质谱蛋白全谱分析和指纹分析

质谱蛋白全谱分析和指纹分析可用于鉴别蛋白。应用酶或化学切解、修饰及序列反应，并与液相色谱或串级质谱联用，可给出进一步的结构信息，从而测定蛋白的组分、蛋白一级结构、表征序列、测定蛋白修饰位、基因变异位及缺失位，这两种方法可用于医疗诊断。

质谱筛选与H5、H7亚型流感病毒HA蛋白互作的宿主膜蛋白及其GO分析

为了筛选与H5、H7亚型流感病毒HA蛋白互作的宿主膜蛋白,本研究根据H7亚型流感病毒AH1株与H5亚型流感病毒FJ1160株的HA基因序列设计引物,分别PCR扩增两株流感病毒的HA基因,连接至pCAGGS载体,分别构建了H5、H7亚型流感病毒模式病毒株的HA蛋白真核表达质粒pCAGGS-HA-AH1与pCAGGS-HAFJ1660。将pCAGGS-HA-AH1、pCAGGS-HA-FJ1660分别转染HEK-293T细胞,经培养后提取细胞膜蛋白,利用免疫沉淀(IP)试验筛选与HA蛋白互作的宿主膜蛋白。质谱(shotgun)分析结果显示,有35种宿主膜蛋白同时与H5、H7亚型流感病毒HA蛋白存在相互作用。进一步进行基因本体论(GO)分析,结果显示这35个候选膜蛋白主要作为细胞膜及细胞器膜的组分与其他蛋白或离子结合,以介导生物调控及代谢等过程。为了验证筛选结果的可靠性,利用qPCR对代表性基因ATPAP2、DYNLL1、RAB7A进行检测,结果显示代表性基因ATPAP2、DYNLL1、RAB7A在293T细胞中均有表达,与预测相符。本研究首次筛选得到与两种亚型流感病毒HA蛋白同时存在相互作用的宿主膜蛋白,为进一步对宿主蛋白与流感病毒HA蛋白相互作用机制的研究提供基础数据。

质谱技术在蛋白质组研究中的应用

电喷雾电离 (ESI)和基质辅助激光解吸电离 (MALDI)是最近发展起来的生物质谱技术 ,本文概述生物质谱技术在蛋白质组研究中分子质量的测定、蛋白质全谱分析、肽指纹谱测定、肽序列测定等方面的应用。方法灵敏、准确、快速 ,而且可实现高通量和自动化。它们已成为蛋白质组研究的关键性支撑技术 。