血清学检测中蛋白凝集现象的鉴定及特征分析

目的对各类产生蛋白凝集的患者血样进行调查研究,为临床解决蛋白凝集造成的检测困难提供帮助。方法对2006-2015年本实验室84例蛋白凝集案例进行总结,分析血清学试验结果,包括盐水置换试验及显微镜观察影像。结果临床上导致蛋白凝集的疾病主要是多发性骨髓瘤,绝对数(占41%);又以30岁以上的男性居多,男性绝对数(占67%),30岁以上患者绝对数(占99%)。蛋白凝集主要以团块状为主,绝对数(占62.5%),凝集强度主要低于1+。结论蛋白凝集最常见于多发性骨髓瘤,但与多种疾病可能存在关联性,蛋白凝集之间也存在凝集形态上的明显差异。通过显微镜观察,血清或血浆中加入盐水后反应以及结合临床诊断的方法,可有效解决蛋白凝集造成的临床检测困难。

唾液酸结合性免疫球蛋白凝集素6的生物信息学分析及多克隆抗体制备

目的表达并制备唾液酸结合性免疫球蛋白凝集素6(Siglec-6)的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。为下一步探讨Siglec-6在介导细胞信号转导和调节造血细胞及免疫细胞的功能,研究其在免疫调节和炎症反应中的作用奠定基础。方法通过生物信息学分析方法预测Siglec-6蛋白的跨膜结构、理化特性、疏水性等因素,设计出两个多肽,两个多肽各自与血蓝蛋白(KLH)交联后对新西兰兔进行免疫,结果发现这两个多肽均可作为抗原免疫生物试剂,并成功获得高效价的抗Siglec-6多克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其效价,经过亲和层析纯化,用Western blotting测定抗体的特异度。结果通过ELISA检测其效价分别为1∶51200和1∶12800,Western blot结果表明该方法所制备的抗体具有特异度。结论该研究通过生物信息学方法成功预测了抗原表位,并据此预测成功制备了高效价、高特异度的抗Siglec-6多克隆抗体。

异常蛋白凝集干扰交叉配血提示确诊1例多发性骨髓瘤

多发性骨髓瘤(MM)是一种克隆性浆细胞异常增殖的恶性疾病,是血液系统排名第二位的恶性肿瘤,多发于老年人。常见症状为骨髓瘤相关器官功能损害,即血钙增高、肾功能损害、贫血、出血、骨病及淀粉样变性等靶器官损害相关表现[1],MM临床表现多样、缺乏特异性,易造成误诊或漏诊[2,3]。因出血或严重贫血的MM患者常需要输血治疗,输血前进行ABO/RhD血型鉴定,抗体筛查和交叉配血,是临床安全、有效输血的保障[4]。

急性冠脉综合征患者氧化低密度脂蛋白凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1的水平变化

目的观察不同类型冠心病患者血中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)水平的变化及其之间的关系,探讨临床预测急性冠脉综合征(ACS)的血清学指标。方法采用酶联免疫吸附法测定40例冠心病患者[ACS20例、稳定型心绞痛(SAP)20例]、20例非冠心病患者血清ox-LDL、LOX-1的变化。结果ACS患者外周血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、ox-LDL、LOX-1水平均高于SAP和非冠心病患者;SAP患者外周血清ox-LDL、LOX-1高于非冠心病患者。ACS患者治疗后ox-LDL、LOX-1水平均低于治疗前。ACS患者LOX-1与ox-LDL呈正相关(P<0.01)。结论ACS患者外周血清ox-LDL、LOX-1水平升高,二者可作为动脉粥样硬化斑块不稳定的血清学指标。

内凝集蛋白1在卵巢癌中的生物信息学分析及体外抗增殖作用研究

目的分析内凝集蛋白1(ITLN1)在卵巢癌中的生物信息学信息及其体外抗增殖作用。方法2021年3月至2022年3月,采用基因表达数据库(GEO)来分析筛选卵巢癌组织中的差异基因。利用基因表达谱交互分析工具(GEPIA)来分析ITLN1在卵巢癌肿瘤组织与正常组织中的表达水平。利用癌症基因组图谱-基因型组织表达(TCGA-GTEx)数据制作受试者操作特征曲线(ROC曲线),利用Kaplan Meier-plotter分析ITLN1低表达或高与卵巢癌病人总生存率的曲线关系。利用LinkedOmics筛选ITLN1在卵巢癌中的相关基因,然后采用京都基因与基因组数据库(KEGG)进行通路富集分析。细胞实验分组:空载体对照组(vector),TLN1过表达载体组(TLN1),ITLN1+740 Y-P组。通过蛋白质印迹法检测ITLN1、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)以及磷酸化Akt(p-Akt)在卵巢癌细胞中蛋白表达水平。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法与细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖。结果ITLN1在卵巢癌组织(0.45±0.17)和人卵巢癌细胞株A2780(0.72±0.08)、CAOV3(0.57±0.05)、SKOV3(0.44±0.08)中的表达量均显著降低(P<0.05)。并且,ITLN1在卵巢癌中具有诊断价值(ROC曲线下面积为0.88),ITLN1高表达组的卵巢癌病人总生存率高于ITLN1低表达组(风险比0.74,P<0.05)。ITLN1通过抑制PI3K/Akt信号通路从而降低卵巢癌细胞的增殖能力(0.55±0.02)。结论ITLN1表达水平可以成为卵巢癌病人的预后判断标志物,是潜在的卵巢癌治疗的靶点。这为卵巢癌的分子靶向治疗提供了新的理论基础。

唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨免疫检查点唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15(Siglec-15)在食管鳞癌中的表达及意义。方法免疫组化检测食管鳞癌组织、癌旁正常食管组织中Siglec-15表达情况,并比较分析其与食管鳞癌患者临床病理特征的关系。结果Siglec-15在食管鳞癌组织中表达阳性率为60.0%(48/80),高于癌旁正常食管组织中的23.75%(19/80)(χ^(2)=21.595,P<0.001)。食管鳞癌组织中Siglec-15蛋白表达与患者肿瘤直径、T分期、TNM分期、N分期及分化程度有关(χ^(2)=7.500,P=0.006;χ^(2)=10.342,P=0.001;χ^(2)=22.547,P=0.016;χ^(2)=20.508,P<0.001;χ^(2)=12.586,P=0.002)。结论Siglec-15在食管鳞癌组织中高表达,与患者的疾病进展显著相关。

血清凝集蛋白-1、可溶性基质裂解素2、单核细胞趋化蛋白1对心肌梗死患者经皮冠脉介入术后并发心力衰竭的预测价值

目的探讨心肌梗死(MI)患者经皮冠脉介入术(PCI)术后并发心力衰竭(HF)的影响因素及血清凝集蛋白-1(ITLN-1)、可溶性基质裂解素2(sST2)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的预测价值。方法将郑州大学第一附属医院2021年1月至2022年6月收治的388例MI患者作为研究对象,根据PCI术后随访1年发生HF情况分为HF组(92例)和非HF组(296例)。分析MI患者PCI术后并发HF的影响因素及血清ITLN-1、sST2、MCP-1对MI患者PCI术后并发HF的预测价值。结果多因素logistic回归分析结果显示,在排除其他因素的干扰后,血清sST2、MCP-1水平较高,均为MI患者PCI术后并发HF的危险因素(P<0.05),而血清ITLN-1水平较高,为MI患者PCI术后并发HF的保护因素(P<0.05)。将血清ITLN-1、sST2、MCP-1按照并联试验的方法对样本进行联合预测,结果显示,联合预测的灵敏度为94.56%,预测的漏诊率为5.5%。虽然联合预测的特异度(45.61%)、Kappa(0.254)均较低,且预测MI患者PCI术后并发HF的曲线下面积值与三者单独检测比较差异无统计学意义(P>0.05)。但该病临床需要高灵敏度,即漏诊率较低,联合诊断敏感度显著提高(P<0.05),符合临床实际需要。结论MI患者PCI术后并发HF的独立危险因素包括年龄较大、有高血压病、有2型糖尿病、发病至血运重建时间较长、血清sST2、MCP-1水平较高,其保护因素为应用IABP、血清ITLN-1水平较高,同时血清ITLN-1、sST2、MCP-1联合有助于提高对MI患者PCI术后并发HF的预测敏感度。

血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1、胶质纤维酸性蛋白检测在新生儿缺血缺氧性脑病病情严重程度中的诊断价值

目的:探讨血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)病情严重程度的关系。方法:选择80例HIE患儿作为观察组,另选择90例健康新生儿作为对照组,收集所有患儿一般资料,并检测两组患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平,分析HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP与病情严重程度的相关性及预后不良的影响因素。结果:对照组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平低于观察组(均P<0.05)。重度组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平高于中度组、轻度组和对照组(均P<0.05)。Pearson相关分析显示,疾病严重程度与HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平呈正相关(均P<0.001)。随访预后良好患儿59例,预后不良21例,经多因素Logistic回归分析显示,产程异常、病情重度、S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP为影响HIE患儿预后的危险因素(均P<0.05)。结论:HIE患儿病情严重程度和预后与血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平有关,监测其水平变化有利于临床早期完善干预方案改善预后。

半乳糖凝集素3和半乳糖凝集素3结合蛋白在子痫前期中的表达和意义

目的:探讨子痫前期患者外周血及胎盘组织中半乳糖凝集素3 (galectin-3, Gal-3)、半乳糖凝集素3结合蛋白(galectin-3 binding proteins, Gal-3BP)的表达及意义。方法:选取青岛大学附属医院收治的子痫前期患者30例为实验组,同期入院体检正常的孕妇30例为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清Gal-3、Gal-3BP的浓度,经免疫组织化学法检测胎盘组织Gal-3、Gal-3BP的表达。采用Pearson双变量关联性分析法分析Gal-3、Gal-3BP与患者临床特征的相关性。结果:实验组外周血Gal-3、Gal-3BP水平均高于对照组(P < 0.05);实验组胎盘组织Gal-3、Gal-3BP的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)。实验组外周血Gal-3、Gal-3BP浓度分别与平均动脉压、24小时尿蛋白呈正相关(P < 0.05)。结论:Gal-3和Gal-3BP可能与子痫前期的发病有关,或可成为预测子痫前期的生物标记物。

凝集素类受体蛋白激酶参与植物发育的研究进展

凝集素类受体蛋白激酶(Lectin receptor-like kinases,LecRLKs)是高等植物中的一类类受体蛋白激酶(Receptor-like kinases,RLKs),具有参与植物生长发育及胁迫耐受等多种功能。LecRLKs在结构上主要包括胞外凝集素结构域、跨膜连接区及激酶结构域,根据胞外凝集素结构域的不同,LecRLKs可分为3种类型:G型、L型及C型。根据近年来的研究,发现LecRLK家族中存在能够参与植物种子萌发、株高、茎和叶片发育、花器官发育和生殖发育的基因,这表明LecRLK家族基因与植物发育过程存在密切的关系。该文综述了植物凝集素类受体蛋白激酶的结构与分类,重点讨论相关凝集素受体蛋白激酶在植物发育过程中的作用,旨在加深对凝集素类受体蛋白激酶在植物发育过程中所发挥作用的理解,并为农业生产和作物改良育种提供理论依据。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1与酒精性心肌病细胞模型的关系研究

目的探讨酒精性心肌病(ACM)细胞模型中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)对细胞凋亡有关蛋白Bcl-2相关蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达量变化的影响。方法选用若干取对数生长期的细胞,随机分为以下6组:正常对照组(Blank组)、酒精性心肌病组(ACM组)、ACM+sh-NC抑表达对照组(ACM+sh-NC组)、ACM+sh-LOX-1组、ACM+OE-LOX-1过表达组(ACM+OE-LOX-1组)、ACM+OE-LOX-1+si-NC组。除Blank组外,其余各组细胞均用200 mmol/L酒精孵育1 d,体外诱发ACM细胞模型。应用Western blot、实时定量PCR技术分别在蛋白质及基因水平检测细胞中的LOX-1、Bax、Cleaved Caspase-3的表达量并采用Pearson积矩相关系数检验分析其相关性。结果与Blank组相比,ACM组心肌组织中LOX-1、Bax、Cleaved Caspase-3的mRNA表达量显著增加(P<0.01),蛋白表达量同样显著增加(P<0.05);对LOX-1表达进行干预处理后与ACM组及ACM+sh-NC组比较,ACM+sh-LOX-1组心肌组织中Bax、Cleaved Caspase-3的表达量显著减少(P<0.01);与ACM组相比较,ACM+OE-LOX-1组心肌组织中Bax、Cleaved Caspase-3的表达量显著升高(P<0.01);相关性分析提示LOX-1的表达量与Bax、Cleaved Caspase-3的表达量呈正相关(r=0.663,P<0.05;r=0.604,P<0.05)。结论LOX-1在ACM细胞模型中的表达量升高,且与心肌细胞凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3表达呈正相关,并通过干预Bax、Cleaved Caspase-3表达参与酒精诱导心肌细胞凋亡的过程。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1对乙醇诱导的大鼠心肌细胞自噬的影响

目的探讨乙醇诱导下大鼠心肌细胞模型中凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX-1)的表达及其与自噬相关蛋白Beclin-1和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ(autophagy microtubule-associated protein light chain 3 antibodyⅡ,LC3-Ⅱ)的相关关系。方法选取对数生长期的大鼠心肌细胞随机分为以下6组:Blank组、乙醇组、乙醇+sh-NC组、乙醇+sh-LOX-1组、乙醇+OE-LOX-1组和乙醇+OE-LOX-1+si-NC组,除空白对照组外,其余各组细胞均用200 mmol/L酒精孵育1 d,体外构建乙醇诱导的大鼠心肌细胞模型。电镜观察自噬小体的数量。实时荧光定量PCR(Realtime PCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测LOX-1、Beclin-1、LC3-I、LC3-Ⅱ在各组中的表达水平,并进行比较与分析。结果急性乙醇暴露后可使大鼠心肌细胞中LOX-1、Beclin-1、LC3-I和LC3-Ⅱ在基因和蛋白水平表达明显升高(P<0.01)。对LOX-1的表达抑制后,Beclin-1、LC3-I和LC3-Ⅱ表达明显下调(P<0.01),而在对LOX-1进行过表达处理后,则能够增加Beclin-1、LC3-I和LC3-Ⅱ的表达水平(P<0.01)。透射电镜下,急性乙醇摄入可造成大鼠心肌细胞中自噬小体增多;下调LOX-1后可减少自噬小体数量,而过表达LOX-1则会增加自噬小体数量(P<0.01)。结论LOX-1在急性乙醇诱导下的大鼠心肌细胞模型中表达上调,且与自噬相关因子(Beclin-1、LC3-Ⅱ)呈协同变化趋势,提示LOX-1可能通过上调Beclin-1和LC3-Ⅱ表达水平造成自噬水平的过度激活从而推动酒精致心肌损伤的病理过程。

糖蛋白-凝集素自组装构筑有序膜及在酶电极的应用

利用糖蛋白-凝集素的识别作用交替沉积伴刀豆球蛋白(ConA)与辣根过氧化物酶(HRP)制备酶自组装多层膜,用原子力显微镜(AFM)观测了自组装膜的表面形貌、表面粗糙度;AFM和椭圆偏振研究测定了自组装膜的厚度.结果表明,ConA和HRP膜厚分别为9.0和4.6nm,与两者的晶体衍射结果一致,说明生物识别自组装方法能很好地保持分子的原有形态.以亚甲蓝(MB)溶液为介体,用循环伏安法测定了表面修饰了三层(ConA/HRP)自组装膜的金电极对H2O2的电化学催化还原作用,在H2O2浓度为0.2～1.0mmol·L-1时,响应电流对H2O2浓度变化成线性,酶电极灵敏度为24.0mA·mol-1·L,表观米氏常数为4.2mmol·L-1.

天麻中一种凝集素类似蛋白对植物病原真菌的抑制作用

从人工栽培黄天麻（GustrodiaelataBl.f.flavidaS.Chow）皮层部分分离得到一种10kD的凝集素类似蛋白（GAFP-1），在体外对绿色木霉（Trichodermaviride），梨黑腐皮壳（Valsaambiens），立枯丝核菌（Rhizoctoniasalani），小麦赤霉菌（Gibberellazeae）的多个生理小种如F-34，F-11，JF-10，H-28，紫芝菌（Ganodermalucidum）及灰葡萄孢（BotrvtiscinereaPersoon）等9种真菌的生长具有明显的抑制作用;对绿色木霉（Trichodermaviride）的孢子萌发和菌丝延伸有显著抑制效果，抑制率分别为30％和59.7％；加入0．8μL浓度为0.6mg／mL的GAFP-1可造成梨黑腐皮壳（Valsaambiens），绿色木霉（Trichodermaviride）菌丝生长形态异常：菌丝扭曲，分支加剧，菌丝内部细胞质分布不均，发生聚集。

四个烙铁头蛇毒凝集素样蛋白基因的克隆与序列分析

从烙铁头蛇 (Trimeresurusmucrosquamatus)的毒腺中提取mRNA ,利用RT -PCR进行体外扩增 ,获得凝集素样蛋白基因 ,克隆至PMD18-T载体中 ,筛选出 4种凝集素样蛋白基因 (命名为TML 1、TML 2、TML 3和TML 4 )。由基因序列推导出的氨基酸序列表明 :TML 1,2 ,3,4序列中均有CRD结构。序列同源性比较和Cys位点分析推测 :TML 1和TML 2可能分别是类似于flavocetin A的蛇毒凝集素样蛋白的α亚基和 β亚基 ;TML 3可能类似于GPIb bp的蛇毒凝集素样蛋白的α亚基 ,TML 4则可能是类似于Ⅸ /Ⅹ bp的蛇毒凝集素样蛋白的

蛇毒C型凝集素类蛋白cDNA与基因组DNA序列分析显示特别的转录后加工(英文)

为研究蛇毒C型凝集素类蛋白的快速进化机制和结构功能关系 ,使用PCR技术扩增了若干编码C型凝集素类蛋白 β链的cDNA分子以及agkisasinβ的基因组DNA ,并将这些扩增产物进行克隆和测序 .对测序结果与试验过程中的具体条件进行了因果关系分析 ,并且进行点阵图比较和多序列比对 .结果表明 ,可能存在“转录后同源重组”等转录后的事件 ,在蛇毒C型凝集素类蛋白的多样性上起着重要的作用 .对于解释基因数目与蛋白质数目的差异这一后基因组时代的重要问题 ,具有一定的参考价值 .首次报告蛇毒C型凝集素类蛋白的基因组DNA序列 。

鸭出血症葡萄球菌A蛋白的协同凝集试验的建立

用富含A蛋白的金黄色葡萄球菌国际标准菌株Cowan Ⅰ致敏兔抗鸭出血症高免血清,建立检测鸭出血症病毒的葡萄球菌A蛋白(SPA)协同凝集试验。试验表明,该方法简单、快速、特异、敏感,2 min内可判定结果,对病毒抗原的最低检出量为0.014 mg/mL,比血凝及血凝抑制试验敏感性高12倍。该方法能检出攻毒鸭,适用于临床诊断。

软骨凝集蛋白与C-myc在人非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的探讨软骨凝集蛋白(Chondrolectin,CHODL)与C-myc在人非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组织化学方法检测53例非小细胞肺癌石蜡标本以及43例癌旁对照组织标本,并进行相关分析。结果 CHODL主要分布在胞质与胞膜中,其在癌组织中的阳性表达率为79.25%,明显高于在癌旁组织中的表达(18.60%),C-myc在癌组织中的表达率为60.37%,明显高于其在癌旁组织中过度表达(30.23%),且差异均具有统计学意义;CHODL在癌组织中的表达与淋巴结转移有关,而与年龄、性别、组织分化、TNM分期、肿块大小均无关;C-myc在非小细胞肺癌组织中的表达与淋巴结转移、组织学分化、TNM分期有关(P<0.05),与年龄、性别、肿块大小无关(P>0.05),且差异具有统计学意义;CHODL与C-myc在肺癌组织中的表达呈正相关。结论 CHODL在肺癌组织中的作用可能与C-myc呈某种程度的相关性,并与肿瘤淋巴结转移相关,为CHODL在肿瘤转移方面打下基础。