基于生物信息学对比分析高脂饮食和蛋氨酸胆碱缺乏饮食构建的非酒精性脂肪性肝病小鼠模型

目的比较高脂饮食(high-fat diet,HFD)饮食和蛋氨酸胆碱缺乏(methionine-choline-deficient,MCD)饮食对C57小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型的影响,通过生物信息学方法揭示其差异表达基因(GEO-data-based analysis of differentially expressed genes,DEGs)并进行功能分析。方法从GEO数据库中获取GSE78170、GSE123354的表达数据。使用R语言分别比较C57小鼠对照组与MCD饮食组、C57小鼠对照组与HFD饮食组数据获得DEGs。对DEGs进行进一步的差异分析、功能富集分析、构建基因和蛋白互作网络及重叠DEGs对比分析。结果筛选出HFD诱导的上调基因44个,下调基因16个;MCD诱导的上调基因43个,下调基因73个;分析富集分析排名前12位的生物学过程,提示HFD与肝脏单纯脂肪积累相关,MCD则能全方位促进NAFL进一步转变为NASH。结论HFD诱导的基因主要涉及肝脏脂肪积累,而MCD更倾向于全方位促进NAFL向NASH的进展。

水飞蓟素联合复方蛋氨酸胆碱治疗酒精性肝炎患者疗效及其对血清肝纤维化指标的影响

目的观察应用水飞蓟素联合复方蛋氨酸胆碱治疗酒精性肝炎(AH)患者的临床疗效及其对血清肝纤维化指标的影响。方法2021年1月~2023年1月我院诊治的AH患者101例,采用随机数字表法将患者分为对照组50例和观察组51例,分别给予复方蛋氨酸胆碱或复方蛋氨酸胆碱联合水飞蓟素治疗6个月。采用放射免疫分析法检测血清层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原N端肽(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C),采用ELISA法检测血清过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、瘦素(LEP)、脂联素(APN)和白细胞介素-18(IL-18)水平。结果经治疗,观察组血清ALT和AST水平分别为(41.8±4.9)IU/L和(42.5±4.9)IU/L,均显著低于对照组【分别为(75.3±6.8)IU/L和(62.7±5.8)IU/L,P<0.05】;观察组血清HA、PCⅢ和Ⅳ-C水平分别为(103.6±13.5)μg/L、(94.2±9.8)μg/L和(75.2±8.6)μg/L,均显著低于对照组【分别为(146.2±15.3)μg/L、(125.8±13.3)μg/L和(112.3±14.5)μg/L,P<0.05】;观察组血清PPARγ、LEP和IL-18水平分别为(231.7±26.8)pg/mL、(5.4±0.7)μg/L和(92.5±11.7)ng/mL,均显著低于对照组【分别为(285.3±29.4)pg/mL、(8.3±0.9)μg/L和(118.5±12.4)ng/mL,P<0.05】,而血清APN水平为(15.4±1.7)ng/L,显著高于对照组【(11.3±1.9)ng/L,P<0.05】。结论应用水飞蓟素联合复方蛋氨酸胆碱治疗AH患者效果较好,有利于肝功能指标恢复,可能对延缓肝纤维化进展、降低机体炎症反应和调节脂代谢有帮助。

改良蛋氨酸胆碱缺乏饮食喂养的非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型的建立

目的:观察改良蛋氨酸胆碱缺乏饮食(MCD)建立的脂肪性肝炎大鼠模型肝脏的脂肪变性和炎症情况.方法:大鼠26只随机分为4组,分别喂养MCD饮食和胆碱添加饮食(CS).3-8wk后处死,肝脏标本在甲醛中固定和石蜡包埋.HE染色和Masson染色后对脂肪变性、炎症和纤维化进行评分.血清ALT,AST,CH,LDL等指标通过生化分析仪进行测定.结果:MCD喂养组3wk可以看见肝脂肪变性和炎症,肝指数显著增加,ALT和AST显著升高,8wk可见纤维形成.结论:可通过改良的蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食建立非酒精性脂肪肝动物模型.

甲状旁腺激素相关蛋白加重蛋氨酸胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病进展

目的研究甲状旁腺激素相关蛋白(PTHr P)对蛋氨酸胆碱缺乏饲料(MCD)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响。方法构建小鼠NAFLD模型并分为空白对照组(普通饲料喂养4周)、AAV-Vehicle组(注射空载腺相关病毒AAVVehicle)和AAV-PTHr P组(注射PTHr P过表达腺相关病毒)。实验期间监测小鼠体质量。收集小鼠肝脏组织进行HE染色、油红染色和天狼星红染色评估肝脏组织病理学改变;检测肝脏及血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、甘油三酯和游离脂肪酸浓度评估小鼠肝脏损伤及脂肪代谢水平。250μmol/LFFAs诱导小鼠正常肝细胞和人正常肝细胞24 h构建NAFLD细胞。根据有无PTHr P处理分为PTHr P组、对照组。油红及尼罗红染色检测细胞内脂质沉积程度;CCK8试剂盒检测PTHr P对脂肪变性肝细胞的毒性作用。结果动物实验:对比AAV-Vehicle组,AAV-PTHr P组小鼠体重下降更为快速;AAV-PTHr P组小鼠肝脏谷草转氨酶(P<0.05)、谷丙转氨酶(P<0.05)、甘油三酯(P<0.01)、游离脂肪酸(P<0.05)水平,NAS评分以及SAF评分均显著升高(P<0.01,P<0.05),肝脏脂滴堆积更为明显。细胞实验:同时加入PTHr P,小鼠及人NAFLD细胞模型的脂质沉积更为明显(P<0.01),且细胞活性下降(P<0.05)。结论PTHr P可能通过促进肝细胞脂滴沉积,加重MCD诱导的小鼠NAFLD。

苦黄注射液联合复方蛋氨酸胆碱治疗酒精性脂肪肝的疗效及对肝纤维化的影响研究

目的探究复方蛋氨酸胆碱结合苦黄注射液在酒精性脂肪肝治疗中的疗效及对肝纤维化的影响。方法按照随机数字表法将2019年1月至2021年12月海安市人民医院收治并确诊的104例酒精性脂肪肝患者分为对照组和观察组,各52例。对照组给予复方蛋氨酸胆碱治疗,观察组苦黄注射液联合复方蛋氨酸胆碱治疗。两组患者均连续治疗1个月。采用全自动生化分析仪检测两组患者治疗前后血清丙氨酸转移酶(alanine trans-ferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylg-lycerol,TG)、总胆红素(total bilirubin,TBil)水平;采用放射免疫法检测两组患者治疗前后血清层粘连蛋白(laminin,LN)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、Ⅲ型前胶原N端肽(type III procollagen N-terminal peptide,PCⅢ)及Ⅳ型胶原(type IV collagen,Ⅳ-C)水平。比较两组患者的临床症状改善情况、临床疗效、肝功能指标及肝纤维化指标。结果观察组治疗后的腹胀、肝区不适、黄疸、痞满等症状消失时间分别为(3.9±0.1)d、(9.8±0.2)d、(11.5±0.7)d、(3.8±0.2)d,均短于对照组分别为(7.5±0.3)d、(14.3±0.4)d、(15.6±0.8)d、(7.4±0.3)d(均P<0.05)。观察组临床总有效率高于对照组(94.2%vs 78.9%)(χ^(2)=5.283,P=0.022)。观察组ALT、AST、TC、TG、TBil水平分别为(31.5±5.3)IU/L、(36.4±3.4)IU/L、(4.1±0.2)mmol/L、(1.4±0.3)mmol/L、(12.6±3.1)μmol/L,低于对照组[分别为(57.4±5.6)IU/L、(54.7±3.5)IU/L、(6.4±0.4)mmol/L、(2.6±0.5)mmol/L、(21.2±5.3)μmol/L(]均P<0.05)。观察组治疗后LN、HA、PCⅢ、Ⅳ-C水平分别为(51.6±9.4)μg/L、(32.5±7.4)μg/L、(7.5±1.8)ng/mL、(32.3±4.2)μg/L,均低于对照组[分别为(80.5±10.3)μg/L、(58.7±12.2)μg/L、(16.5±3.6)ng/mL、(71.2±8.6)μg/L(]均P<0.05)。对照组和观察组不良反应发生率分别为7.68%、3.84%,两组比较无明显差异(χ^(2)=0.707,P=0.400)。结论复方蛋氨酸胆碱结合苦黄注射液在酒精性脂肪肝患者中的治疗疗效显著,可改善患者的临床症状和肝功能,延缓肝纤维化的进程,安全性高。

复方蛋氨酸胆碱片治疗脂肪肝的疗效及安全性分析

目的:观察复方蛋氨酸胆碱片治疗非酒精性脂肪性肝病(简称脂肪肝)的疗效及安全性。方法:随机纳入我院2016年3月至2018年12月期间诊治的脂肪肝患者80例,按治疗药物不同分对照组(40例接受多烯磷脂酰胆碱胶囊治疗)和研究组(40例接受复方蛋氨酸胆碱片治疗),比较治疗效果、不良反应等。结果:研究组治疗有效率95%高于对照组75%(P<0.05)。治疗前组在肝功能指标、血脂,治疗后研究组GGT、AST、ALT低于对照组(P<0.05)。治疗前组间肝功能指标差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,研究组TG、TC低于对照组(P<0.05)。研究组不良反应总发生率5%低于对照组7.50%,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论:临床治疗脂肪肝可给予复方蛋氨酸胆碱片治疗,可显著改善患者肝功能,安全高效。

健肝乐颗粒联合复方蛋氨酸胆碱片治疗酒精性脂肪肝对氧化应激和细胞因子的影响

目的探讨健肝乐颗粒联合复方蛋氨酸胆碱片治疗酒精性脂肪肝对氧化应激和细胞因子的影响。方法选取2019年5月至2021年5月武汉市精神卫生中心收治的酒精性脂肪肝患者108例作为研究对象,采用随机数字表法分为对照组与观察组,各54例。对照组给予常规西药复方蛋氨酸胆碱片治疗,观察组在其基础上联合健肝乐颗粒治疗,两组均连续治疗3个月,比较两组患者临床疗效、治疗前后肝功能[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)]、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)]、细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、成纤维细胞生长因子21(FGF-21)、白细胞介素-33(IL-33)]水平,同时观察治疗前后肝脏超声指标变化以及治疗期间不良反应。结果观察组治疗有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组与对照组相比AST、ALT及GGT较低,SOD较高,MDA、TNF-α、FGF-21及IL-33较低,肝脏脾大、管道结构显示不清、远端回声衰减及近端弥漫点状高回声所占比例、肝弹值均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗期间均未出现明显的不良反应。结论健肝乐颗粒联合复方蛋氨酸胆碱片治疗酒精性脂肪肝临床效果显著,可有效改善患者氧化应激以及细胞因子水平,提高肝功能,且治疗期间未增加不良反应,安全性较高。

蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的建立及动态监测

目的:研究蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝脏脂肪变性及炎症发生、发展的病理特点.方法:将40只C57/BL6小鼠随机分成2组,分别喂养MCD饮食(模型组)和对照蛋氨酸-胆碱充足(MCS)饮食(空白组),于造模的第1-5周动态连续取材,小鼠血清ALT、AST、TG及肝TG等生化指标通过全自动生化分析仪进行测定,肝脏标本通过油红O、HE染色对脂肪变性及炎症进行评分.结果:MCD饮食喂养2-3wk后,肝脏病理切片可见脂肪变及炎症,小鼠血清ALT(U/L)、AST(U/L)明显升高,与空白组相比有统计学差异(133.9±6.3vs47.3±1.3;154.3±24.6vs109.2±50.4,均P<0.05).在第3周时,模型组血清TG(mmol/L)含量较空白组明显降低(0.97±0.14vs1.45±0.32,P<0.01),而在第5周时,模型组肝TG(mmol/L)含量较空白组明显升高(1.50±0.22vs0.98±0.16,P<0.01).肝脏炎症坏死以腺泡1区为主为重,5wk时肝内纤维化表现开始出现.结论:MCD饮食诱导的NASH小鼠模型重复率高,造模2-3wk时模型稳定性最好.

白藜芦醇对蛋氨酸胆碱缺乏培养基诱导肝细胞损伤的保护作用

目的研究白藜芦醇对蛋氨酸胆碱缺乏(methionine-choline-deficient,MCD)培养基诱导的小鼠正常肝细胞(alpha monse liver 12,AML12)损伤的保护作用。方法体外培养小鼠正常肝细胞AML12,建立蛋氨酸胆碱缺乏培养基诱导的肝细胞损伤模型,用不同浓度白藜芦醇(25、50、100μmol/L)进行干预24h,检测细胞的增值活性,以及细胞培养基上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱基酶(LDH)活性和细胞中丙二醛(MDA)水平、甘油三酯(TG)含量,检测细胞中炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平及其m RNA水平,并检测微管相关蛋白1轻链3(MAP1-LC3)蛋白的表达。结果与MCD损伤组相比,各白藜芦醇干预组细胞活力明显增强,白藜芦醇可以显著抑制MCD导致的肝细胞ALT,AST,LDH的释放,降低肝细胞内MDA水平和TG含量,降低炎性细胞因子水平,上调MAP1-LC3的表达。结论白藜芦醇对MCD诱导的的小鼠肝AML12细胞损伤有明显的保护作用,自噬可能在其中起到一定的作用。

三七脂肝丸联合复方蛋氨酸胆碱治疗酒精性脂肪肝的临床研究

目的探讨三七脂肝丸联合复方蛋氨酸胆碱片治疗酒精性脂肪肝的临床疗效。方法选择2018年10月—2019年12月在郑州大学第一附属医院治疗170例酒精性脂肪肝患者,根据住院序号分成对照组(85例)和治疗组(85例)。对照组口服复方蛋氨酸胆碱片,3片/次,3次/d;治疗组在对照组基础上口服三七脂肝丸,5 g/次,3次/d。两组均治疗2个月。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者临床症状改善时间,肝功指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)和胆固醇(TC),肝纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原N端肽(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)和层粘连蛋白(LN),血清学指标过氧化酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)、瘦素(Leptin)、脂联素(APN)、转化生长因子β(TGF-β)和白细胞介素-18(IL-18)水平。结果经治疗,对照组和治疗组总有效率分别为84.71%、97.65%(P<0.05)。经治疗,治疗组肝区不适、黄疸、痞满、腹胀症状消失时间均明显短于对照组(P<0.05)。经治疗,两组血清AST、ALT、TC、TG、HA、LN、PCⅢ、IV-C水平均显著下降(P<0.05),并以治疗组最显著(P<0.05)。经治疗,两组血清PPARγ、Leptin、APN、TGF-β、IL-18水平均明显改善(P<0.05),并以治疗组改善最明显(P<0.05)。结论三七脂肝丸联合复方蛋氨酸胆碱治疗酒精性脂肪肝可有效改善患者临床症状,促进肝功能和肝纤维化指标改善,具有一定的临床推广应用价值。

蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的大、小鼠非酒精性脂肪性肝病模型的特点及差异

目的研究蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的SD大鼠和C57BL/6J小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型的特点和差异。方法 C57BL/6J小鼠随机分为小鼠对照组8只,小鼠NAFLD模型组8只。SD大鼠随机分为大鼠对照组8只,大鼠NAFLD模型组8只。对照组给予蛋氨酸-胆碱充足(MCS)饲料喂养,模型组给予MCD饲料喂养。于造模第8周末处死所有大小鼠。检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。肝组织行HE、Masson和油红O染色,观察肝脏组织病理学变化。采用Ishaki评分系统评价肝组织炎症活动度和肝纤维化程度。结果 8周时,大小鼠模型组体质量与相应对照组比较显著下降(P<0.01)。大小鼠NAFLD模型组血清ALT、AST显著升高,TG、TC显著下降,与相应对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。肝脏大体外观显示大小鼠模型组肝脏色泽暗淡,泛黄,触之有明显颗粒感。肝组织病理显示大小鼠模型组均出现严重肝脂肪变及不同程度肝组织炎症。但小鼠模型组肝组织炎症活动度和肝纤维化评分均显著高于大鼠模型组(P<0.05)。结论 MCD饮食8周能成功诱导SD大鼠和C57BL/6J小鼠NAFLD模型,出现肝脂肪变和转氨酶异常升高。C57BL/6J小鼠模型肝组织炎症和肝纤维化程度要严重于SD大鼠,更适合应用于NAFLD相关肝纤维化的实验研究。

还原型谷胱甘肽联合蛋氨酸重酒石酸胆碱治疗酒精性脂肪肝110例

目的:探索治疗酒精性脂肪肝的新途径。方法:210例酒精性脂肪肝患者分为两组,110例用还原型谷胱甘肽联合蛋氨酸重酒石酸胆碱为治疗组,100例单用还原型谷胱甘肽治疗作为对照组,疗程均为1个月。结果:治疗组有效率93.6%(103/110),对照组有效率73.0%(73/100),两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:还原型谷胱甘肽联合蛋氨酸重酒石酸胆碱治疗酒精性脂肪肝具有良好的效果,值得临床推广应用。

胆碱和蛋氨酸缺乏饲料诱导大、小鼠非酒精脂肪性肝炎动物模型的比较研究

目的为防治非酒精脂肪性肝炎(NASH)的研究提供理想的动物模型。方法将C57BL/6雄性小鼠和SD大鼠分别随机分成2组,分别喂养蛋氨酸-胆碱充足(MCS)饲料(正常组)和蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饲料(模型组)。分别在各组中饲养3、5、8周后,取动物血清和肝脏。测定血清的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)的含量;肝脏切片后经HE染色,观察肝脏的病理形态学变化并对其病变程度进行评分。结果饲喂MCD饲料5周后,SD大鼠血清AST含量无显著变化(P>0.05),但是C57BL/6小鼠AST水平显著升高(P<0.05)。同时,SD大鼠和C57BL/6小鼠模型的血清ALT水平均显著升高(P<0.05),此外,SD大鼠和C57BL/6小鼠血清中TG和TC的水平均显著下降(P<0.05),肝组织的病理评分均出现显著升高(P<0.05)。但是C57BL/6小鼠血清AST、ALT的变化幅度及肝组织病理评分明显高于SD大鼠。结论 C57BL/6小鼠NASH模型优于SD大鼠NASH模型。C57BL/6小鼠NASH模型相对SD大鼠,更适合NASH的分子机制和防治药物的评价。

蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导代谢相关脂肪肝模型小鼠血清和肝脏胆汁酸谱的变化

背景:蛋氨酸-胆碱缺乏饮食模型是国际上被广泛使用的诱发代谢相关脂肪性肝病的动物模型,现有的相关研究数据中缺少该模型小鼠胆汁酸谱的动态变化,而胆汁酸的调节是干预肝脏脂质代谢的重要途径之一,因此有必要明晰该模型体内胆汁酸谱的变化。目的:探讨蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的代谢相关脂肪性肝病小鼠模型血清及肝脏中胆汁酸谱的变化。方法:将60只雄性C57/BL6J小鼠给予普通饲料适应性饲喂1周后随机分成2组,每组30只,其中一组为对照组给予蛋氨酸-胆碱充分饲料,另一组为模型组给予蛋氨酸-胆碱缺乏饲料喂养,自由摄食、饮水。分别于造模第4,6,8周末从两组中各随机抽取10只小鼠,收集小鼠血清和肝组织,检测各组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及肝组织中三酰甘油含量,肝脏组织切片分别作苏木精-伊红、油红O和天狼猩红染色进行病理学评估,采用超高效液相串联质谱法对血清及肝脏中18种胆汁酸含量进行测定。结果与结论:①不同造模时间动物样品检测结果发现,与同时期蛋氨酸-胆碱充分组相比,蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及肝内三酰甘油含量显著升高(P<0.05),蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠肝组织出现广泛肝细胞脂肪变性,窦周胶原纤维增加,非酒精性脂肪性肝病活性评分显著升高;②血清及肝脏胆汁酸谱检测结果发现,与同时期蛋氨酸-胆碱充分组相比,蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠血清中总游离型和总结合型胆汁酸以及除牛磺脱氧胆酸外的胆汁酸含量均呈上升趋势,胆酸/鹅去氧胆酸值显著升高;③与同期蛋氨酸-胆碱充分组相比,蛋氨酸-胆碱缺乏组肝脏中总游离型胆汁酸以及胆酸、甘氨胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺胆酸含量呈上升趋势,鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺石胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸含量呈下降趋势,甘氨脱氧胆酸含量随着造模时间延长呈先下降后上升趋势,脱氧胆酸、牛磺猪去氧胆酸含量基本不变,胆酸/鹅去氧胆酸值显著升高;④结果说明,蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的代谢相关脂肪性肝病小鼠模型血清与肝脏胆汁酸谱发生显著变化,尤其胆酸/鹅去氧胆酸比值的增高可能起到关键作用;提示蛋氨酸-胆碱缺乏模型引起代谢相关脂肪性肝病的进展与体内胆汁酸谱的变化及其毒性可能有密切关系。

大黄素加重蛋氨酸-胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪肝

目的研究大黄素(emodin)对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响。方法C57BL/6J小鼠随机分为3组,分别为添加蛋氨酸-胆碱饲料组(MCS)、MCD饲料联合DMSO注射组(MCD)、MCD饲料联合emodin注射组(MCD-emodin)。三组小鼠喂养相应饲料,10 d后,每天腹腔分别注射DMSO或emodin,连续注射20 d。HE染色观察肝脏病理改变;全自动生化分析仪检测血清谷氨酸氨基转移酶(ATL)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、碱性磷酸酶(ALP)和葡萄糖(GLU)水平;实时定量PCR技术检测肝脏白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果 HE染色显示,与MCS组相比,MCD饲料组引起明显的脂肪变性和炎性细胞浸润,且注射emodin后脂肪变性及炎性细胞浸润明显增加;与单纯MCD饲料组相比,emodin注射后,血清ALT和AST水平显著升高,IL-1β和IL-6的mRNA水平明显上升。结论 Emodin加重MCD饲料诱导的NAFLD。

下瘀血汤对胆碱蛋氨酸缺乏诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎的抑制作用

目的探讨下瘀血汤对胆碱蛋氨酸缺乏(methionine-choline-deficient,MCD)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的抑制作用。方法将24只雄性C57/BL6小鼠按照1∶2的比例随机采用蛋氨酸胆碱充足(methionine-choline-sufficient,MCS,8只)或MCD饲料喂养(16只)。造模第4周第1天,将采用MCD喂养的16只小鼠随机分为MCD对照组(简称MCD组,8只)及MCD-下瘀血汤(Xiayuxue decoction,XYXD)组(简称XYXD组,8只)。XYXD组小鼠按70 kg成人体重临床用量等体重的10倍量经口灌胃XYXD 3周,MCD对照组小鼠以等量无菌水灌胃,6周末取血清和肝组织,检测各组小鼠的肝功能、甘油三酯(triglyceride,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)水平。采用免疫印迹和RT-PCR检测核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体6(nucleotide-binding oligomerization-domain protein-like receptors protein 6,NLRP6)、簇分化抗原68(cluster of differentiation-68,CD68)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)及转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)等的表达。采用激光共聚焦检测CD68与NLRP6的共定位。结果与MCS组相比,MCD组小鼠血清ALT、肝内TG和TC水平显著升高(P <0.05),HE及油红染色结果表明:肝组织脂肪变明显,NAS评分显著升高;RT-PCR显示:MCD组小鼠巨噬细胞标志物CD68、MCP-1等炎症相关因子和TGF-β1等致纤维化因子m RNA的相对表达量显著升高(P <0.05);免疫印迹结果显示:MCD组小鼠NLRP6蛋白表达显著下调,而p-NF-κB p65水平显著上调;激光共聚焦结果显示MCD组小鼠NLRP6与CD68共定位显著降低。与MCD组相比,XYXD组小鼠的肝功能显著改善,肝组织炎症及纤维化反应显著降低,NLRP6下调被抑制。结论下瘀血汤对MCD诱导的小鼠NASH有显著改善作用;调控巨噬细胞NLRP6的表达是下瘀血汤改善NASH的作用机制之一。

绿茶水提物对蛋氨酸和胆碱缺乏饮食诱导的非酒精性脂肪肝炎小鼠的保护作用

为探究绿茶水提物对蛋氨酸和胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的非酒精性脂肪肝炎的药效作用及其作用机制,将40只C57BL/6小鼠随机分为空白组(MCS组)、MCD组、绿茶水提物低浓度组(0.15 g/kg)和高浓度组(0.30 g/kg)。小鼠饲喂MCD饲料,建立非酒精性脂肪肝炎模型,造模同时给予绿茶水提物进行干预。8周后,测定血清的谷丙酸转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度以及肝组织的甘油三脂(TG)和胆固醇(TC)浓度;油红染色检测肝组织脂肪堆积情况和HE染色对肝组织病理等级评定;Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和微管相关蛋白轻链3(LC3)表达水平。结果发现,与模型组相比,绿茶水提物显著降低小鼠血清AST、ALT、IL-6和TNF-α水平,其最大降幅分别约为38%、45%、46%、74%,并且可以降低肝脏TG、TC水平以及减少脂肪堆积面积,TG和TC的最大降幅分别约为44%和37%,同时改善肝组织的脂肪变性、炎症反应和细胞气球样变。Western blot显示,绿茶水提物降低GRP78蛋白水平,同时升高LC3-II的表达水平。因此,绿茶对MCD饮食诱导的非酒精性脂肪肝炎小鼠模型有明显保护作用,其作用机制可能与GRP78蛋白和LC3蛋白相关。

雷公藤红素对蛋氨酸-胆碱缺乏饮食致小鼠NASH的干预作用及机制研究

目的:研究雷公藤红素对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食致小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的干预作用及可能机制。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、模型组和雷公藤红素低、高剂量组[0.5、1 mg/(kg·d)],每组7只。正常对照组小鼠给予蛋氨酸-胆碱充足饮食,模型组和给药组小鼠给予MCD饮食以复制NASH模型;与此同时,正常对照组和模型组小鼠灌胃聚氧乙烯蓖麻油,各药物组小鼠灌胃相应药物,灌胃体积均为0.1 m L/g,每日1次,连续4周。观察各组小鼠肝脏形态,并采用苏木精-伊红染色和油红O染色法观察其肝组织的病理学变化;采用酶法检测血清肝酶[天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶]、血清和肝组织中脂质指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)]水平;采用Western blotting法检测小鼠肝组织中核因子κB p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠肝脏体积缩小且颜色泛黄,表面粗糙,肝组织中可见炎性细胞浸润以及脂肪空泡、脂滴聚集;其血清TC、TG水平均显著降低,血清肝酶水平以及肝组织中TG水平和NF-κB p65、TNF-α、IL-6蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各药物组小鼠肝脏表面红润光滑,无褐色斑点,肝组织中炎性细胞、脂肪空泡有所减少,脂滴覆盖面积有所缩小;其血清TC、TG水平均显著升高,血清肝酶水平以及肝组织中TG水平和NF-κB、TNF-α、IL-6(雷公藤红素低剂量组除外)的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:雷公藤红素能改善MCD饮食致NASH模型小鼠的肝损伤,其作用与减少肝组织中TG堆积、抑制炎症相关因子表达有关。

蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导非酒精性单纯性脂肪肝小鼠模型建立及动态观察

目的非酒精性单纯性脂肪肝(non-alcoholic simple fatty liver,NAFL)作为非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的早期阶段,发病隐匿、症状不典型,建立合适的动物模型对于研究NAFL的规律、改善诊断和治疗手段的意义重大.方法24只小鼠随机分为观察组(n=12)和对照组(n=12);观察组小鼠给予蛋氨酸-胆碱缺乏饮食(methionine-choline-deficient diet,MCDD)饲养3周,对照组给予正常饮食;动态观察小鼠的一般情况、按期称取体重;分别于第8、15、22天各处死4只观察组小鼠和对照组小鼠,后采集血清标本检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、甘油三酯(triglycerides,TG),肝脏标本处理后进行病理学诊断并进行评分量化.结果观察组小鼠一般情况、体重均有异于正常对照组,从第8天起小鼠即出现肝脂肪性变,而第8、15天小鼠的肝脏病理非酒精性脂肪性肝病活动度评分(non-alcoholic fatty liver disease active score,NAS)均在3~4分之间,与第22天比较差异具有统计学意义(t=2.601,P=0.04;t=3.57,P=0.019);血清中ALT、AST水平随造模时间的延长呈上升趋势,但各时间节点与对照组差异比较无统计学意义;TG的水平也随时间变化呈现增长趋势,且各时间节点均与对照组比较差异具有统计学意义,ALT水平与病理评分关系中等(r=0.574,P=0.032).结论MCDD诱导2周可形成稳定的NAFL动物模型,该动物模型出现显著的一般情况改变、体重下降、血脂升高.