蛋氨酸亚砜还原酶B1在糖尿病小鼠肾脏中的表达变化及其与氧化应激的关系

目的探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠肾组织中蛋氨酸亚砜还原酶B1(MsrB1)的表达变化及其与氧化应激的关系。方法将10周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:正常对照组(NC组)、单侧肾切除组(UX组)、STZ组和单侧肾切除加STZ组(STZ-UX组)。模型制备后第8周末,免疫组化法检测MsrB1在肾组织中的表达和分布;实时定量PCR、Western blotting检测MsrB1 mRNA及蛋白水平的变化;通过丙二醛(MDA)、蛋白羰基(PC)和总巯基(TSH)测试盒检测氧化损伤情况。结果 MsrB1表达于小鼠肾小管上皮细胞的细胞核和细胞质。与NC组相比,STZ组和STZ-UX组MsrB1表达量和TSH含量减少(P<0.05),而MDA、PC含量增加(P<0.05),且STZ-UX组比STZ组变化更明显;UX组没有明显改变(P>0.05)。相关性分析结果显示,STZ组和STZ-UX组MsrB1蛋白表达与MDA和PC呈负相关(P<0.05),与TSH含量呈正相关(P<0.05)。结论在STZ诱导的糖尿病小鼠肾组织中,MsrB1表达明显减少,这种变化可能参与了糖尿病肾病(DN)氧化应激的发生。

肺炎支原体Msr B经MAPK/NF-κB通路抑制脂质相关膜蛋白诱生促炎细胞因子

蛋氨酸亚砜还原酶B(methionine sulfoxide reductase, MsrB)是一种重要的氧化还原蛋白。该文探究了肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae, Mp) MsrB对Mp脂质相关膜蛋白(lipidassociated membrane proteins, LAMPs)刺激的人髓系白血病单核细胞(THP-1细胞)分泌促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的调节及相关信号通路,以进一步了解Mp的免疫逃避机制。论文构建了pET28a(+)-msr B重组质粒,诱导表达、鉴定、纯化重组蛋白(rMsrB)并制备了多克隆抗体;Western blot检测MsrB、TLR1、TLR2、TLR6和MyD88蛋白表达水平及NF-κB p65、P38、ERK和JNK的总蛋白和磷酸化蛋白水平;间接免疫荧光分析NF-κB核转位;ELISA测定TNF-α和IL-1β分泌水平。结果显示Msr B可表达于Mp胞质和胞膜。rMsrB预处理可抑制LAMPs刺激的THP-1细胞合成TNF-α和IL-1β。Mp rMsrB可抑制LAMPs刺激的THP-1细胞表达TLR2、MyD88、p-ERK、p-JNK、p-p38和p-p65,并抑制NF-κB的核转位。抑制NF-κB、P38、ERK和JNK表达后,rMsrB可进一步抑制LAMPs刺激的THP-1细胞产生TNF-α和IL-1β。综上, Mp MsrB经MAPK/NF-κB信号通路抑制LAMPs刺激的THP-1细胞分泌TNF-α和IL-1β。

MsrB1对ONOO^-诱导的人晶状体上皮细胞周期的影响

目的探讨蛋氨酸亚砜还原酶B1(methionine sulfoxide reductase B1,MsrB1)基因沉默对过氧亚硝酸根(ONOO-)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)细胞周期的影响和ERK信号通路在其中的调节作用。方法将培养的HLEC分为两组:正常组和MsrB1基因沉默组,分别用0μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1和300μmol·L-1 ONOO-处理20 min后,继续培养12 h。用RT-PCR法检测MsrB1基因表达水平变化,流式细胞仪检测细胞周期水平变化,Western blot法检测MsrB1基因沉默和ONOO-对pERK表达水平的影响。结果 300μmol·L-1 ONOO-处理HLEC会导致MsrB1表达水平显著下降(P<0.01),当MsrB1基因沉默细胞经300μmol·L-1ONOO-处理后,MsrB1表达水平进一步显著下调(P<0.05)。经200μmol·L-1或300μmol·L-1 ONOO-处理,HLEC细胞周期分别阻滞在G2/M期和S期,当MsrB1基因沉默细胞经200μmol·L-1或300μmol·L-1 ONOO-处理后,更多的细胞阻滞在G2/M期或S期(P<0.05)。pERK检测结果表明,MsrB1基因沉默前后经ONOO-处理导致的细胞周期阻滞和pERK表达水平显著下降有关(P<0.01)。结论 ONOO-可以下调HLEC MsrB1表达水平,MsrB1基因沉默细胞经ONOO-处理,pERK表达水平显著下降,导致更多细胞阻滞在G2/M期和S期。