蛋壳内膜分解菌所产蛋白酶的纯化及其N-末端氨基酸序列测定

从土壤中分离得到的1株产蛋壳内膜分解酶(ESMprotease)的铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)。通过对其发酵液进行饱和硫酸铵盐析,二次离子交换层析得到蛋壳内膜分解活性达到304.5U/mg的目标蛋白,SDS-PAGE电泳显示该酶分子量约为32kD,通过测定其N-末端15个氨基酸残基为:Ala、Glu、Ala、Gly、Gly、Val、Ala、Gly、Lys、Glu、Asp、Ala、Ala、Glu和Leu。

蛋壳内膜分解菌的筛选、鉴定及其所产蛋白酶性质的初步研究

从土壤中分离筛选到具有分解利用蛋壳内膜能力的菌株Pes207,通过生理生化鉴定及16S rRNA序列分析,确定其为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。通过分离纯化及初步酶学性质研究发现,该菌株所产胞外蛋白酶分子量约为32 ku,最适反应温度为60℃,最适pH为8.0,Km值为2.89 mmol/L。Pes207具有很强的分解液化蛋壳内膜的能力,其所产蛋白酶在pH 5.5～9.0、温度30～70℃之间具有良好的分解活性,具有较好的应用前景。