快速PCR方法在蛇类药材真伪鉴别中的应用

为优化获得一种准确、快速、高效鉴别药典所载蛇类药材（乌梢蛇，金钱白花蛇，蕲蛇）真伪品的方法。该研究以蛇类药材经典PCR鉴定方法为基础，采用碱裂解法提取基因组总DNA，加人特异性PCR引物，采用两步法进行PCR扩增，从而对蛇类药材及其混淆品进行鉴别。通过对影响PCR反应时间的退火温度、变性温度、退火时间、变性时间、循环次数等因素进行优化，并对不同型号PCR仪和Taq酶进行考察，分别获得乌梢蛇、金钱白花蛇、蕲蛇快速PCR反应程序。在PCR产物中加入SYBRGreenI染料，正品显示出明亮绿色荧光，而混淆品不显示荧光。所建立的蛇类药材快速PCR真伪检测方法可在30—45min完成，为蛇类药材现场快速鉴定提供技术支持。