蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人肝癌SMMC-7721细胞活力、增殖和迁移的影响

目的:探讨蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人肝癌SMMC-7721细胞活力、增殖和迁移的影响。方法:用不同浓度的Agkih-pin处理肝癌细胞株后,应用MTT法检测细胞活力,应用细胞计数法检测Agkihpin对细胞增殖和迁移的影响。结果:0.207～4.130mg/L浓度的Agkihpin作用SMMC-7721细胞后,与对照组比较,各加药组细胞活力明显下降(P<0.01),细胞活力随Agkihpin浓度增加而减弱(r=-0.81,P<0.05),细胞活力抑制率可达12.2%～46.2%;2.065～4.130mg/L剂量的Agki-hpin对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P<0.05),加药24,48h和72h后增殖抑制率分别为29.4%～88.2%、64.1%～84.6%和4.4%～30.5%,且剂量依赖作用明显(P<0.05);3.089mg/L和4.130mg/L剂量的Agkihpin对SMMC-7721细胞还有一定的杀伤作用,杀伤率分别为20.0%和79.6%;0.207～4.13 mg/L剂量的Agkihpin对人肝癌SMMC-7721细胞的迁移有明显的抑制作用(P<0.01),细胞迁移抑制率可达7.8%～98.0%,且剂量越大抑制作用越明显(r=0.841,P<0.05)。结论:一定剂量的Agkihpin可抑制人肝癌SMMC-7721细胞株的细胞活力、增殖和迁移。

蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin基因的克隆及原核表达

目的构建蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin的原核表达载体,并诱导其表达重组Agkihpin,为将来量产Agkihpin提供方法和依据。方法 RT-PCR法扩增Agkihpin基因,构建重组表达质粒p ET30a(+)-Agkihpin和p EASY-E1-His6-Agkihpin,并转化到BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳观察重组蛋白Agkihpin的表达情况,Western blot检测其特异性。结果成功构建Agkihpin的原核表达载体p EASY-E1-His6-Agkihpin和p ET30a(+)-His6-Agkihpin,并利用p EASY-E1-His6-Agkihpin首次在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出分子量约为30k D的His6-Agkihpin重组融合蛋白。结论首次实现了His6-Agkihpin重组融合蛋白在原核系统中的高效表达,为Agkihpin将来量产提供了方法和实验依据。

Agkihpin对人肝癌SMMC-7721细胞COX-2、MRP1和E-CD表达的影响

目的探讨蛇毒精氨酸酯酶(Agkihpin)影响人肝癌SMMC-7721细胞活力、增殖和迁移的机制,为肝癌的治疗提供新的思路。方法取对数生长期SMMC-7721细胞随机分为8组,分别用质量浓度为0.207～4.130 g/mL的Agkihpin处理72 h,应用免疫细胞化学、Western blotting、RT-PCR法检测环氧合酶-2(COX-2)、表皮钙黏素(E-CD)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)蛋白表达和基因转录水平,分析三指标之间的关系。结果与未行Agkihpin处理者比较,Agkihpin处理的SMMC-7721细胞COX-2基因转录、蛋白表达均降低(P<0.01),并呈一定的浓度依赖效应;COX-2与E-CD的表达和转录均呈负相关,MRP1与E-CD的表达和转录均呈负相关,COX-2与MRP1的表达和转录均呈正相关。结论 Agkihpin可通过下调MRP、COX-2表达及上调E-CD表达抑制人肝癌SMMC-7721细胞的活力、增殖和迁移,有望用于提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性、逆转肝癌耐药细胞的多药耐药表型、提高肝癌患者术后生存率、抑制肝癌细胞的浸润和转移。