蛇毒神经生长因子抗肿瘤体外实验研究

目的 :探讨蛇毒神经生长因子 (NGF)对人肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法、台盼蓝拒染法和集落形成作为观察指标 ,以NGF 5 ,10 ,15 ,2 0 μg /ml处理 4种人肿瘤细胞 (人白血病细胞株K 5 6 2、人胰癌细胞株JF 30 5 ,人肺癌细胞株AGZY 83a和人胃癌细胞株MG 80 3) ,选用不同作用时间 ,分别观察NGF对上述细胞的影响。阿霉素 (Adr)为阳性对照药。结果 :NGF对 4种人肿瘤细胞均有细胞毒性作用 ,K 5 6 2和JF 30 5比后两者显示出更好的量效关系 (P均 <0 .0 5 )。NGF处理 2 4 ,4 8和 96h后K 5 6 2和JF 30 5细胞的生长均受到抑制 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。并有显著的剂量效应关系。处理JF 30 5细胞 2 4 ,4 8和 96h ,NGF的半抑制浓度 (IC50 ) ,时间 效应关系亦明显 ;NGF对K 5 6 2细胞的生长抑制作用以 4 8h为显著。NGF还可显著抑制JF 30 5细胞的集落形成 ,并有明显的量效关系 (P <0 .0 1) ,其IC50 为 12 .86 μg/ml。 结论 :NGF对 4种人肿瘤细胞均具有细胞毒性和生长抑制作用 ,对K 5 6 2、JF 30

蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤功能修复的时效作用研究

目的 :研究蛇毒神经生长因子 (SNGF)对大鼠坐骨神经损伤修复的时效作用。方法 :建立大鼠坐骨神经钳夹模型 ,局部滴加药物和术后肌注 90 0Bu/kg的SNGF ,分别给药 14、2 1和 2 8d。通过展爪反射、趾间距、脊髓诱发电位(SEP)、运动诱发电位 (MEP)观察 ,评定蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤修复的时效作用。结果 :蛇毒NGF以90 0Bu/kg剂量 ,每天于伤侧肌肉注射一次 ,分别给药 14、2 1、2 8d均有促进伤侧神经功能恢复的作用 ,且具有一定的时效关系 ,给药 2 1、2 8d组治疗效果较给药 14d组效果好 (P <0 .0 5 )。 2 1d组与 2 8d组间无明显差别。结论 :SNGF对大鼠坐骨神经损伤的修复作用具有一定的时效作用。

蛇毒神经生长因子对大鼠视神经夹伤保护的电镜观察

目的研究蛇毒神经生长因子在视神经损伤后对视网膜神经节细胞的保护作用。方法将Wistar大鼠40只随机分为实验对照组和实验治疗组。制作实验性视神经夹伤模型,用头部宽1mm的微型血管夹夹伤大鼠右眼视神经后,实验治疗组向伤眼玻璃体腔内注入蛇毒神经生长因子100BU(0.025mL)。实验对照组向伤眼玻璃体腔内注入0.025mL平衡盐液。于损伤后第3d、7d、14d、30d、60d取材,用透射电镜观察不同时间段各组视网膜形态学变化。结果电镜下大鼠视网膜改变:实验治疗组和对照组电镜下均可见坏死和凋亡。伤后14d,实验治疗组视网膜微管数目比实验对照组较多,排列比较整齐。结论在视神经损伤早期,蛇毒神经生长因子能减轻视神经夹伤后微管的损坏,提高视网膜神经节细胞的存活数量,对视网膜神经节细胞有明显的保护作用。

蛇毒神经生长因子对体外培养鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的研究蛇毒神经生长因子（venom nerve growth factor，vNGF）对离体培养的视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）的存活和轴突再生的影响。方法采用新生大鼠视网膜神经细胞体外原代培养技术，加入不同浓度的vNGF，通过检测细胞的活力选择一个最佳浓度进行培养，行抗Thy-1．1免疫细胞化学染色，观察RGCs在体外的存活时间,比较实验组和对照组的RGCs个数、胞体直径和轴突长度。结果vNGF的最佳浓度是80μg.L，用该浓度作用于细胞，实验组与对照组细胞存活时间分别为13～14d和7～8d，轴突长度分别为（111.78±10.65）μm和（78.73±8.23）μm。阳性细胞个数分别为（224.23±3.83）个和（182.47±2.79）个。结论vNGF能促进体外视网膜神经细胞和RGCs的存活以及轴突的伸长，有视神经保护作用。

蛇毒神经生长因子抑瘤作用的实验研究

目的 :探讨神经生长因子 (NGF)对小鼠荷腹水瘤H2 2细胞的抑制作用。方法 :用不同剂量 (5 ,10 ,2 0 μg/kg)的NGF对荷腹水瘤H2 2小鼠进行治疗 ,观察其对小鼠腹水瘤H2 2的影响。利用放射免疫测定法 (RIA)测定荷瘤小鼠血浆内皮素 (ET)含量。结果 :NGF大剂量组对小鼠腹水瘤H2 2有明显的抑制作用 (抑瘤率 4 6 .36 % )。荷腹水瘤H2 2小鼠ET水平明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,大剂量组小鼠ET含量明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :NGF对小鼠腹水瘤H2 2细胞的生长具有抑制作用 ,可能与其降低荷瘤鼠ET水平有关。

蛇毒神经生长因子研究新进展

神经生长因子是目前研究最为清楚的一种神经营养因子。NGFcDNA已完成测序,NGF编码基因的转录本已被鉴别,可制备一种活化的重组NGF。NGF能促进神经元和周围神经细胞分化,维持其正常功能,减轻和改善其损伤,可诱导血管内皮细胞促进血管生成,促进溶酶体数目增多并提高所含水解酶活性,还具有抗肿瘤作用。

蛇毒神经生长因子对鼠视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响

目的通过对视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）微管相关蛋白-1B（microtubule associated protein-1B,MAP-1B）的研究,观察蛇毒神经生长因子（venom nerve growth factor,vNGF）在鼠视神经夹伤后对RGCs的保护作用。方法将Wistar大鼠40只随机分为实验对照组、实验治疗组,每组20只。制作视神经夹伤模型,用头部宽1mm的微型血管夹夹伤大鼠右眼视神经后,实验治疗组向右眼玻璃体内注入vNGF 100 BU（0.025mL）。实验对照组向右眼玻璃体内注入0.025mL平衡盐液。2组的左眼均未做任何处理,作为正常对照组。于损伤后3d、7d、14d、30d、60d取材,在光镜下计数RGCs,透射电镜观察不同时间段各组视网膜形态学变化,并进行MAP-1B免疫组织化学染色分析。结果光镜下,伤后3～30d实验治疗组的RGCs数目高于实验对照组,差异有显著统计学意义（P〈0.01）,伤后2组RGCs数目均比正常对照组少,差异有显著统计学意义（P〈0.01）。伤后60d,实验治疗组与实验对照组之间的RGCs数目差异无统计学意义（P〉0.05）,实验治疗组、实验对照组与正常对照组差异有显著统计学意义（P〈0.01）。电镜下,伤后14d实验治疗组视网膜微管数目比实验对照组多,排列也较整齐。免疫组织化学结果：实验治疗组2周内MAP-1B表达逐渐增强,1个月时明显减弱;实验对照组3d时有MAP-1B表达,到2周时表达明显减弱。结论在视神经损伤早期,vNGF能减轻视神经夹伤后微管的损坏,提高MAP-1B的表达强度,提高RGCs的存活数量,对RGCs有明显的保护作用。

蛇毒神经生长因子对鼠视网膜神经节细胞GAP-43表达的影响

目的通过对视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGC）生长相关蛋白-43（growth associated protein-43,GAP-43）的研究,观察蛇毒神经生长因子（venom nerve growthfactor,vNGF）在鼠视神经横断伤后对RGC的保护作用。方法将24只SD大鼠随机平均分为实验对照组、实验治疗组。各组右眼制作视神经横断伤模型,实验治疗组向玻璃体腔内注入0.8 g.L^-1vNGF 0.025 mL,实验对照组向玻璃体腔内注入0.025 mL平衡盐液。左眼未做任何处理,作为正常对照组。于损伤后7 d、14 d取材,应用病理图像分析计数RGC及观察大鼠视网膜神经纤维层厚度变化,进行GAP-43免疫组织化学染色分析。结果光镜下,伤后7-14 d,实验治疗组大鼠RGC数目明显高于实验对照组,有非常显著性统计学差异（P〈0.01）,2组均比正常对照组RGC数目下降,有非常显著性统计学差异（P〈0.01）。免疫组织化学结果：实验治疗组7 d时GAP-43表达明显,14 d时稍减弱;实验对照组7 d时有GAP-43表达,但较实验治疗组弱,到14 d时表达明显减弱。结论在视神经横断伤后,vNGF能增加并延长GAP-43的表达强度,提高RGC的存活数量,对RGC有明显的保护作用。

蛇毒神经生长因子的应用研究进展

神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是神经营养因子（neurotrophic factors）家族的典型代表。神经营养因子家族成员众多，除NGF外，还有成纤维细胞生长因子、睫状神经营养因子、白血病抑制因子、胶质源神经营养因子、胰岛素样生长因子等。它们在氨基酸序列上具有高度的同源性，有相似的生物学活性。

蛇毒神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞GAP-43表达的影响

目的探讨蛇毒神经生长因子(vNGF)对大鼠脑缺血再灌注的保护作用。方法选用体重220～280g的健康雄性Wistar大鼠,分为假手术组、对照组及vNGF组(再分为25U、50U、100U3个剂量组)。所有大鼠侧脑室注药7d后处死。大鼠模型分别观察:按Longa法进行神经功能评分;免疫组化法检测GAP-43的表达。结果神经功能评分:假手术组神经功能评分为0分,其余各组均出现神经功能缺损,vNGF组大鼠评分低于对照组(P<0.05)。免疫组化:除假手术组外各组GAP-43均有表达。vNGF组的表达较对照组高(P<0.05)。vNGF组25U组GAP-43表达增加,50U组表达继续增高,100U组表达最高。结论在大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后,vNGF能增强GAP-43的表达,对神经细胞有明显的保护作用。

蛇毒神经生长因子在兔眼内的药代动力学研究

目的 研究蛇毒神经生长因子 (venomnervegrowthfactor ,v_NGF)兔眼结膜下及玻璃体内注射两种给药方式 ,不同时间内玻璃体中的药代动力学行为。方法 蛇毒神经生长因子经13 1I标记 ,在注射入兔眼结膜下和玻璃体腔后测定玻璃体内 1h、3h、6h、12h、2 4h、48h的13 1I每分钟计数率 (CPM)。结果 经分析表明 ,结膜下注射v_NGF后兔眼玻璃体内药物浓度在 6h达高峰 ;而玻璃体内注射在 1h达高峰并能在眼内达到较高的药物浓度及维持较长时间。结论 玻璃体内注射v_NGF后 ,该药在眼内有良好的分布。

广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子基因在NIH3T3细胞中的表达

目的:构建广西眼镜蛇蛇毒神经生长因子(NGF)基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NGF,并在NIH3T3细胞中进行表达。方法:采用RT-PCR的方法扩增蛇毒NGF的基因片段,将目的基因、真核表达载体pcDNA3.1(-)分别酶切后回收,连接、转化而构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-NGF,经酶切和测序对重组体进行鉴定。利用脂质体Lipofectamine～(TM) 2000方法转染NIH3T3细胞,对阳性克隆裂解上清中NGF的表达用SDS-PAGE、Western-blot的方法检测。结果:重组载体经酶切、测序分析,插入的基因片段为表达蛇毒NGF的基因,NGF基因在NIH3T3细胞中获得表达。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-NGF,并检测出在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步开展NGF基因治疗神经系统的疾病奠定了实验基础。

蛇毒神经生长因子对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用蛇毒神经生长因子对Caspase-3表达的影响。方法将55只成年SD雄性大鼠随机分为蛇毒神经生长因子组(A组)、生理盐水组(B组)、假手术组(C组),按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分评价神经损伤程度及神经功能恢复情况;脊髓损伤后不同时间点(6 h、1 d、3 d、7 d、14 d)取材,HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-3阳性细胞的表达,来比较分析两组的差异性。结果 HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组;BBB评分A组相对B明显提高,差异有显著性意义(P<0.05)。A组和B组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达,神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均为B组>A组(P<0.05)。结论蛇毒神经生长因子能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡,能改善脊髓损伤后的功能表现。

蛇毒神经生长因子对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的神经保护研究

目的探讨玻璃体腔内注射蛇毒神经生长因子，对实验洼视网膜缺血再灌注损伤是否具有神经保护作用。方法采用升高大鼠眼内压的方法，制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型。实验组和对照组分别注入蛇毒神经生长因子和平衡盐溶液，应用图像分析系统计数视网膜神经节细胞和测量视网膜内层厚度，透射电镜观察视网膜超微结构。结果视网膜缺血再灌注开始，实验组大鼠视网膜水肿、视网膜内层厚度变薄和视网膜神经节细胞（RGCs）数目减少较对照组轻，并且实验组于再灌注24h后RGCs数目逐渐增多，48h后视网膜内层厚度逐渐增加。再灌注后168h，对照组大鼠视网膜内层厚度及RGCs数目明显低于实验组，差异显著有统计学意义（P＜0．05）；电镜观察对照组再灌注后24h出现膜盘排列紊乱、变形，神经纤维层内大量的线粒体肿胀、空泡化和RGCs核染色质浓缩、边集，出现凋亡小体，胞浆内细胞器空泡化且大量减少。而实验组膜盘排列尚整齐，RGCs轻度肿胀，胞浆内细胞器较丰富，神经纤维层中的线粒体轻度肿胀，微管结构较清楚。结论通过向大鼠玻璃体腔内注射蛇毒神经生长因子可以减轻视网膜内层的损伤，对实验性视网膜缺血再灌注损伤有神经保护作用。

蛇毒神经生长因子促进周围神经再生的诱发电位观察

目的:研究蛇毒神经生长因子（sNGF）对大鼠坐骨神经损伤后诱发电位的影响,评价蛇毒种经生长因子在促进周围神经再生中的作用。方法:建立大鼠坐骨神经钳夹模型,局部滴加药物和术后肌注sNGF,通过脊髓诱发电位（SEP）、运动诱发电位（MEP）评定,观察坐骨神经修复情况.结果:sNGF治疗可使伤后SEP、MEP提早出现,结论:蛇毒提取的NGF对大鼠坐骨神经损伤修复具有促进作用.

蛇毒神经生长因子对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后微管相关蛋白1B的影响

目的探讨玻璃体腔内注射蛇毒神经生长因子是否对实验性大鼠视网膜缺血再灌注损伤的视网膜中的微管相关蛋白1B有影响而起到神经保护作用。方法采用升高大鼠跟内压的方法，制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型。实验组和对照组分别注入蛇毒神经生长因子和平衡盐溶液，通过免疫组织化学法检测再灌注后不同时间段各组大鼠视网膜组织中微管相关蛋白1B的表达。结果微管相关蛋白1B的表达在实验组于再灌注后6h加强，48h达高峰。而对照组在再灌注后24h增强，96h才达高峰，而且高峰浓度实验组较对照组强（P〈0．01）。结论通过向大鼠玻璃体腔内注射蛇毒神经生长因子可以提高视网膜微管相关蛋白1B的表达而对实验性视网膜缺血再灌注损伤有神经保护作用。

神经生长因子促进骨骼肌间神经纤维恢复的超微结构研究

神经生长因子促进骨骼肌间神经纤维恢复的超微结构研究王占友石玉秀张开（中国医科大学组胚教研室）采用定位、定量、定时方法挫伤大耳白兔右侧坐骨神经，术后实验组动物于神经损伤处局部喷布蛇毒神经生长因子（ＮＧＦ）４００ＢＵ／ｋｇ／日，对照组动物于同部位给予等量...

ERK通路参与蛇毒型神经生长因子诱导的中枢神经保护作用

目的观察经侧脑室给予蛇毒型神经生长因子（vNGF）对脑缺血再灌注损伤后细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase，ERK）表达的影响，探讨外源性vNGF通过影响ERK的表达减轻神经元损伤的可能机理。方法取健康清洁级雄性Wistar大鼠，按随机分组原则分为2d组（n=30）、7d组（n=30）、14d组（n=30）。每个时间点再分为五个亚组vNGF25U、vNGF50U、vNGF100U、生理盐水对照组、以及假手术组，每个亚组6只大鼠。生理盐水对照组和vNGF各亚组大鼠采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注损伤模型，术后各时间点vNGF亚组采用改良的侧脑室置管术法给予相应剂量蛇毒型神经生长因子，生理盐水对照组给予等渗盐水。采用免疫组织化学法测定术后第2d、第7d以及第14d缺血皮质周围和海马CA3／DG区ERK阳性细胞数。结果（1）与对照组相比，经侧脑室给予蛇毒型神经生长因子各组大鼠神经功能明显改善，显示了外源性补充蛇毒型神经生长因子的明显正性干预作用。（2）ERK免疫组织化学结果显示：经侧脑室给予vNGF各亚组ERK阳性细胞在缺血皮质周围和海马CA3／DG区第2d表达为高峰，第7d明显下降，第14d恢复基线水平。与相应时间点对照组相比，呈明显下降趋势。结论局灶性脑缺血再灌注后磷酸化ERK表达增加，NGF可能通过抑制ERK途径而发挥神经保护作用。