柚皮素及其糖苷化合物对燕麦蛋白功能性质影响及相互作用机制研究

为探究柚皮素及其糖苷衍生物(柚皮苷和芸香柚皮苷)对燕麦蛋白的起泡性、乳化性、及界面张力的影响差异及相互作用机制。本文联合荧光光谱和圆二色谱明晰了燕麦蛋白-黄酮复合体系的相互作用机制及蛋白结构变化,最后通过分子模拟技术将复合体系的相互作用可视化。结果表明,柚皮素、柚皮苷及芸香柚皮苷显著提升了燕麦蛋白的起泡、乳化性能,降低了燕麦蛋白的界面张力,且糖苷类黄酮的效果更佳,即柚皮苷>芸香柚皮苷>柚皮素。荧光及分子模拟结果共同表明三种黄酮与燕麦蛋白主要通过氢键作用和范德华力发生相互作用,常温下,结合能力大小分别为芸香柚皮苷(11.05×10^(4)L/mol)>柚皮素(6.25×10^(4)L/mol)>柚皮苷(0.23×10^(4)L/mol)。三种黄酮改变燕麦蛋白的三级结构(荧光光谱红移)、二级结构(α-螺旋降低,β-折叠和无规则卷曲增加)、降低了表面疏水性,使得燕麦蛋白功能性质提升(起泡、乳化)。本研究可为选择合适的黄酮应用在燕麦蛋白基产品中提供理论参考。

基于荧光光谱法探究柿原花青素与黏蛋白的相互作用机制

为了解黏蛋白(Mucin)对柿原花青素肠道消化释放的影响,借助激光粒度仪、差示扫描量热仪、傅里叶红外光谱、荧光光谱等技术对柿原花青素-黏蛋白复合物的理化特征及两者相互作用机制进行分析。结果表明:复合物的粒径、电位绝对值与柿原花青素及其结构单元(ECG、EGCG)的浓度呈正相关关系;柿原花青素酚羟基的引入使得黏蛋白的热稳定性、表面疏水性随其浓度的增加而减少;红外光谱显示,氢键及游离的氨基参与两者反应;柿原花青素及其结构单元可以有效猝灭黏蛋白的内源荧光,以静态猝灭为主;根据Van’t Hoff方程获得的热力学参数∆G<0,∆H<0,∆S<0,表明柿原花青素及其结构单元与黏蛋白的结合是吉布斯自由能减少的自发反应,主要由氢键及范德华力驱动。综上所述,柿原花青素及其结构单元的添加诱导黏蛋白结构发生变化,其与黏蛋白主要通过氢键和范德华力发生强烈的相互作用,该研究为设计提高柿原花青素在肠道中生物利用率的智能递送系统提供参考依据。

8种多酚与花生球蛋白相互作用的研究

为探究花生球蛋白与8种常见多酚的相互作用,包括阿魏酸、白藜芦醇、橙皮素、儿茶素、槲皮素、姜黄素、没食子酸和杨梅素。采用紫外-可见光谱、荧光光谱分析8种多酚与花生球蛋白的相互作用规律,并探讨多酚对蛋白质结构、表面疏水性及溶解度的影响。紫外-可见光谱分析显示,8种多酚改变了花生球蛋白的氨基酸残基所处的微环境,使其分子构象发生改变;荧光光谱表明,多酚对花生球蛋白的猝灭机制均为静态猝灭;其中白藜芦醇和儿茶素与花生球蛋白结合率最高。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,儿茶素、杨梅素、没食子酸与花生球蛋白通过共价交联形成了大分子量的聚合物;傅里叶红外光谱表明,多酚使花生球蛋白的构象发生不同程度改变,其中大部分多酚使花生球蛋白的α-螺旋占比增大,最高增加到36.33%。多酚使花生球蛋白表面疏水性和溶解度均下降,最低分别降至19.92μg和51.7%。综上,8种多酚与花生球蛋白相互作用,不同程度地改变了花生球蛋白的构象和理化性质。该研究可为多酚与花生球蛋白的进一步加工利用提供科学依据及理论指导。

食叶草蛋白的提取工艺及其与乳化剂相互作用研究

采用超声波辅助纤维素酶法提取食叶草蛋白,并从多糖和脂质中选择最佳乳化剂与食叶草蛋白相互作用,以提高其稳定性。当纤维素酶添加量为33 U/g、料液比为1∶25(g/mL)、提取时间为60 min、提取温度为46.8℃、超声功率为150.4 W、超声时间为7.5 min时,食叶草蛋白提取率最高。食叶草蛋白-大豆卵磷脂的复合物(EPLC)最小粒径为154.6 nm,复合物粒径与分散性指数(PDI)为0.32;最小PDI为食叶草蛋白-壳聚糖复合物(EPCS),粒径为191.1 nm。EPLC的溶解度最好。傅里叶变换红外光谱(FTIR)与扫描电子显微镜(SEM)结果表明,食叶草蛋白与5种乳化剂形成了复合物,EPLC的效果优于其他4种复合物。综上所述,超声结合纤维素酶法可有效提高食叶草蛋白提取率,大豆卵磷脂与食叶草蛋白形成的复合物可有效改善其功能特性。

维生素C与藻红蛋白相互作用及其稳定性分析

藻红蛋白在光、热环境中的不稳定性是影响其在食品领域应用的难题。通过冻融法提取藻红蛋白(phyco-erythrin,PE),研究维生素C(vitamin C,V_(C))与藻红蛋白的相互作用及其对藻红蛋白的保护作用。荧光光谱结果表明,V_(C)可诱导PE荧光淬灭,V_(C)与PE的化学计量数n为23.63296±4.29735,结合常数K为(2.00695±0.59045)×10^(5) L/mol,表明V_(C)与PE的结合涉及范德华力和氢键等弱相互作用。扫描电子显微镜及动态光散射显示V_(C)可诱导PE分子聚合成更致密结构,形成更大的聚集体,并且V_(C)显著提高PE在自然光照处理、热处理(40~70℃)、不同pH值(3.0~11.0)处理下的稳定性,揭示活性分子V_(C)对藻红蛋白的稳定性具有重要提升作用。

非洲猪瘟病毒结构蛋白与宿主蛋白相互作用研究进展

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染所引起的一种家猪和各种野猪急性出血的传染性疾病,由于高发病率和高致死性的特性对全球家猪养殖产业造成严重的经济损失。ASFV编码蛋白高达150多种,而ASFV结构蛋白作为病毒粒子的主要组成部分,在协助病毒吸附入侵宿主细胞、促进子代病毒颗粒复制、组装以及释放等过程发挥着重要作用。研究表明,病毒结构蛋白可通过与宿主蛋白的相互作用,促进病毒入侵、增殖、影响病毒毒力以及拮抗宿主免疫反应等。因此,本文通过概述ASFV结构蛋白与宿主蛋白的相互作用及其机制,为研究ASFV的致病机制以及ASF的防治提供参考。

小分子与蛋白质相互作用研究的新方法-PELSA

小分子-蛋白质相互作用在生命活动中发挥着重要作用,广泛参与几乎所有的生物学过程。蛋白质与小分子配体(如药物、代谢物、金属离子和核酸等)的结合能够调控蛋白质的结构、功能及其生物学活性。因此,研究蛋白质-小分子相互作用对于药物开发、生物分子功能解析及疾病机制研究都具有重要意义。然而,与蛋白质-蛋白质互作相比,研究小分子-蛋白质互作的有效工具则明显不足。例如,如何规模化筛选小分子的蛋白靶标并实现其精准鉴定至今仍是一项非常有挑战性的任务。

壳聚糖改性青稞醇溶蛋白及相互作用分析

该研究旨在通过壳聚糖改善青稞醇溶蛋白的功能性质,并具体探究壳聚糖-青稞醇溶蛋白复合物形成的机理和内在相互作用。采用浊度滴定法对壳聚糖-青稞醇溶蛋白复合物的形成过程进行了分析,并通过傅立叶红外光谱和荧光光谱测定了内在相互作用力,此外还对添加壳聚糖前后,青稞醇溶蛋白的乳化性、起泡性和疏水性进行了测定。结果表明,壳聚糖与青稞醇溶蛋白形成可溶性复合物和不溶性复合物的相点分别为3.1和3.3,主要驱动力是疏水相互作用和氢键,同时还存在静电相互作用。壳聚糖的添加还使青稞醇溶蛋白乳化活性和乳化稳定性得到增强,泡沫稳定性和表面疏水性均得到不同程度的改善,而在pH 4.0,壳聚糖与青稞醇溶蛋白质量浓度比接近1∶40时两者的相互作用最强,改性效果也最好。该研究利用壳聚糖与青稞醇溶蛋白之间的相互作用,显著改善了青稞醇溶蛋白的功能性质,为青稞醇溶蛋白在食品工业中更好的应用提供了一定的理论基础。

环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3在三阴性乳腺癌细胞侵袭中的作用及机制

目的:研究环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞侵袭中的调控作用及机制。方法:收集2022年1月—2023年6月手术切除的TNBC组织及对应癌旁组织各40例、非三阴性乳腺癌组织及对应的癌旁组织各40例,采用荧光定量PCR法(qPCR)检测circHIPK3的表达水平。同时培养人正常乳腺上皮细胞株MCF10A,非三阴性乳腺癌细胞株MCF-7、SK-BR-3,TNBC细胞株HCC1806、MDA-MB-231、HCC-70,采用qPCR检测circHIPK3的表达水平,依据其表达水平,筛选出circHIPK3表达水平最高的MDA-MB-231细胞用于后续试验。筛选出敲低circHIPK3效果最显著的siRNA序列,然后将circHIPK3 siRNA和miR-485-3共转染MDA-MB-231细胞,采用qPCR检测circHIPK3、miR-485-3p的表达,采用Western blot法检测FGF2的蛋白表达,Transwell侵袭试验检测细胞侵袭数目。结果:乳腺癌组织中circHIPK3的相对表达水平高于对应的癌旁组织(P<0.05);TNBC组织中circHIPK3的相对表达水平高于非三阴性乳腺癌组织(P<0.05);TNBC细胞株中circHIPK3的相对表达水平高于非三阴性乳腺癌细胞株和正常乳腺癌上皮细胞株(P<0.05),且MDA-MB-231细胞中circHIPK3的表达水平高于HCC1806、HCC-70细胞(P<0.05);与转染siRNA对照序列的细胞比较,转染circHIPK3 siRNA的MDA-MB-231细胞中circHIPK3、FGF2蛋白的表达水平及细胞侵袭数目降低,miR-485-3p的表达水平升高(P<0.05);与转染miRNA对照序列的细胞比较,转染miR-485-3p抑制物的MDA-MB-231细胞(与circHIPK3 siRNA共转染)中miR-485-3p的表达水平降低,FGF2蛋白的表达水平及细胞侵袭数目增加(P<0.05)。结论:circHIPK3促进TNBC细胞侵袭,其可能的机制为通过抑制miR-485-3p的表达进而促进FGF2蛋白的表达。

基于TurboID邻近蛋白标记技术鉴定细胞内Smad3相互作用网络

目的利用生物素标记酶TurboID介导的邻近标记技术,筛选并构建转录因子Smad3的活性调控网络。方法构建一个含有Smad3和TurboID基因序列的诱导型表达质粒,并通过慢病毒介导的转染方法将其导入Smad3敲除的肾小管上皮细胞TCMK1中,形成过表达的稳定转染细胞系。在建立稳定转染细胞系的基础上,首先确定了适合的生物素标记浓度和时间,随后进行了生物素标记实验。通过链霉亲和素磁珠对带有生物素标记的蛋白复合物进行富集和纯化,随后进行蛋白质谱分析,并筛选出与Smad3相互作用的候选蛋白。结果在Smad3敲除的肾小管上皮细胞TCMK1中成功构建了Smad3-TurboID诱导型过表达稳转细胞株。经过生物素标记实验优化,最终确定的生物素浓度和标记时间为25μm和20 min。质谱结果分析筛选出一系列潜在和Smad3相互作为候选蛋白,例如Yap1和Stat3。结论结合生物素标记酶TurboID介导的邻近标记技术,本研究成功地鉴定了大量可能与Smad3相互作用的候选蛋白。这些发现为后续深入研究Smad3蛋白的功能及其在细胞内的调控网络提供了理论基础。通过这些互作蛋白的识别和功能分析,将有助于更全面地理解Smad3的生物学作用。

三氯生与牛血红蛋白相互作用机理的研究

采用荧光光谱法、紫外-可见吸收光谱法、圆二色谱法等多种光谱学方法并结合分子对接模拟,在分子水平上研究了三氯生(TCS)与运输蛋白牛血红蛋白(BHb)之间的相互作用机理。实验结果表明:TCS会对BHb产生荧光猝灭效应,该猝灭由TCS与BHb之间的静态结合作用引起;TCS与BHb的结合作用力主要为疏水力,二者结合的比例约为1∶1,该结合过程是自发进行的;TCS对BHb中色氨酸和酪氨酸等氨基酸的微环境产生了影响,使BHb整体的蛋白质骨架结构变得松散;TCS对BHb的蛋白质二级结构产生影响,导致α螺旋含量增加,β折叠含量减少。分子对接模拟研究结果表明,TCS结合在BHb的中央疏水空腔处,二者之间存在氢键作用。

新型受体相互作用蛋白1激酶抑制剂的动物药动学和药效学研究

目的对新型受体相互作用蛋白1(RIP1)激酶抑制剂的体内外生物活性及药动学进行初步研究,为后续新药开发提供参考。方法以GSK2982772为阳性参照,通过ADP-Glo方法评估新型RIP1激酶抑制剂对重组人源与鼠源RIP1激酶的抑制活性;采用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和凋亡抑制剂(Q-VD-OPh)建立细胞坏死模型,评估RIP1激酶抑制剂对人组织淋巴瘤细胞(U-937)与小鼠成纤维细胞(L-929)坏死抑制水平;考察RIP1激酶抑制剂经小鼠静脉及口服给药后的药动学;小鼠静脉注射m TNF-α诱导全身性炎症反应综合征(SIRS),口服给予RIP1激酶抑制剂通过防止体温损失评估治疗炎症的效果。结果新型RIP1激酶抑制剂RIPK1-093、095、106对重组人源RIP1激酶抑制活性(4.55、7.38、10.93nmol/L)与阳性参照化合物(18.93 nmol/L)相当,对重组鼠源RIP1激酶抑制活性(5.70、8.44、70.58 nmol/L)优于阳性参照化合物(2035.00 nmol/L);对U-937细胞抑制坏死活性(4.92、2.95、6.84 nmol/L)与阳性参照化合物(5.37nmol/L)相当,对L-929细胞抑制坏死活性(8.59、6.54、41.34 nmol/L)优于阳性参照化合物(489.40nmol/L);在小鼠药动学研究中,具有低清除率(P<0.05),且口服暴露量显著提高(P<0.05),其中RIPK1-106口服暴露量提升约4倍;在SIRS模型中,口服治疗10mg/kg剂量组显示,6h时体温损失与阳性参照化合物相当,24h显著抑制体温损失(P<0.05),3 mg/kg剂量组显示,6 h体温损失显著减小(P<0.05),且24 h显著改善动物死亡率。结论新型RIP1激酶抑制剂的体内外活性和药动学的特点,可以作为治疗炎症性和自身免疫性疾病的新药进一步开发研究。

环氧虫啶与人血清白蛋白的相互作用

新烟碱类杀虫剂环氧虫啶对非靶标生物具有潜在危害,但对其毒理机理、其在人体内的运输机制等方面缺乏研究。本研究运用荧光光谱法、分子对接、分子动力学、结合自由能计算和丙氨酸扫描等方法,研究了环氧虫啶与人血清白蛋白(HSA)的结合模式。结果表明:1)环氧虫啶能有效猝灭HSA荧光,不同温度下环氧虫啶与HSA的结合常数在0.76×10^(5)~1.57×10^(5)L/mol之间,具有较强的结合能力;2)环氧虫啶结合在HSA的IIA疏水腔内,有1个结合位点;3)结合自由能分析和热力学参数计算显示,环氧虫啶和HSA结合的主要作用力是范德华力和氢键作用;4)分子动力学模拟结果显示,二者结合自由能为-25.90 kJ/mol,形成了相对稳定的复合物;5)丙氨酸突变扫描结果显示,氨基酸残基Gln459是环氧虫啶与HSA结合的关键氨基酸。该研究结果可为阐明环氧虫啶在人体内的毒性机理提供理论依据。

酚酸与蛋白质和碳水化合物相互作用及对面包面团的影响研究进展

近年来,研究人员常利用食品各组分之间的相互作用调节其感官性状和功能特性。酚酸、蛋白质和碳水化合物三者在面食制品中广泛存在并发挥着重要作用。目前为止,研究主要集中在酚酸-蛋白质和酚酸-碳水化合物的相互作用,以及二者相互作用在食品加工、机体保健等方面的应用。酚酸、蛋白质、碳水化合物所构成的三元体系中伴随着复杂的相互作用,这些相互作用能够赋予面食制品不同的感官性状和功能特性。本文主要介绍了酚酸、蛋白质和碳水化合物三者间的相互作用及其影响面包面团感官特性和功能特性等的研究进展,以期为酚酸、蛋白质和碳水化合物组成的三元体系在面食制品中的应用提供理论指导。

外周血受体相互作用蛋白激酶3、混合系列蛋白激酶样结构域水平与新生儿坏死性小肠结肠炎病情严重程度的关系

目的分析新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)患儿外周血受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)、混合系列蛋白激酶样结构域(MLKL)的表达情况及其与病情严重程度的关系。方法选取92例NEC患儿纳入NEC组,并根据病情严重程度进一步分为轻度NEC组(Ⅰ级)60例和重度NEC组(Ⅱ~Ⅲ级)32例,另选取同期诊治的60例腹股沟斜疝患儿纳入对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测外周血RIPK3 mRNA、MLKL mRNA表达;采用Pearson相关分析法明确NEC组外周血RIPK3 mRNA与MLKL mRNA表达的相关性;采用免疫印迹法检测NEC回肠组织和正常回肠组织中RIPK3、MLKL蛋白表达;采用多因素Logistic回归分析明确重度NEC发生的独立危险因素。绘制受试者工作特征曲线,分析外周血RIPK3 mRNA、MLKL mRNA单独及联合预测重度NEC的价值。结果NEC组外周血RIPK3 mRNA、MLKL mRNA相对表达量分别为(2.41±0.52)、(3.03±0.64),高于对照组的(1.02±0.21)、(0.93±0.20),差异有统计学意义(P<0.001)。NEC回肠组织中RIPK3、MLKL蛋白相对灰度值分别为(1.20±0.21)、(1.13±0.24),高于正常回肠组织的(0.34±0.12)、(0.32±0.11),差异有统计学意义(P<0.05)。NEC组患儿外周血RIPK3 mRNA与MLKL mRNA相对表达量呈正相关(r=0.623,P<0.001)。重度NEC组合并气腹征、多器官功能障碍综合征、败血症者占比和RIPK3 mRNA、MLKL mRNA相对表达量均高于轻度NEC组,差异有统计学意义(P<0.05);RIPK3 mRNA、MLKL mRNA相对表达量升高是重度NEC发生的独立危险因素(P<0.05)。外周血RIPK3 mRNA、MLKL mRNA联合预测重度NEC的曲线下面积大于RIPK3 mRNA、MLKL mRNA单独预测(Z=4.127、4.261,P<0.05)。结论RIPK3 mRNA、MLKL mRNA在NEC患儿外周血中表达升高,两者均与NEC病情严重程度有关,且两者联合检测对重度NEC具有较高的预测价值。

多光谱法和分子对接模拟法研究茶碱和胃蛋白酶的相互作用

在模拟生理条件下,通过紫外可见吸收光谱法、傅里叶红外光谱、荧光光谱、三维荧光光谱、同步荧光光谱、圆二色谱等方法以及分子对接模拟法对茶碱(TPL)与胃蛋白酶(PEP)的结合机理进行了研究,在分子层面探讨TPL与PEP相互作用的机制,有助于对TPL的药理毒性、药效进行深入研究。根据Stern-Volmer方程,计算在298、 303和308 K三种温度下TPL对PEP的动态荧光猝灭速率常数Kq远大于最大动态荧光猝灭常数2.0×10^(10)L·(mol·s)^(-1),证明TPL对PEP的猝灭方式为静态猝灭。随着TPL浓度的不断升高,PEP的动态猝灭常数Ksv呈规律性下降趋势,TPL可以有效对PEP的内源荧光进行猝灭,进一步判定作用机制为静态猝灭。三维荧光图谱分析表明,体系中随着TPL浓度的不断升高,PEP中代表色氨酸残基与酪氨酸残基以及肽链骨架结构的荧光强度峰值明显降低,且峰位发生红移,表明TPL对PEP的二级结构产生影响。同步荧光图谱分析表明TPL与PEP结合时,主要集中在色氨酸的残基上。红外光谱表明TPL引起PEP内官能团伸缩振动,使PEP的二级结构发生改变。紫外吸收光谱表明随着混合体系中TPL浓度增大,吸收峰峰值逐渐增大,表明TPL可以改变PEP的二级结构。分子对接模拟法表明,TPL与PEP中氨基酸残基GLU13、 VAL30、 TRP39、 GLY76、 GLY78、 PHE117的结合作用力为范德华力,与氨基酸残基THR77、 GLY217形成氢键,与氨基酸残基TYR75、 LEU112、 ILE120、PHE111之间存在疏水作用力,证明两者主要通过范德华力与氢键结合,进一步证明TPL改变了PEP的二级结构。圆二色谱分析显示PEP中β-折叠的占比从50.2%下降至48.8%, α-螺旋结构的占比从8.1%上升到8.4%;β-转角的占比从18.3%上升到18.7%;无规则结构的占比从29.1%上升到29.2%,表明TPL改变了PEP的二级结构。实验研究结果有助于了解TPL与PEP的结合作用机制,为TPL的使用及研究提供了数据依据。

基于光谱法及分子对接技术的猪血红蛋白与儿茶素相互作用研究

为增强猪血红蛋白(PHb)结构的稳定性,提高其应用价值,将天然抗氧化剂儿茶素(C)与PHb进行互作,以期稳定PHb的结构。采用紫外可见光谱、荧光光谱、傅里叶红外光谱和扫描电镜研究C与PHb的相互作用,并通过分子模拟对接技术表征儿茶素-猪血红蛋白复合物(C-PHb)的形貌和结构。结果表明,添加C前后,PHb的紫外吸收光谱发生明显变化;荧光光谱结果表明,C能有效猝灭PHb内源荧光且为自由发生的静态猝灭,猝灭常数(Kq)为7.5×10^(10)L·mol^(-1)·s^(-1),作用力主要为范德华力、氢键和疏水作用力。同时,相较于PHb,C-PHb的蛋白质二级结构发生改变,表现为β-折叠含量增高,α-螺旋、β-转角和无规卷曲含量降低。此外,分子对接模型进一步验证了C可与PHb进行相互作用。综上,C可与PHb互作以稳定其结构。本研究可为制备具有抗氧化性质的PHb复合物提供理论支持和可行性依据。

光谱法分析人参皂苷Rb3与牛血清白蛋白的相互作用

目的 研究人参皂苷Rb3(GSRb3)与牛血清白蛋白(BSA)的分子作用机制。方法 在模拟生理条件下,应用荧光光谱、吸收光谱和拉曼光谱测定了GSRb3与BSA的相互作用机理、主要作用力类型、热力学参数和作用位点等。结果 GSRb3引起BSA荧光淬灭的机制为联合淬灭。热力学分析的结果表明范德华力和氢键是GSRb3和BSA分子之间的主要作用力。拉曼光谱结果表明GSRb3与BSA的色氨酸残基结合。结论 GSRb3与BSA之间相互作用形成复合物,该研究为进一步理解GSRb3与生物大分子的相互作用提供理论基础。

蛋白激酶C相互作用蛋白1基因敲除诱导神经元氧化应激

目的 研究蛋白激酶C相互作用蛋白1(PICK1)敲除对神经元氧化应激反应的影响,从而明确PICK1在神经元氧化应激反应中的作用。方法 剪取小鼠尾巴1 cm,匀浆后提取DNA和蛋白质,利用PCR和Western blot鉴定野生型小鼠和PICK1敲除鼠的基因型。利用ELISA检测试剂盒,检测野生型和PICK1敲除小鼠脑组织中活性氧簇(ROS)和谷胱甘肽(GSH)的水平。硝基酪氨酸(Nitrotyrosine)是氧化损伤标志因子,利用Western blot及免疫荧光染色方法,检测小鼠脑内Nitrotyrosine与神经元的标记物MAP2。结果 成功鉴定出野生型鼠、PICK1基因杂合子小鼠和纯合子小鼠。PICK1敲除小鼠脑内的氧化应激因子ROS (P<0.05)和Nitrotyrosine水平显著升高(P<0.05),而抗氧化应激因子GSH明显下降(P<0.05)。Nitrotyrosine与MAP2免疫荧光共染结果显示,PICK1敲除的小鼠中神经元细胞存在氧化损伤。结论 PICK1基因敲除导致了小鼠神经元的氧化应激反应,提示PICK1可能是抑制神经元氧化应激的一个靶点。

基于光谱技术的多糖与蛋白质相互作用研究

为揭示大分子拥挤剂葡聚糖-70(dextran-70)对蛋白质构象和微环境的影响,利用紫外光谱、荧光光谱、同步荧光、荧光量子产率及微流变等技术手段,研究葡聚糖-70添加后溶菌酶(Lys)、牛血清白蛋白(BSA)、β-乳球蛋白(BLG)微观构象的变化。结果表明,添加葡聚糖-70会改变蛋白,尤其是BLG蛋白的三级结构;葡聚糖-70引起蛋白质氨基酸微环境的变化,使蛋白质更趋向于疏水环境;荧光光谱显示,葡聚糖-70会导致蛋白质内源性荧光的猝灭,同时色氨酸和酪氨酸残基移向更加疏水的环境;葡聚糖-70对蛋白质量子产率的影响较小,对Lys的影响更为明显;微流变结果显示,随着葡聚糖-70浓度的增加,混合体系的复数模量和复数粘度增加、蛋白质分子运动速度减慢,可能是蛋白质与葡聚糖-70之间的相互作用所致。本研究结果可为蛋白质和多糖类食品体系的结构设计提供技术支持。