雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的 探讨雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β(AKT/GSK-3β)通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响。方法 体外培养MGC803细胞,确定雷公藤甲素的干预剂量和干预时间。将细胞分为阴性对照组(A组,不进行处理),阳性对照组(B组,10μmol/L顺铂),雷公藤甲素高、中、低剂量组(C组、D组、E组)。干预48 h,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,采用划痕试验法检测迁移能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测检测相关蛋白的表达。结果 随着雷公藤甲素浓度的增加,MGC803细胞增殖率降低(P <0.05);48 h时半数抑制浓度(IC50)最小,选择干预时间为48 h,C组、D组、E组的干预剂量分别为80,40,20 nmol/L。与B组比较,C组、D组、E组侵袭细胞数、细胞迁移距离及波形蛋白(vimentin),snail,p-AKT/AKT,p-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著升高(P <0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)、β-联蛋白(β-catenin)表达水平均显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖关系。结论 雷公藤甲素可通过抑制AKT/GSK-3β信号通路而抑制MGC803细胞增殖、侵袭与迁移。

胱硫氨酸β-合成酶在食管胃结合部腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测胱硫氨酸β-合成酶(CBS)在食管胃结合部腺癌(AEG)中的表达,探讨CBS表达与肿瘤血管新生、临床病理特征及预后的关系。方法 选取经手术切除的243例AEG患者的蜡块标本制作病理芯片,采用免疫组织化学法检测癌组织及配对癌旁正常组织中CBS、血管内皮细胞生长因子(VEGF)及微血管密度(MVD)的表达情况,分析CBS表达水平与VEGF及肿瘤MVD的相关性。探讨CBS表达水平与AEG患者的临床病理特征及预后的关系。结果 CBS在AEG患者的癌组织和配对癌旁正常组织中的阳性表达率分别为66.67%(162/243)和30.45%(74/243),两组比较差异有统计学意义(P<0.001)。CBS表达水平与T分期、淋巴结转移、吸烟史、VEGF表达及MVD均有关(P<0.05),而与患者的年龄、性别、分化程度、TNM分期及饮酒史无关(P>0.05)。CBS低表达患者的中位无病生存时间(DFS)为63个月,显著长于CBS高表达患者的50个月,差异有统计学意义(P=0.0039)。Cox多因素回归分析显示,CBS表达(HR=1.827,95%CI:1.146~2.912,P=0.011)、VEGF表达(HR=2.684,95%CI:1.637~4.401,P<0.001)、MVD(HR=4.064,95%CI:2.419~6.829,P<0.001)及TNM分期(HR=2.354,95%CI:1.523~3.638,P<0.001)是影响AEG患者DFS的独立因素。结论 CBS高表达可能与肿瘤新生血管相关,是AEG预后的不良因素之一,在AEG的诊治中具有潜在应用价值。

蛋氨酸合成酶催化反应研究Ⅴ:5-氨基-6-(3-羟基-4-溴丁基)尿嘧啶的合成研究

报导了 5 氨基 6 (3 丁烯基 )尿嘧啶、5 氨基 6 (3 羟基 4 溴丁基 )尿嘧啶的合成方法 .以γ 取代的β 酮酯和O 甲基异尿硫酸盐为起始物 ,经 6 取代尿嘧啶 (3)、6 取代 5 偶氮尿嘧啶 (4)和未见文献报道的中间体 6 ,首次合成了 5 氨基 6 (3 丁烯基 )尿嘧啶 (5 )及 5 氨基 6 (3 羟基 4 溴丁基 )尿嘧啶 (7)

水稻中与盐碱适应性相关的VB_(12)不依赖型蛋氨酸合成酶基因的克隆和表达(英文)

VB12 不依赖型蛋氨酸合成酶广泛存在于高等植物中 ,它可催化高半光氨酸甲基化而生成蛋氨酸 ,为生物体内的甲基化反应和多胺、乙烯的合成提供中间产物。以水稻品种日本晴为材料 ,在碱性条件下利用cDNA RAPD法 ,在水稻中首次报道了VB12 不依赖型蛋氨酸合成酶基因的克隆和表达。结果表明 ,VB12 不依赖型蛋氨酸合成酶cDNA基因全长为 2 74 0bp ,在水稻基因组中以单或低拷贝存在 ,编码 76 5个氨基酸 ,与Mesembryanthemumcystallinum(U84 889)和Cathararanthusroseus (X83499)的同源性分别为 92 %和 83%。水稻在受到碳酸钠胁迫 12h和 2 4h后 ,其转录较氯化钠明显增强 ,而到 4 8h后下降 ,暗示它可能与水稻的盐碱适应性有关。

冠心病和深静脉血栓患者蛋氨酸合成酶基因A2756G多态性检测

目的检测冠心病(CHD)及深静脉血栓(DVT)形成患者蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G的多态性。方法运用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对103例DVT患者、208例CHD患者和250例健康对照进行MS基因A2756G多态性分析。结果DVT组A/G+G/G型频率为10.7%,低于对照组的19.6%(χ2=4.114,P<0.05),但2组等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论A/G+G/G型可能对静脉血栓的形成具有保护性作用,该型的分布存在种族和地域差异。MS基因A2756G多态可能不是河南汉族人群CHD发生的遗传危险因素。

缺血性脑血管病患者蛋氨酸合成酶基因A2756G多态性检测

目的检测缺血性脑血管病患者蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G多态性。方法运用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)技术对512例缺血性脑血管病患者及500例健康对照者进行MS基因多态性检测。结果缺血性脑血管病患者组MSA2756GA/A、A/G、G/G基因型频率分别为88.9%、10.7%和0.4%,A和G等位基因频率分别为94.2%和5.8%。对照组A/A、A/G、G/G基因型频率分别为84.6%、15.0%和0.4%,A和G等位基因频率分别为92.1%和7.9%。2组基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MS基因A2756G多态可能不足以构成河南汉族人群缺血性脑血管病发病中的一个独立的遗传危险因子。

同型半胱氨酸和蛋氨酸合成酶还原酶A66G基因多态性与Alzheimer病的关系

目的探讨同型半胱氨酸(H cy)和蛋氨酸合成酶还原酶(M SR)A66G基因多态性与Alzheim er病的关系。方法运用多聚酶链反应限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)和荧光偏振法(FPIA)检测66例Alzheim er病及143例正常人M SR A66G基因多态性和血浆总H cy水平。结果Alzheim er病组M SR A66G基因型频率(%)分别为39.39、59.09和1.52,对照组分别为37.76、59.44和2.80,M SR A66G各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无显著性(P>005)。Alzheim er病病例组与对照组血浆H cy分别为(14.72±6.2)μm ol/L和(10.9±2.4)μm ol/L,两者差异有显著差异(P<0.05)。Alzheim er病患者血浆总H cy水平显著高于正常组。结论M SRA66G多态性与Alzheim er病无明显相关,高同型半胱氨酸血症与Alzheim er病发生有一定关系。

蛋氨酸合成酶基因多态性与颅内动脉瘤的关系

目的探讨同型半胱氨酸和蛋氨酸合成酶(MS)A2756G基因多态性与颅内动脉瘤的关系。方法运用多聚酶链反应技术和化学发光法检测76例颅内动脉瘤及77例正常人MS A2756G基因多态性。结果颅内动脉瘤组的MSD919G DG基因型频率较正常对照高(P<0.01),患颅内动脉瘤的风险是对照组的6.35倍。两组等位基因频率差异无统计学意义(P>0 05)。结论 MS D9l9G的DG基因型与颅内动脉瘤明显相关,高同型半胱氨酸血症与颅内动脉瘤病发生有一定关系。

同型半胱氨酸及蛋氨酸合成酶基因多态性与颅内动脉瘤的关系

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)及其代谢关键酶蛋氨酸合成酶(methionine synthase,MS)基因多态性与颅内动脉瘤的关系。方法采用化学发光技术检测76例颅内动脉瘤患者和77例健康成人的血浆Hcy水平,并利用聚合酶链式反应技术检测其MS基因多态性。结果颅内动脉瘤组血浆Hcy水平为(16.14±6.72)μmol/L高于对照组的(11.20±3.20)μmol/L,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。颅内动脉瘤组的MS D919G DG基因型频率较正常对照高(P<0.01),患颅内动脉瘤的风险是对照组的6.35倍。两组等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。MS D919G突变基因型TC、TG、Hcy浓度分组比较结果显示,颅内动脉瘤组不同基因型TG、TC浓度差异无统计学意义(P>0.05),DG基因型Hcy浓度较其他基因型高,差异有统计学意义(P<0.05);颅内动脉瘤组Hcy浓度较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),但两组TG和TC水平差异无统计学意义(P>0.05);对照组不同基因型间TG、TC、Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论高Hcy血症与颅内动脉瘤病发生有一定关系,MS D919G DG基因型与颅内动脉瘤可能有相关。

蛋氨酸合成酶还原酶研究新进展

蛋氨酸合成酶还原酶是蛋氨酸合成酶所必需的黄素蛋白。该基因大小约为 34kb ,包含 1 5个外显子。蛋氨酸合成酶还原酶催化甲基钴胺再生 ,是蛋氨酸合成酶的辅助因子 ,对于维持同型半胱氨酸在无毒性水平有重要作用 。

高产S-腺苷蛋氨酸合成酶基因工程菌的构建

应用PCR技术,以大肠杆菌BL21(DE3)染色体DNA为模板,扩增得到S-腺苷蛋氨酸(SAM)合成酶基因。将所得基因连接至表达载体pET-22b(+),利用T7强启动子进行转录,然后转化进E.coli BL21(DE3)表达菌株,构建出了具有高效表达SAM合成酶基因的基因工程菌。重组菌所表达的酶活为115 U/g(以细胞干重计)。

茶树茶氨酸合成酶基因的酶活性验证与蛋白三维结构分析

针对NCBI上已登录的茶氨酸合成酶与谷氨酰胺合成酶基因序列进行克隆、原核表达与酶活性验证,利用多种生物信息学数据库和软件,对Cs TS与Cs GS基因进行结构、性质和功能预测,采用同源建模法对蛋白三维结构进行预测,比较并预测催化作用位点的差异;用系统进化树分析从裸子植物到高等被子植物的谷氨酰胺合成酶基因序列,推测其进化的演变过程;通过对原核表达的基因工程菌提取粗酶液进行酶活性测定。结果表明:尽管茶树TS与GS序列高度同源,但是原核表达后的融合蛋白仍然显示了不同的催化能力,蛋白一、二级结构分析显示Cs TS与Cs GS差异不大,但是通过同源建模形成的蛋白三级结构分析显示,Cs TS与Cs GS存在3个催化位点上的差异,这可能是导致其酶活性差异的关键。系统进化分析结果首次确定茶氨酸合成酶应为谷氨酰胺合成酶基因家族成员,按照其细胞定位预测应为胞质型GS,其亲缘关系与同为双子叶植物的葡萄、陆地棉、巴西橡胶树、拟南芥较接近。

蛋氨酸合成酶及胱硫醚β合成酶基因多态性与冠状动脉粥样硬化发生的关系

目的：探讨蛋氨酸合成酶（MS）和胱硫醚B合成酶（CBS）的基因多态性对同型半胱氨酸代谢的影响及与动脉粥样硬化的关系。方法：共人选研究对象153例（对照组40例，冠心病组113例）。采用高效液相色谱法测定血清同型半胱氨酸浓度。采用聚合酶链式反应扩增及限制性内切酶技术检测CBS基因1011A→G突变型和MS基因D919G突变型。结果：在40例对照组中，MS基因纯合子突变型（GG）为0，杂合子突变型（AG）占7．5％（3／40），总突变率占7．5％；在113例冠心病组中，纯合子突变型（GG）占2．7％（3／113），杂合子突变型（AG）占21．2％（24／113），总突变率为23．9％。χ^2检验表明，突变型和非突变型在两组间有显著性差异（χ^2=5．16，P〈0．025）。G等位基因对冠心病的比值比（OR值）为4．39（95％的可信限为1．31～14．73，P〈0．05）。突变部分血清同型半胱氨酸水平显著高于非突变部分[（16．83±3．08）mmol／L vs（9．86±3．18）mmol／L]。CBS基因仅扩增出等位基因A，没有扩增出突变型G等位基因。结论：MS基因D919G突变型可导致血清同型半胱氨酸水平升高，并促进动脉粥样硬化的发生。

蛋氨酸合成酶辅酶模型的合成及其催化反应的初步研究

生物体内的蛋氨酸合成酶(methionine synthase)以N^5-甲基四氢叶酸作为辅酶,通过两步SN2反应,将甲基转移到高半胱氨酸的流基上生成蛋氨酸。该酶起到中间甲基载体的功能。为了进一步研究甲基转移的机理,报道了作为活化的5-甲基四氢叶酸模型:碘化2-氨基-4-羟基-5,5,6-三甲基吡啶并[3,2-d]嘧啶的合成以及与模拟蛋氨酸合成酶[Co(I)(dmgH)_2Py]的反应。

中国山西地区人群亚甲基四氢叶酸脱氢酶1和蛋氨酸合成酶基因多态性与非综合征性唇腭裂

目的研究亚甲基四氢叶酸脱氢酶(MTHFD)1和蛋氨酸合成酶(MTR)基因多态性与非综合征性唇腭裂(NSCL/P)发生的相关性。方法取187例NSCL/P患者裂隙处的黏膜组织为试验组,157例对照组的正常的口腔黏膜组织为对照组,检测MTHFD1基因(rs2236225位点)和MTR(rs1805087位点)基因型,比较两组的基因型和等位基因频率,分析基因型分布频率、两个基因的共同作用及其与NSCL/P的发生是否相关。结果 MTR、MTHFD1在两组间的基因型和等位基因分布上的差异无统计学意义(P>0.05);MTR的AG、GG基因型相对于AA基因型的比值比分别为:0.308、0.501。MTHFD1的GA、AA基因型相对于GG基因型的比值比分别为:0.812、0.196。AG-AA型、GG-GA型、GG-AA型相对于AA-GG型的比值比分别是2.078、4.508、6.497。结论 MTHFD1和MTR的基因多态性均与NSCL/P的发生之间没有相关性,但是,它们之间相互作用是NSCL/P发生的危险因素。

地域差异对蛋氨酸合成酶基因多态性分布的影响

目的比较江苏省与其他地区正常女性蛋氨酸合成酶基因的分布特点。方法采用PCR-RFLP技术对125例正常人蛋氨酸合成酶基因进行扩增及图谱分析,结合既往发表的文献进行不同地区间的比较。结果江苏省正常女性中MS基因型以A/A最多见,A/G次之。A/A基因型频率为0.576 0、A/G为0.4160、G/G为0.0080。A基因型频率为0.7840、A为0.2160。与其他地区相比较,MS基因型在江苏省正常女性中的分布与国内其它地区人群中的分布差异显著。结论蛋氨酸合成酶基因多态性在不同地区间分布存在着明显的差异。

糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中S腺苷蛋氨酸合成酶基因的表达及其意义

目的 比较正常大鼠和糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中基因表达的差异 ,探讨糖尿病性心肌病的发病机制。 方法 实验大鼠分为两组 :对照组和糖尿病性心肌病组。从心肌组织中抽提 m RNA,经逆转录分别用Cy3、Cy5荧光标记 ,获得两组动物来源的 c DNA探针。c DNA探针与基因表达谱芯片杂交 ,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。 结果 S腺苷蛋氨酸合成酶的表达水平在糖尿病性心肌病时明显上调。 结论 S腺苷蛋氨酸合成酶通过影响糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中高半胱氨酸的含量在糖尿病性心肌病发病机制中起重要作用。

腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位表达的机制研究

目的:研究腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)表达的机制。方法:构建稳定表达腺病毒E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞,将GCLC基因5’-上游调控序列不同长度的缺失体-萤火虫荧光素酶报道系统转染后分析转录活性的变化;检测AP-1、NF-κB、USF与GCLC基因调控序列的结合活性。结果:GCLC基因5’-上游调控序列报道系统检测结果显示大部分(9/11)缺失体的转录活性抑制,AP-1、NF-κB、USF与GCLC基因的结合活性增强,而对应的功能元件的转录活性降低。结论:腺病毒E1A蛋白通过抑制GCLC基因5’-上游调控序列的转录活性,扩大大鼠肺泡上皮细胞氧化应激时的氧化/抗氧化失衡,其机制可能涉及E1A对辅助转录因子的抑制。

γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和多药耐药相关蛋白基因在膀胱癌中的表达及相关性分析

为探讨 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ- GCS)及多药耐药相关蛋白 (MRPs)与膀胱癌化疗耐药的关系 ,应用逆转录多聚酶链式反应 (Rt- PCR)技术检测了 32例膀胱癌及其癌周正常膀胱粘膜上 γ- GCS亚单位 γ- GCSh、γ- GCSl以及 MRPs家族成员 MRP1 和 MRP2 的 m RNA的表达 ,并以 β- actin m RNA为内对照半定量进行相关分析。结果显示 :γ-GCSh、γ- GCSl、MRP1 和 MRP2 m RNA在癌组织的平均相对表达水平均高于其在正常粘膜的表达 ;γ- GCSh和 MRP1 在化疗复发病例的癌组织的平均表达水平明显高于在未接受过任何化疗的初发病例 ,同时显示两者在癌组织的表达具有较强的相关性 (r=0 .786 ,P<0 .0 1)。提示 :正常细胞的恶性化可上调 γ- GCS和 MRPs的表达 ;膀胱癌临床化疗耐药的形成与 γ- GCSh和 MRP1 的过表达密切相关 。

蛋氨酸合成酶还原酶基因A66G多态性与Down综合征发生的相关研究

目的:研究蛋氨酸合成酶还原酶(MTRR)基因A66G多态性与Down综合征的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法对32例DS患儿母亲及70例未生育DS患儿女性MTRR的A66G进行基因分析。比较上述各组基因型和等位基因频率分布有无差异。结果:MTRR基因A66G突变型等位基因G频率在实验组和对照组中有显著性差异,GG基因型频率分布差异有显著性(P<0·05)。AG基因型比AA基因型生育DS患儿风险高1·98倍,GG基因型比AA基因型生育DS患儿风险高5·2倍。结论:MTRR A66G基因多态性与Down综合征发生相关,AG、GG基因型增加了Down综合征的发生风险。