自行设计的计算机程序,从理论上确定20种MT的等电点。经同源性分析结果表明,这些蛋白质在一级结构上越相似,其等电点也愈接近。

蛇毒神经毒素的放射性碘化标记

目前,生物科学的发展非常迅速,随着对各种生物大分子的深入研究,放射性同位素标记技术显得更为重要,几乎所有的生命科学都涉及到这一技术的应用。蛇毒神经毒素是一种小分子量蛋白质,用^(125)I标记后可作为研究烟碱受体的一种示踪物。碘化掺入蛋白质目前使用得最多的方法是氯胺T法。

中华眼镜蛇毒膜毒素对荷瘤小鼠S_(180)细胞增殖和Bcl-2表达的影响

目的:探讨蛇毒膜毒素(CTX)对移植性肿瘤的抑制及其对肿瘤细胞Bcl-2表达的影响。方法:选取ICR小鼠48只,随机分为四组,在各组小鼠右腋皮下接种S180肉瘤细胞,3d后各实验组小鼠分别腋下注射CTX0.8 mg/kg、0.4 mg,/kg、0.2 mg/kg各0.1 mL,连续10 d。分析统计荷瘤小鼠的体重变化和肿瘤抑制率,并通过核仁组织区银染技术(AgNOR)和bcl-2蛋白的免疫组化实验,探讨CTX对体内肿瘤细胞生长和增殖的影响。结果:CTX各剂量组荷瘤小鼠的平均瘤重和瘤/体比值与对照组相比显著地减少(P<0.01),并有明显的剂量反应关系;CTX对体内S180肿瘤细胞的核仁形成区有明显的抑制效应,底、中、高剂量组的AgNOR数(3.693、2.578、1.042)均比对照组(x=3.858)明显减少,且随着CTX处理的浓度越大,AgNOR的数目也越少(P<0.05,P<0.001);对照组肿瘤细胞的bcl-2蛋白表达强烈,经CTX处理后,bcl-2蛋白表达减弱或被完全抑制。结论:CTX对荷瘤小鼠体内肿瘤细胞生长的抑制作用,可能是通过抑制rDNA基因的活性和干扰bcl-2蛋白的表达,从而干扰和阻断肿瘤细胞的增殖。

蛇毒α-神经毒素的同源模建

利用生物信息学的方法分析蛇毒α-神经毒素蛋白的一级结构序列信息及空间结构,并利用同源建模建立了该蛋白的三维结构,同时分析该蛋白功能区域、位于作用表面的氨基酸分布特点,如所带电荷、极性等。由于在蛋白质结构数据库(PDB)中无此蛋白的晶体结构信息,因此以上预测及分析的结构信息,为该蛋白的理论研究和实验设计提供了重要的参考。

β-蝮蛇毒素对蟾蜍交感神经节突触传递的影响

β-蝮蛇毒素(β-agkistrodotoxin简写β-AgTX)对骨胳肌神经肌肉接头的作用已有实验分析,本文则观察了β-AgTX对蟾蜍交感神经节胆碱能性和非胆碱能性突触电位的作用。结果表明,β-AgTX对胆碱能性快兴奋性突触后电位(f-EPSP)和由压力微量注射ACh产生的ACh电位快成分有可逆性抑制作用,且对f-EPSP的幅值抑制率明显大于对ACh电位的抑制率,方差分析显示β-AgTX对f-EPSP和对ACh电位的抑制之间的差异显著(P<0.01)。β-AgTX对非胆碱能性迟慢兴奋性突触后电位(1s-EPSP)无明显作用。本结果提示β-AgTX可能是通过抑制节前神经末梢释放AGh的突触前机制和占据突触后N型胆碱能受体影响ACh的作用之突触后机制,抑制蟾蜍交感神经节的胆碱能性传递过程。

蝮蛇毒素R3晶型0.28nm分辨率结构

蝮蛇毒素(agkistrodotoxin)是从江浙蝮蛇毒液中提取的一种磷脂酶A2型的突触前神经毒素.在碱性的条件下培养出了该毒素新晶型(R3)晶体.用X射线晶体学分子置换方法测定了该晶体0.28 nm分辨率结构.经初步修正后模型晶体学R因子降到0.23，立体化学合理.对蝮蛇毒素R3晶型与其它晶型进行了结构比较.结果表明，蝮蛇毒素分子界面识别部位的一个独特疏水区在各种晶型晶体堆积中均起主要作用，对该疏水区可能的生物学功能进行了讨论.

若干蛇毒蛋白的结构生物学研究

以本研究组较有研究特色的五种蛇毒蛋白家族为线索,简要综述了蛇毒金属蛋白酶、蛇毒丝氨酸蛋白酶、蛇毒crisp蛋白、蛇毒磷脂酶A2及蛇毒神经毒素等蛋白家族有关结构生物学研究的结果、现状及进展.强调了蛇毒蛋白研究中蛇毒糖蛋白的结构生物学研究、超高分辨率晶体学研究及与蛇毒蛋白相关的复合物结构生物学研究的重要性.

蛇毒酶制剂出血毒试验方法比较

使用不同稀释度的蛇毒毒素，等体积注射于大鼠背部皮下、皮内和小鼠背部皮下，１８～２４小时剥皮观察比较动物皮下出血程度，经统计学处理，小鼠背部皮下注射对检查出血毒最敏感。选用小鼠背部皮下注射０．２ｕ蛇毒酶成品、半成品，１８～２４小时剥皮观察皮下瘀血或瘀斑，发现４２批成品中８８．１％未见皮下瘀血，２４批半成品７５％未见皮下瘀血。说明选用小鼠背部皮下注射０．２ｕ蛇毒酶来限量检查出血毒的方法是可取的。

蝮蛇毒联合加温对白血病细胞株的杀灭作用

应用细胞集落培养技术,定量观察浙江蝮蛇毒联合加温,对正常人骨髓细胞粒单集落形成和白血病细胞株HL60、K562、U937集落形成能力的影响。结果表明,单纯加温42℃45分钟与联合蝮蛇毒素0.001 mg/L加热42℃45分钟时,白血病细胞株集落的生存率HL60分别为18.7％与0;K562为30.7％与2.1％,两者差异比较P<0.001;U937为43.3％与37.8％P<0.05;在联合处理的条件下正常骨髓细胞集落生存率尚有50.9％。研究证实,浙江蝮蛇毒可明显地选择性增强加温对白血细胞株的杀灭作用。

眼镜蛇神经毒素药理作用实验研究进展

眼镜蛇毒的干物质中90%以上是蛋白质,是其毒性和生物学活性的主要成分。其中蛇神经毒素可影响疼痛、学习记忆、药物奖赏等多种生物学功能,其镇痛作用具有高效、量小、无成瘾性、不良反应少等特点,是一种新型的镇痛药物。此外,眼镜蛇毒在抗类风湿、抗药物依赖以及抗肿瘤等方面也显示了较好的药理作用。通过多种方法降低蛇神经毒素的毒性,可进一步提高其药理活性,并有可能扩大应用范围,是一种非常有临床应用价值的物质。

Purification and Characterization of Cytotoxins from Agkistrodon acutus Venom and Their Anticancer Activity

Aim To investigate the anticancer activity of two new cytotoxins from thevenom of Agkistrodon acutus. Methods The venom was isolated by FPLC column chromatography consistingof DEAE Sepharose FF and Source 30S. The cytotoxic activity on tumor cells was detected by MITmethod. Purity and molecular weight were determined by SDS-PAGE (silver staining). Their stabilitiesto temperature and pH were also detected. Results Two pure cytotoxins named ACTX-6 and ACTX-8 wereobtained. Their molecular weights are 98 kDa and 27 kDa, respectively. ACTX-6 consists of twosubunits bonded together by disulfide bonds. Conclusion ACTX-6 and ATCX-8 have highest inhibitoryactivity on lung cancer cell A549. ACTX-6 is stable to heat while ACTX-8 not. ACTX-6 is stablebetween pH 7-9 and ACTX-8 between pH 6 - 9.