分泌粒蛋白Ⅱ在结直肠神经内分泌肿瘤中表达情况和临床分析

目的探讨分泌粒蛋白Ⅱ(secretograninⅡ,SGⅡ)在结直肠神经内分泌肿瘤(colorectal neuroendocrine tumors,CRNETs)中的表达及诊断价值。方法采用免疫组织化学EnVision两步法检测SGⅡ、突触素(synapsin,Syn)、神经细胞粘附因子(neural cell adhesion molecule,CD56)、嗜铬素A(chromogranin A,CgA)及Ki-67在165例结直肠原发神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasms,NENs)及136例非神经内分泌肿瘤(non-neuroendocrine neoplasms,non-NENs)中的表达,比较神经内分泌标记表达的敏感度;并分析CRNETs中SGⅡ、Ki-67、CgA与临床病理特征的相关性。结果SGⅡ在CRNETs G1、G2、G3和NEC中的阳性率分别为97.2%(104/107),100%(40/40),100%(5/5),69.2%(9/13),高于non-NENs(1.47%,7/136)中的阳性率(P<0.05)。SGⅡ在CRNETs中的敏感度为95.8%(158/165),与Syn的98.8%(163/165)相当,高于CD56的84.2%(139/165)及CgA的33.9%(56/165),差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤直径、浸润深度、脉管侵犯、神经侵犯及淋巴结转移与SGⅡ的表达呈负相关,与Ki-67表达呈正相关,差异均有统计学意义(P<0.05),而CgA与以上肿瘤性状呈负相关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论SGⅡ在结直肠神经内分泌肿瘤中高表达,是鉴别诊断CRNETs比较可靠的标志物,其表达与肿瘤直径、浸润深度、脉管侵犯、神经侵犯及淋巴结转移呈负相关。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在AIS中的应用进展

急性缺血性脑卒中(AIS)是脑卒中最常见的类型,具有高发病率、高致残率、高病死率、高复发率等特征。抗血小板治疗一直是AIS急性期和二级预防的重要手段。传统的抗血小板药物,如阿司匹林、氯吡格雷,治疗AIS具有较好的临床效果,但由于可增加出血风险,限制了其临床应用。血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂是一类新型的抗血小板药物,可通过阻断血小板聚集的最终共同通路,发挥强效抗血栓作用。目前,阿昔单抗、替罗非班和依替巴肽三种GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂已被批准用于临床。GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂单独治疗,或联合静脉溶栓治疗,或联合血管内治疗,在预防AIS进展、抑制支架血栓形成、改善功能预后和降低病死率等方面均展现出了较好的临床效果。但GPⅡb/Ⅲa受体拮抗剂可能会导致血小板减少症和出血等并发症,治疗期间需密切监测血常规和凝血功能,以提高其用药安全性。

血栓形成机制及血小板膜糖蛋白ⅡbⅢ/a受体拮抗剂的研究进展

血小板膜糖蛋白(GP)ⅡbⅢ/a与纤维蛋白原的结合是血小板聚集的终末共同途径,因而GPⅡbⅢ/a受体拮抗剂可有效地预防血小板介导的血栓形成。本文对血栓形成的机制以及近年来GPⅡbⅢ/a受体拮抗剂在抗血栓方面的研究进展作一简要综述。

膜联蛋白Ⅱ在肺癌组织、肺泡灌洗液和胸腔积液中的表达水平及在肺癌诊断中的价值研究

目的探讨膜联蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)在支气管肺癌组织、肺泡灌洗液(BALF)和胸腔积液中的表达水平及在肺癌诊断中的价值。方法收集2010年10月—2011年10月兰州大学第一医院呼吸内科收治的肺癌伴胸腔积液患者60例(试验组)以及结核性渗出性胸腔积液患者60例(对照组)。对肺癌组织蜡块标本保留完整的48例患者的肺癌组织进行免疫组化染色,并收集该院病理科提供的18例正常肺组织蜡块标本,检测AnnexinⅡ在肺癌组织及正常肺组织中的阳性表达情况;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测试验组及对照组患者的BALF、胸腔积液中AnnexinⅡ的表达水平。结果肺癌组织中AnnexinⅡ的阳性表达率(62.5%,30/48)高于正常肺组织(16.6%,3/18),差异有统计学意义(P<0.05)。AnnexinⅡ在肺癌组织中的表达与患者的性别、吸烟与否、癌细胞分化程度及病理分型无关(P>0.05);与病理分期以及淋巴结转移有关(P<0.05)。试验组患者BALF、胸腔积液中AnnexinⅡ的表达水平高于对照组(P<0.05)。两组BALF中AnnexinⅡ的表达水平分别高于各自组内胸腔积液中AnnexinⅡ的表达水平(P<0.05)。结论 AnnexinⅡ在肺癌组织中的阳性表达率及在肺癌患者BALF、胸腔积液中的表达水平均较高,故AnnexinⅡ可作为肺癌诊断的良好标记物。

棉铃虫普通气味结合蛋白Ⅱ基因的表达及鉴定

通过PCR扩增的方法获得了棉铃虫普通气味结合蛋白Ⅱ (GOBP2 Harm)基因成熟蛋白阅读框序列 ,构建了GOBP2 Harm原核表达载体pGEX GOBP2 Harm ,并成功地在大肠杆菌中进行了表达。SDS PAGE分析表明 :大部分GOBP2 Harm重组蛋白形成不溶性的包涵体 ,超声波破碎大肠杆菌细胞后 ,在上清液中能检测到少量的可溶性GOBP2 Harm蛋白。为了获得大量纯化的可溶性目的蛋白 ,我们对包涵体进行了溶解和重折叠 ,并通过亲合层析法进行了纯化。纯化产物能与多音天蚕(Antheraeapolyphemus)GOBP抗血清发生交叉反应 ,证实表达产物属于昆虫普通气味结合蛋白。

肌球蛋白Ⅱ缺失细胞胞质分裂机制研究

哺乳动物细胞胞质分裂过程中伴随着一系列形态学改变,随着分裂沟不断收缩,形成连接两个子细胞的细胞间桥.间桥不断拉长、变细,直至断裂、生成两个子细胞.采用细胞力学和形态学测量及分析方法,通过施加肌球蛋白Ⅱ抑制剂,定量研究了NRK细胞间桥变细动力学;采用细胞免疫荧光技术,检测了早期胞质分裂肌动蛋白的分布,揭示肌球蛋白Ⅱ缺失细胞胞质分裂可能的机制.结果表明:施加肌球蛋白Ⅱ抑制剂的NRK细胞,其整体形态学和细胞间桥形态学曲线明显不同于0.3%DMSO组.根据流体力学特性和所测量的力学参数对曲线进行模拟发现,表面张力对肌球蛋白Ⅱ抑制组细胞的间桥动力学曲线轨迹影响很大.研究结果提示由细胞力学特性决定的拉普拉斯压力和细胞运动共同参与了肌球蛋白Ⅱ缺失细胞胞质分裂的调节.

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板释放反应的影响

【目的】观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)拮抗剂——四肽Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS)对血小板聚集和CD62p表达的作用,探讨RGDS对血小板聚集和释放反应的影响。【方法】检测二磷酸腺苷(ADP;终浓度5μmol/L,下同)诱导血小板聚集的最大聚集率(rPA,max)、静息血小板和ADP诱导的血小板CD62p表达,检测不同浓度RGDS对ADP诱导的rPA,max的抑制率和血小板CD62p表达的抑制率,进行回归分析。【结果】5种浓度(50、100、200、400、800μmol/L)的RGDS对rPA,max均有显著抑制作用。正常人静息血小板CD62p表达率为(3.5±0.6)%;ADP激动的血小板CD62p表达率为(65.6±13.8)%,两组比较有显著性差异(P<0.01);50、100μmol/L的RGDS对血小板CD62p表达无抑制作用;当RGDS浓度≥200μmol/L时(200、400、800μmol/L),其可抑制血小板CD62p的表达;RGDS对rPA,max的抑制作用和其对血小板CD62p表达的抑制作用相关。【结论】RGDS浓度<200μmol/L时,对ADP诱导的血小板释放反应无影响;RGDS浓度≥200μmol/L时,可抑制ADP诱导的血小板释放反应;与RGDS显著的抗聚集效应相比,其对血小板释放反应的影响比较小;RGDS抑制血小板释放反应的作用与其抗血小板聚集有关。

膜粘连蛋白Ⅱ通过保护血脑屏障促进小鼠颅脑创伤后早期神经功能的恢复

目的评估外源性重组膜粘连蛋白Ⅱ(annexin 2,A2)对创伤性颅脑损伤后血脑屏障以及早期神经功能预后的影响,探讨A2蛋白作为脑创伤治疗靶点的可能性。方法在成年雄性小鼠上建立控制性皮质损伤模型(controlled cortical impact,CCI),检测伤前与伤后不同时间点伤侧半球脑组织中内源性A2蛋白的表达。随后,小鼠CCI伤后通过尾静脉注射重组人源性A2蛋白,并检测血脑屏障通透性、大脑半球组织含水量、紧密连接蛋白表达量、海马区神经元数量、伤灶体积及早期行为学改变。结果从CCI后3 d起,A2蛋白表达明显增高,并在7 d时达到高峰(P<0.05),此后蛋白表达逐渐下降,21 d恢复到基值;伤前内皮细胞几乎不表达A2蛋白,伤后在伤侧部分内皮细胞表达A2蛋白。在伤后2 h给予重组A2蛋白能显著降低血脑屏障通透性从而降低脑组织中Evans蓝(Evans blue,EB)渗出量(P<0.05),增加ZO-1蛋白表达(P<0.05),减少伤后CA1和CA3区神经元丢失,CA1区和CA3区平均神经元存活数量分别为159.5和131,6,均显著高于对照组(P<0.05),并促进伤后7 d内运动功能康复(P<0.05)。能够减少致伤后脑组织含水量,但不具有统计学差异(P>0.05),两组间伤灶体积也无统计学差异(P>0.05)。结论在创伤性颅脑损伤早期,给予重组人A2蛋白能提高内皮细胞ZO-1合成,保护血脑屏障,减轻神经组织继发性损伤,促进伤后神经功能恢复。

苹果蠹蛾性信息素结合蛋白Ⅱ(CpomPBP2)基因的克隆及原核表达

【目的】获得苹果蠹蛾性信息素结合蛋白Ⅱ(CpomPBP2)基因的全长序列,并在大肠杆菌BL21(DE3)中融合表达,为探明苹果蠹蛾雌雄间的信息素交流机制奠定基础。【方法】提取苹果蠹蛾触角总RNA,利用RT-PCR、3′-RACE和5′TAIL-PCR扩增技术获得CpomPBP2基因的全长序列;通过构建原核表达载体pET28aCpomPBP2对CpomPBP2进行重组表达与检测;并对融合蛋白pET28a-CpomPBP2进行Western blot鉴定及可溶性鉴定。【结果】以苹果蠹蛾触角总RNA为模板合成cDNA第一链,以cDNA为模板经RT-PCR、3′-RACE和5′TAILPCR扩增,得到CpomPBP2基因约3 000bp的全长序列;测序结果表明,CpomPBP2基因开放阅读框长约510bp,编码169个氨基酸,预测的成熟蛋白分子质量为16.45ku,等电点(pI)为5.09。经SDS-PAGE电泳分析表明,融合蛋白CpomPBP2以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为20ku。Western blot鉴定结果显示,获得了目标蛋白CpomPBP2。用终浓度1.0mmol/L IPTG诱导8h后,可获得大量融合蛋白。【结论】获得CpomPBP2的全长序列,成功构建了CpomPBP2的原核表达载体,经Western blot鉴定,CpomPBP2表达正确。

冠状动脉联合静脉对比单一静脉给药途径应用血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂在急性ST段抬高型心肌梗死患者急性介入治疗中疗效与安全性的Meta分析

目的:系统评价不同给药途径应用血小板糖蛋白(GP)IIb/IIIa受体拮抗剂在急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者急性介入治疗中疗效与安全性的比较。方法:计算机检索PubMed、Embase、Cochrane图书馆、CNKI、VIPH和万方数据库,检索时间截止2014-03。纳入有关GP IIb/IIIa受体拮抗剂先冠状动脉(冠脉)后静脉给药组(冠脉联合静脉给药组)与单一静脉GP IIb/IIIa受体拮抗剂给药组(单一静脉给药组)的随机对照试验,由2名研究者对纳入文献进行评价和资料提取,根据Cochrane Handbook 5.0.2质量评价标准评价纳入研究质量。采用RevMan 5.0软件对数据进行合并。结果:最终纳入20个随机对照试验(共包括2 494例患者,包括冠脉联合静脉给药组1 258例,单一静脉给药组1 236例)。冠脉联合静脉给药组在经皮冠脉介入治疗(PCI)术后心肌梗死溶栓治疗临床试验3级血流、PCI术后心肌灌注分级3级、术后ST段完全回落、术后1个月主要心脏不良事件、梗死面积变化(P均<0.01)、术后1个月心绞痛发生、PCI术后1个月患者死亡、术后再次靶血管重建(P均<0.05)均优于单一静脉给药组,差异均有统计学意义。其中上述前5个指标有显著统计学差异(P<0.01);而两组在术后1周左心室射血分数、PCI术后1个月再次心肌梗死发生情况、术后出血、用药后血小板减少相似,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:冠脉联合静脉应用GP IIb/IIIa受体拮抗剂可提高在STEMI患者中的应用疗效,而并不提高术后出血、术后血小板减少的不良反应,故可作为一种有效安全的给药方式用于STEMI患者。

肌球蛋白Ⅱ在细胞有丝分裂中的力学作用

细胞骨架具有产生主动变形和抵抗被动变形的能力,该主动变形活动在细胞有丝分裂过程中起重要作用。有丝分裂通过一系列的形态变化使母细胞一分为二,整个过程都伴随着力学现象。肌球蛋白Ⅱ是一种多功能蛋白,参与细胞的有丝分裂。深入研究肌球蛋白Ⅱ在细胞有丝分裂中的作用具有重要的理论和应用价值。本文综合近期研究成果,对肌球蛋白Ⅱ在细胞有丝分裂中的作用做一综述。

抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ单链抗体库的构建及筛选

目的构建抗恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ(Histidine-rich protein Ⅱ,HRP-Ⅱ）单链抗体库，并筛选出阳性克隆。方 法用噬菌体抗体库技术构建抗恶性疟原虫ＨＲＰ－Ⅱ单链抗体库，并以ＨＲＰ－Ⅱ为靶抗原对该库进行了三轮“亲和吸附 一援救一感染扩增”的富集，挑取单菌落筛选并鉴定阳性克隆。结果获得目的基因并成功构建抗恶性疟原虫 ＨＲＰ－Ⅱ的 单链抗体库，库容为 １０６，并从中筛选出８株阳性克隆。结论 噬菌体抗体库技术具有高效的筛选性能，抗 ＨＲＰ－Ⅱ单链 抗体的制备为其在恶性疟的免疫快速诊断方法中的应用奠定了基础。

两种方法检测富组蛋白Ⅱ诊断恶性疟的比较

在海南疟区门诊对检测ＨＲＰ－Ⅱ诊断恶性疟的ＰａｒａＳｉｇｈｔ－Ｆ及ＩＣＴ两种方法进行了比较。ＰａｒａＳｉｇｈｔ－Ｆ方法的敏感度和特异度分别为１００％和８７．１％，ＩＣＴ则为９４．７％和９０．３％；两种方法均比显微镜检查简单易学，快速方便。但ＨＲＰ－Ⅱ仅存在于恶性疟。

绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9基因的扩增及表达

本试验旨在构建绵羊毛角蛋白Ⅱ型中间丝9(keratin typeⅡintermediate filament 9,KIFⅡ-9)基因cDNA的毛囊特异性表达载体,转染辽宁绒山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定表达外源基因并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过PCR扩增得到的KAP6-1基因启动子,然后与RT-PCR扩增得到的KIFⅡ-9 cDNA序列连接构成皮肤特异性表达载体pcDNA3.1-KK,将重组表达载体以脂质体介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得转基因细胞克隆,结果显示,外源KAP6-1启动子序列和KIFⅡ-9 cDNA整合到细胞基因组中,为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊提供了条件。

重组类人胶原蛋白Ⅱ的表达与纯化

研究了类人胶原蛋白Ⅱ在基因工程菌E.coliBL213.7中的表达与纯化。经高密度发酵及代谢调控,重组菌在12.8L发酵罐中的最终菌体密度约为150。菌体经高压匀浆破碎、沉淀、超滤、阳离子交换色谱纯化后,表达产物纯度达96.4%,总回收率71.6%。

破格救心汤对心衰大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa浓度的影响

研究破格救心汤对慢性心力衰竭(CHF)大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa)浓度的影响,探讨其治疗CHF的作用机制。采用阿霉素诱导法复制CHF大鼠模型,随机分为空白组、模型组和破格救心汤组。记录各组大鼠死亡情况和一般情况,并运用ELISA试剂盒检测各组大鼠的GP-ⅡbⅢa浓度。模型组大鼠死亡4只,破格救心汤组和空白组无死亡。模型组大鼠出现鼻唇紫绀、四肢末梢苍白、被毛粗糙变黄、进食减少、行动缓慢等。与模型组比较,破格救心汤组大鼠症状明显减轻,GP-ⅡbⅢa浓度明显降低(P<0.01)。破格救心汤能降低心衰大鼠GP-ⅡbⅢa浓度,减少血栓栓塞性疾病的发生率,这可能是其治疗CHF的作用机制之一。

小分子血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂用于急性冠脉综合征的经皮介入治疗Meta分析

目的系统评价小分子血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂(glycoproteinⅡb/Ⅲa inhibitors,GPI)用于急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)经皮介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)的疗效和安全性。方法计算机检索PubMed、EMBASE、OVID、CBM、CNKI、VIP等数据库,检索2012年7月31日前小分子GPI与安慰剂对ACS患者PCI疗效影响的所有随机对照试验(randomized controlled trials,RCTs),并同时追索纳入研究的参考文献。由2名评价者独立对纳入研究的质量进行评价和资料提取后,采用RevMan5.1软件进行Meta分析。结果共纳入10个RCTs共计9 518例进行PCI治疗的ACS患者。Meta分析结果显示,①与安慰剂相比,小分子GPI能降低7、30 d及6个月的主要不良心脏事件(major adverse cardiovascular event,MACE)发生率[7 d:RR=0.71,95%CI(0.55,0.94),P<0.05;30 d:RR=0.85,95%CI(0.73,0.98),P<0.05;6个月:RR=0.73,95%CI(0.55,0.99),P<0.05];降低30 d血运重建(target vesselrevascularization,TVR)发生率[RR=0.75,95%CI(0.58,0.96),P<0.05]及6个月的再次心肌梗死(myocardial infarction,MI)发生率[RR=0.67,95%CI(0.53,0.83),P<0.01]。但对于30 d死亡率﹑6个月死亡率、30 d MI及6个月血TVR,2组差异无统计学意义[30 d死亡率:RR=0.65,95%CI(0.41,1.04),P>0.05;6个月死亡率:RR=0.87,95%CI(0.58,1.32),P>0.05;30 d MI:RR=0.80,95%CI(0.65,1.00),P=0.05;6个月血TVR:RR=0.90,95%CI(0.79,1.02),P>0.05]。②与安慰剂相比,小分子GPI伴随更多的轻微出血[RR=1.60,95%CI(1.24,2.07),P<0.01]及严重出血事件[RR=1.44,95%CI(1.09,1.89),P<0.05]。但血小板减少症的发生率并没有统计学差异[RR=1.16,95%CI(0.63,2.14),P>0.05]。结论小分子GPI对于降低接受PCI治疗的ACS患者MACE发生率具有一定疗效,但也伴随更多出血事件的发生。

非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞中的作用

前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的抗独特型抗体特异性结合Marc-145细胞上的非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(Nonmuscle myosin heavy chainⅡ-A,NMHCⅡ-A)蛋白,其结合位点位于NMHCⅡ-A的羧基端。本研究通过真核表达NMHCⅡ-A的羧基端(PRA)蛋白,验证其对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达PRA蛋白。Western blot和间接免疫荧光鉴定PRA蛋白的表达及其与Marc-145细胞的结合。通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量PCR检测PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。Western blot和间接免疫荧光结果表明,PRA蛋白在真核细胞中得到成功表达,其最高表达量为接种1个MOI杆状病毒后96h时。PRA蛋白特异性结合Marc-145细胞,使PRRSV感染Marc-145细胞延迟24h并且感染效率降低60%。真核表达的NMHCⅡ-A羧基端蛋白能特异性结合Marc-145细胞并有效降低PRRSV的感染。这些结果为进一步阐明NMHCⅡ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用提供了新的依据。

房颤患者血小板膜糖蛋白Ⅱ_b/Ⅲ_a受体的变化及意义

目的 :探讨心房纤颤患者血小板膜糖蛋白 (GP)Ⅱb/Ⅲa 受体的变化及其临床意义。方法 :采用全血法流式细胞术(FCM )对 2 2例房颤患者静脉血中GPⅡb/Ⅲa 的含量进行检测 ,并与 2 6例窦性心律者对照。结果 :房颤患者血小板膜GPⅡb/Ⅲa 显著高于对照组 (P <0 .0 1) ;房颤患者中的持续房颤组高于阵发房颤组 (P <0 .0 1)。结论 :房颤引起血小板激活 ,激活程度可能与房颤持续时间有关。房颤患者处于血栓前状态。检测GPⅡb/Ⅲa 对评估房颤患者的栓塞危险性及指导抗凝、减少栓塞有重要意义。