蛇葡萄素通过调节JAK2/STAT3信号通路减轻OGD/R诱导的神经元损伤

目的探讨蛇葡萄素(AMP)对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的神经元损伤的影响及其作用机制,为新生儿缺氧缺血性脑损伤的研究奠定基础。方法分离并体外培养新生SD大鼠神经元细胞,分为5组:对照组(AMP浓度为0μmol/L)、OGD/R组、AMP低剂量组(OGD/R处理+AMP 20μmol/L)、AMP高剂量组(OGD/R处理+AMP 30μmol/L)、JAK2/STAT3激活剂组(OGD/R处理+AMP 30μmol/L+Coumermycin A110μmol/L)。CCK-8法检测不同处理组细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测培养基中LDH活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验检测白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;Western blotting检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(C-caspase-3)、酪氨酸激酶2(JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、信号传导及转录活化因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)表达情况。结果与AMP浓度为0μmol/L比较,AMP浓度为5~30μmol/L时,细胞活力比较差异无统计学意义(P>0.05),AMP浓度为40μmol/L细胞活力明显下降(P<0.05)。与对照组比较,OGD/R组细胞活力、SOD、IL-10、Bcl-2水平明显下降,LDH活性、细胞凋亡率、ROS荧光强度、MDA、IL-6、TNF-α、Bax、C-caspase-3、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3水平明显升高(P<0.05)。与OGD/R组比较,AMP低、高剂量组神经元细胞活力、SOD、IL-10、Bcl-2水平上升,LDH活性、细胞凋亡率、ROS荧光强度、MDA、IL-6、TNF-α、Bax、C-caspase-3、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3水平下降(P<0.05),而JAK2/STAT3激活剂可逆转AMP对OGD/R诱导的神经元细胞损伤的保护作用。结论AMP通过减少氧化应激和炎症反应减轻OGD/R诱导的神经元细胞损伤,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路磷酸化有关。

蛇葡萄素通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导人宫颈癌细胞SiHa自噬

目的研究蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)诱导人宫颈癌细胞SiHa发生自噬及其可能的作用机制。方法单丹磺酰胺(monodansylcadaverine,MDC)染色法观察AMP对SiHa和C-33A细胞自噬的影响;透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察经AMP干预的SiHa和C-33A细胞超微结构的变化;自噬双标腺病毒转染(mRFP-GFP-LC3)法检测SiHa细胞自噬流强度;Western blot法对SiHa细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、Beclin-1、Atg13及PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白的表达情况进行检测。结果MDC染色结果显示,随着AMP浓度的升高,代表自噬小体的亮绿色逐渐增多;TEM实验结果表明,与空白对照组相比,AMP组细胞线粒体嵴溶解消失,同时可见自噬小体和自噬溶酶体;mRFP-GFP-LC3实验结果提示,随着AMP浓度的升高,细胞内自噬小体和自噬溶酶体增多,提示自噬流增强;同时发现LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg13蛋白表达上调,P62、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达下调,表明AMP可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导SiHa细胞发生自噬;加入3-MA后,与AMP组相比,3-MA和AMP联合组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的表达水平上升,提示自噬被抑制后,PI3K/AKT/mTOR信号通路被逆转。结论AMP可诱导SiHa细胞发生自噬,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活有关。

蛇葡萄素对人肺癌GLC-82裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 :为了进一步研究蛇葡萄素体内抗肿瘤作用 ,我们进行了人肺癌GLC 82裸小鼠移植瘤的抑瘤实验研究。方法 :人肺癌GLC 82细胞接种于裸鼠腋窝建立移植模型。荷瘤BALB/C裸鼠随机分成 6组 ,蛇葡萄素以 3个剂量腹腔给药。观察肿瘤体积、相对肿瘤体积、瘤重、相对肿瘤增殖率以及肿瘤生长曲线 ,以此评价蛇葡萄素的抗瘤作用。结果 :2 5 0mg/kg蛇葡萄素对裸鼠移植瘤的抑制率 ,二次实验结果分别为 35 5 % (P <0 0 1)和 37 1% (P<0 0 1) ,相对肿瘤增殖率则分别为 5 5 2 4 % (P <0 0 1)和 5 7 71% (P <0 0 5 )。结论 :蛇葡萄素对人肺癌GLC 82裸鼠移植瘤具有显著的抑制作用。

蛇葡萄素的抗肿瘤作用研究

目的:研究蛇葡萄素在体内外对肿瘤生长的抑制作用。方法:用MTT法测定蛇葡萄素对人鼻咽癌HK-1细胞和人乳腺癌MCF-7细胞的体外细胞毒实验;观察蛇葡萄素对C57BL/6小鼠移植性B16黑色素瘤的体内抑瘤作用;用流式细胞仪测定含药小鼠血清对B16细胞周期及细胞增殖的影响。结果:蛇葡萄素对人鼻咽癌HK-1细胞及人乳腺癌MCF-7细胞的IC50分别为50.0μg/ml及79.4μg/ml。在100mg/kg、150mg/kg及200mg/kg的剂量下,与生理盐水对照组比较,蛇葡萄素对C57BL/6小鼠移植性B16黑色素瘤的抑瘤率分别为25.54%(P<0.05)、32.03%(P<0.01)及54.55%(P<0.001);60mg/kg氮烯咪胺(阳性对照组)的抑瘤率为59.31%,与200mg/kg的药物组比较无显著性差异(P>0.05);在150mg/kg及200mg/kg蛇葡萄素腹腔给药后10min的小鼠含药血清的作用下,B16细胞的G1期和G2/M期细胞数增高,S期细胞数减少,分裂增殖指数分别降低19.1%及21.7%。结论:蛇葡萄素对体外肿瘤细胞HK-1和MCF-7的增殖,及体内小鼠移植性B16黑色素瘤的生长均具有显著的抑制作用。

蛇葡萄素的抑菌作用研究

目的 对瑶族藤茶中主要成分蛇葡萄素的体外抗菌活性进行评价。方法 以两倍稀释法测定了蛇葡萄素对五个实验菌株的抑菌效果,并与相同实验条件下盐酸黄连素的抑菌效果相比较,另外还研究了培养基pH值和菌液浓度对蛇葡萄素抑菌作用的影响。结果 蛇葡萄素对实验菌株有较好的抑菌作用,其抑菌作用较盐酸黄连素相当或略强。菌液浓度增高,其MIC和MBC随之增高,对试验菌株,酸性、碱性条件下蛇葡萄素的抑菌作用显著增强。

蛇葡萄素体内外对小鼠B16黑色素瘤侵袭和转移的抑制作用

目的 :研究蛇葡萄素对B16小鼠黑色素瘤体内外抗侵袭和转移的作用。方法 :B16细胞由尾静脉注入C5 7BL/ 6小鼠体内建立实验性肺转移模型 ,蛇葡萄素以 3个剂量从接种瘤细胞前一天腹腔给药 ,连续 18d ,于停药后第 2天观察肺转移瘤灶数。B16细胞经蛇葡萄素处理 3d ,用具有聚碳酸酯和重建基底膜 (Matrigel)的Tran swell小室侵袭模型 ,研究药物处理后细胞侵袭、趋化运动、粘附能力的改变。结果 :剂量为 15 0 ,2 0 0 ,2 5 0mg·kg-1的蛇葡萄素可抑制小鼠肺转移瘤灶形成 ,与溶剂对照组比 ,抑制率分别为 30 .97% ,4 0 .5 8% ,6 1.16 % (P <0 .0 5 )。经 2 0 ,4 0 ,80 μmol·L-1各浓度蛇葡萄素处理后 ,对B16细胞侵袭人工基底膜的抑制率分别为 36 .0 6 % ,5 9.5 8% ,79.0 9% (P <0 .0 1) ;对细胞的趋化运动抑制率分别为 5 1.5 9% ,5 6 .5 1% ,6 6 .75 % (P <0 .0 1) ;显著降低B16细胞与基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白及Matrigel的粘附作用。 结论 :蛇葡萄素具有抑制黑色素瘤的侵袭和转移的作用。

蛇葡萄素对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的观察蛇葡萄素(APS)体内抗人胃癌作用。方法采用人胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分成5组,APS三个剂量连续灌胃给药10天,观察肿瘤体积、相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率(T/C)、瘤重、抑瘤率(IR),以此评价APS的抗肿瘤作用。结果在人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤的抑瘤实验APS600mg/kg、300mg/kg、150mg/kg灌胃给药10天,其相对肿瘤增殖率为52.84%、71.12%、62.14%,其抑瘤率分别为38.8%、27.5%、27.3%。结论APS对人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠移植瘤有明显的抑制作用。

蛇葡萄素微囊的制备

以乙基纤维素(EC)为囊材,采用溶剂挥发技术制备缓释微囊,以二氯甲烷为溶剂,采用适当配比的聚乙烯醇(PVA)和十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液为分散介质,制得白色微囊。在此过程中,内相聚合物浓度、投药量以及药物与分散相比例对包囊率有显著影响。经均匀设计法确定了优选工艺条件为:EC=6.0％,蛇葡萄素=0.2g,药物:EC=1:3,药物:分散介质=1:1,SDS:PVA=1:2。

蛇葡萄素与苯并芘合用对大鼠肺组织内CYP和GST基因表达的影响

蛇葡萄素（ampelopsis），又名二氢杨梅素（dihydromyrice—tin）、双氢杨梅素等，为一多酚羟基黄酮醇化合物，存在于葡萄科、杨梅科、藤黄科等植物中，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等作用。苯并芘是烟草和其他多种环境致癌物中的可导致肺癌、乳腺癌、肝癌等肿瘤的主要致癌物质。

蛇葡萄素脂质体的制备研究

目的:优选蛇葡萄素脂质体的处方和制备工艺,并评价其质量。方法:采用薄膜-超声法制备蛇葡萄素脂质体及冻干粉,以包封率、表面形态和粒径为检测指标,利用均匀试验法优选出制备蛇葡萄素脂质体的最佳工艺条件。用显微镜法观察其形态,粒度测定仪测量粒径和表面电荷。采用透析法测定包封率和渗漏率,紫外分光光度法测定蛇葡萄素含量。结果:脂质体呈典型单室,近球型,大小相近,分散均匀,平均粒径为(258.2±51.2)nm,表面电荷19.0 mV。包封率达到62.3%,磷脂氧化指数为0.83%。结论:该脂质体处方和制备工艺稳定可行。

RP-HPLC法测定不同药用部位不同采收期藤茶中蛇葡萄素的含量

目的:运用RP-HPLC法测定不同采收期藤茶根、茎和叶中蛇葡萄素的含量。方法:使用ODS色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-水-磷酸(25:75:0.1),流速1.0ml/min,检测波长289 nm。结果:藤茶叶中蛇葡萄素含量最高,茎次之,根中最低;4月至5月间采集的藤茶中蛇葡萄素含量最高。

蛇葡萄素与苯并芘合用对大鼠肝组织内CYP和GST基因表达的影响

目的观察蛇葡萄素与苯并芘合用对♂SD大鼠肝组织内CYP(cytochrome P450,CYP)和GST(glutathione S-transferase,GST)基因表达的影响。方法♂SD大鼠,蛇葡萄素(二氢杨梅素)250、500mg·kg-1,每日1次连续灌胃15d,d15模型组和2个给药组分别腹腔注射(ip)苯并芘100mg·kg-1。用逆转录-实时荧光定量PCR法检测肝组织内的CYP基因CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1和GST基因GST-m1、GST-pi的表达情况。结果与空白组相比,苯并芘组(模型组)可明显诱导肝组织内的CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1基因表达(P<0.01),分别是空白对照组的121倍、11倍、684倍,对谷胱甘肽-S转移酶基因GST-m1和GST-pi的表达有抑制趋势,分别是空白对照组的0.79倍和0.82倍;蛇葡萄素(二氢杨梅素)组+苯并芘组可明显诱导肝组织内的CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1基因表达(P<0.01),分别是空白对照组的189和289倍、16.9和44.5倍、914和804倍,蛇葡萄素500mg.kg-1+苯并芘组明显诱导谷胱甘肽-S转移酶基因GST-m1和GST-pi的表达,分别是空白对照组的2.18倍(P<0.01)和2.12倍(P<0.05)。与苯并芘组(模型组)相比,蛇葡萄素250mg·kg-1+苯并芘组和蛇葡萄素500mg·kg-1+苯并芘组不影响CYP1B1的基因表达,但明显诱导CYP1A1的基因表达,分别是苯并芘组(模型组)的1.56倍(P>0.05)和2.39倍(P<0.05);明显诱导CYP1A2的基因表达,分别是苯并芘组(模型组)的1.53倍(P<0.05)和4.04倍(P<0.05);蛇葡萄素500mg.kg-1+苯并芘组明显诱导谷胱甘肽-S转移酶基因GST-m1和GST-pi的表达,分别是苯并芘组(模型组)的2.78倍(P<0.01)和2.57倍(P<0.05)。结论与苯并芘合用,蛇葡萄素(二氢杨梅素)可明显诱导CYP1A1、CYP1A2基因和谷胱甘肽-S转移酶基因GST-m1和GST-pi的表达。对CYP1B1基因无影响。表明蛇葡萄素与苯并芘合用可加速苯并芘代谢形成非致癌物而解毒和加速排泄。提示蛇葡萄素可对抗苯并芘的致癌作用。

蛇葡萄素对2型糖尿病大鼠NO／NOS水平及抗氧化能力的影响

目的研究蛇葡萄素对2型糖尿病大鼠的降糖作用及NO/NOS水平和抗氧化能力的影响。方法采用高糖高脂饲料饲养大鼠1个月,再一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素,建立2型糖尿病大鼠模型。观察高、低剂量蛇葡萄素对糖尿病大鼠的降糖作用,并检测各组动物血清NO/NOS及肾脏组织SOD,MDA,GSH-Px含量。结果高、低剂量蛇葡萄素均能降低2型糖尿病大鼠的血糖水平,抑制糖尿病大鼠血浆NO、iNOS水平,降低肾脏组织MDA含量,提高SOD,GSH-Px活性。与模型组比较差异显著(P<0.05或0.01)。结论蛇葡萄素能够降低2型糖尿病大鼠血糖,增强糖尿病大鼠机体抗氧化作用及抑制糖尿病大鼠血清NO/iNOS水平。

核磁共振研究大叶蛇葡萄提取物蛇葡萄素

通过质子检测的１３Ｃ－１Ｈ异核多键化学位移相关谱、１３Ｃ－１Ｈ异核多量子化学位移相关谱和质子相敏交换谱等ＮＭＲ二维方法确定了传统中草药大叶蛇葡萄提取物的结构为蛇葡萄素（３，３’，４’，５，５’，７－六羟基双氢黄酮醇），得到了更加准确的１Ｈ和１３Ｃ化学位移归属，并观测和讨论了这一体系中溶剂二甲亚砜的质子化现象．

藤茶蛇葡萄素抗人胃癌细胞作用的实验研究

目的:探讨藤茶蛇葡萄素的体外抗肿瘤作用。方法:采用MTT法、生长曲线法、细胞集落形成法观察蛇葡萄素对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用。结果:蛇葡萄素能明显抑制体外培养的SGC-7901细胞的生长,MTT法IC50为11.19μg/mL;细胞生长曲线法提示其对SGC-7901细胞的生长也有明显的抑制作用;集落形成法,当药物浓度在9.90μg/mL以上时抑制率为100%,当药物浓度为6.60μg/mL时抑制率为72.3%,当药物浓度为4.40μg/mL时抑制率为36.0%。结论:蛇葡萄素对体外SGC-7901细胞的生长有明显的抑制作用。

蛇葡萄素(AMP)对SPC-A-1细胞增殖的抑制作用

目的检测蛇葡萄素(Ampelopsin,Amp)对人小细胞肺癌细胞(SPCA-1)的细胞毒性,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT比色法检测Amp(12.5～200μg/ml)对SPCA-1细胞的增殖抑制作用。应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率和细胞周期变化。用HE染色和透射电镜观察蛇葡萄素单用和与卡铂联用引起的人SPCA-1的形态学变化。应用共聚焦显微镜检测Amp(50,100μg/ml)对SPCA-1细胞内Ca2+、H+和线粒体膜电位的影响。结果Amp以浓度、时间依赖性地抑制SPCA-1细胞的增殖,以浓度依赖性地引起细胞凋亡率的升高,使细胞周期阻滞于G2/M期。Amp(100μg/ml)有诱导细胞凋亡的作用,出现明显的凋亡晚期特征即凋亡小体。与对照组比较,Amp引起细胞内Ca2+、H+浓度升高和线粒体膜电位降低。结论Amp可抑制SPCA-1细胞增殖,同时诱导凋亡发生,此作用可能与细胞阻滞于G2/M期、Ca2+和H+升高有关。

蛇葡萄素抗黑色素瘤侵袭和转移的作用

背景与目的:我们先前的研究发现蛇葡萄素在体外对几种人肿瘤细胞以及在体内对小鼠移植性B16黑色素瘤具有抑制作用。为了进一步研究其抑制肿瘤转移的作用,我们研究了蛇葡萄素在体内外抗B16小鼠黑色素瘤侵袭和转移的作用。方法:B16细胞由尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,建立实验性肺转移模型,蛇葡萄素以3个剂量从接种瘤细胞前一天腹腔给药,连续18天,于停药后第2天观察肺转移瘤灶数。B16细胞经蛇葡萄素处理3天,用具有聚碳酸酯和重建基底膜(基质胶Matrigel)的Transwell小室侵袭模型,研究药物处理后细胞侵袭、趋化运动、粘附能力的改变。结果:150、200、250mg/kg的蛇葡萄素可抑制小鼠肺转移瘤灶形成,与对照组比,抑制率分别为30.97%、40.58%、61.16%(P<0.05)。经20、40、80μmol/L蛇葡萄素处理后,对B16细胞侵袭人工基底膜的抑制率分别为36.06%、59.58%和79.09%(P<0.01);对细胞的趋化运动抑制率分别为51.59%、56.51%和66.75%(P<0.01);显著降低B16细胞与基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白及Matrigel的粘附作用。结论:蛇葡萄素具有抑制黑色素瘤的侵袭和转移的作用。

蛇葡萄素改变Bcl-2/Bax表达和激活caspase-3诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡

目的探讨蛇葡萄素在体外诱导人肝癌细胞株Bel-7402的凋亡作用及其可能机制。方法以不同浓度的蛇葡萄素作用于体外培养的人肝癌细胞株Bel-7402,应用MTT法检测培养24、48和72h的细胞生长情况;荧光染色观察细胞核的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳分析细胞DNA变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞caspase-3、Bcl-2和Bax的表达情况。结果蛇葡萄素对Bel-7402细胞的生长有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性。24、48、72h的IC50值分别是89.6±16.1、36.2±6.5和15.3±3.0mg·L-1。经荧光染色后可观察到典型的凋亡小体。细胞DNA电泳后呈现出凋亡细胞典型的DNAl adder。流式细胞术检测细胞凋亡率呈时间和浓度依赖性。caspase-3和Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Bax蛋白表达量逐渐增加,呈明显的浓度依赖性。结论蛇葡萄素能诱导体外培养的人肝癌Bel-7402细胞凋亡,其作用具有时间和浓度依赖性。下调Bcl-2、上调Bax表达,活化caspase-3是蛇葡萄素诱导Bel-7402细胞凋亡的可能机制之一。

用均匀设计法优化蛇葡萄素的提取与纯化工艺

目的:优选蛇葡萄素的提取工艺。方法:采用均匀设计法安排实验,以蛇葡萄素得率及纯度为评价指标,考察乙醇浓度,回流次数及时间对蛇葡萄素提取率的影响,同时考察石油醚萃取次数,活性炭用量及重结晶次数对蛇葡萄素纯化程度的影响,优选出合理的提取工艺。结果:提取优化条件:乙醇浓度90%,回流4次,每次1.5h;纯化优化条件:石油醚萃取3次,每100 g原药材加活性炭1 g,重结晶3次。结论:本工艺稳定可行,提取率高,可作为提取蛇葡萄素生产工艺的参考。

无刺根中蛇葡萄素和杨梅素的含量测定

本文研究了无刺根中黄酮化合物的测定方法,并测定了它们的含量。无刺根用热水提取,提取液用聚己内酰胺柱分离,先用30％乙醇洗脱得蛇葡萄素,再用70％乙醇洗脱得杨梅素,用紫外-可见分光光度法测定它们的含量。每百克干样含蛇葡萄素25.2克,相对标准偏差1.7％;杨梅素1.77克,相对标准偏差3.3％。回收率97.0～103％。