间接ELISA检测非洲猪瘟病毒P22蛋白原核表达方法建立

非洲猪瘟(ASF)是由属于Asfaviridae家族的非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的。本文主要研究间接ELISA(酶联免疫吸附测定)检测ASFV(非洲猪瘟病毒)P22蛋白原核表达方法建立,并得出了一定的实验成果,本研究中开发的基于重组p22∆TM/p30的间接ELISA显示出高重复性,具有可接受的诊断敏感性和特异性。值得注意的是,这种间接ELISA可以检测针对毒性基因Ⅱ型ASFV的抗体,而其他可用的试剂盒则不能。这些特征对于在毒力基因型II型ASFV流行的地区应用此类测试很有用。

非ST段抬高型急性冠脉综合征患者血清纤维蛋白原/白蛋白与冠脉病变程度的关系

目的探讨血清纤维蛋白原/白蛋白(FAR)与非ST段抬高型急性冠脉综合征(NSTE-ACS)患者冠状动脉病变程度的关系。方法选择NSTE-ACS患者216例,根据SYNTAX评分标准分为冠脉轻度病变组98例、中度病变组73例、重度病变组45例。入院后检测血清纤维蛋白原、白蛋白水平,计算纤维蛋白原/白蛋白比值(FAR)。采用Spearman相关性分析FAR与NSTE-ACS冠脉病变程度的关系,Logistic回归分析NSTE-ACS患者发生冠状动脉中重度病变(SYNTAX评分≥23分)的危险因素,受试者工作特征曲线评价FAR诊断NSTE-ACS患者发生冠状动脉中重度病变的价值。结果轻度病变组、中度病变组、重度病变组FAR比较有统计学差异(P<0.05),且随着SYNTAX评分升高,FAR逐渐升高(P均<0.05)。FAR与SYNTAX评分呈正相关(r=0.550,P<0.05),FAR升高是患者冠状动脉中重度病变的独立危险因素(P<0.05);FAR界值为118.58诊断NSTE-ACS患者中SYNTAX评分≥23分的曲线下面积(AUC)为0.856(95%CI:0.802～0.900),敏感性为59.32%、特异性为93.88%;FAR界值为126.77诊断NSTE-ACS患者SYNTAX评分≥23分的AUC为0.906(95%CI:0.859～0.941),敏感性为82.22%、特异性为89.47%。结论 NSTE-ACS患者FAR水平与冠脉病变程度呈正相关,FAR水平对冠状动脉中重度病变具有一定预测价值。

酚类污染物对金鱼卵黄蛋白原诱导的雌激素效应研究

以雌二醇为阳性对照,通过雄性金鱼卵黄蛋白原的诱导实验研究壬基酚、辛基酚、双酚A和2,4-二氯酚4种酚类污染物的雌激素活性,同时探讨金鱼作为实验生物的敏感性。不同浓度梯度的酚类污染物暴露14d后,以酶联免疫吸附法(ELISA)测定金鱼血浆中的卵黄蛋白原含量,同时测定肝脏指数。结果表明,4种酚类污染物均可诱导金鱼体内卵黄蛋白原的合成并且提高其肝脏指数。雌二醇、壬基酚、辛基酚和双酚A诱导雄性金鱼卵黄蛋白原合成的最低可见效应浓度分别为0.005,15,5,10μg/L,且诱导量随暴露浓度的升高呈明显的剂量-效应关系,可以采用Weibull函数进行非线性拟合,其半效应浓度EC50分别为0.078,255.7,79.6和113.4μg/L。2,4-二氯酚诱导能力较弱,最大诱导量比阳性对照组低4个数量级,4种酚类化合物的雌激素活性强弱顺序为辛基酚>双酚A>壬基酚2,4-二氯酚。可见金鱼可以作为类雌激素化合物筛选和检测的敏感实验生物。

早期监测纤维蛋白原、FDP在四肢骨折患儿血清中的表达及其临床意义

目的探讨早期监测纤维蛋白原(FIB)、纤维蛋白降解产物(FDP)在四肢骨折患儿血清中的表达及其临床意义。方法检测观察组、对照组血清FIB、FDP水平。统计观察组骨折愈合时间和下肢静脉血栓(DVT)发生情况,比较不同骨折愈合时间患儿、有DVT患儿和无DVT患儿血清FIB、FDP水平并分析四肢骨折患儿血清FIB、FDP水平与其骨折愈合时间和DVT的关系。结果观察组术前血清FIB、FDP水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组平均骨折愈合时间(29.68±7.49)d。骨折愈合时间较长患儿和发生DVT患儿血清FIB、FDP水平均高于骨折愈合时间较短患儿和无DVT患儿(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,四肢骨折患儿血清FIB、FDP水平与其骨折愈合时间均呈正相关(r=0.768,0.784,P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示四肢骨折患儿血清FIB、FDP水平与其DVT发生率均呈正相关(r=0.792、0.785,P<0.05)。结论血清FIB、FDP水平在四肢骨折患儿中较高且与其骨折愈合时间及DVT发生率相关。

增强型绿色荧光蛋白原核表达纯化与多克隆抗体的制备

目的 :进行增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的克隆、原核表达和纯化以及多克隆抗体的制备 ,为以后纯化EGFP融合蛋白奠定基础。方法 :构建pGEX 4T3 EGFP重组质粒 ,在大肠杆菌BL2 1中进行原核表达 ,用亲和层析法纯化GST EGFP ,免疫BAB/C小鼠制备EGFP多克隆抗体。结果 :①目的蛋白GST EGFP表达量为 8g/L。②获得纯抗体溶液 5ml,浓度为 0 .4g/L。③EGFP抗体在 1 10 0 0 0 0稀释度时 ,Westernblot检测条带清晰 ,背景干净。结论 :通过优化诱导条件 ,利用大肠杆菌可低成本获得大量GST EGFP。直接使用GST EGFP融合蛋白免疫BAB/C小鼠 。

弹力蛋白原基因单核苷酸多态性与主动脉夹层的关系

目的:通过检测弹力蛋白原(tropoelastin)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点表达、tropoelastin mRNA和弹性蛋白与弹力纤维水平,探讨tropoelastin基因SNPs与主动脉夹层(aortic dissection,AD)的关系。方法:留取96例AD患者(AD组)和95例对照组患者的外周血和主动脉组织标本,提取外周血DNA,应用MassARRAY技术进行tropoelastin基因SNPs检测,并构建单体型;采用real-time PCR和蛋白质印迹法分别检测主动脉中膜层tropoelastin mRNA和弹性蛋白的表达;采用EVG(Elastin Van Gieson)染色观察主动脉管形态和壁弹力纤维的分布。比较tropoelastin基因各SNPs位点基因型和单体型在两组间频率的分布,以及tropoelastin m RNA、弹性蛋白和弹力纤维在两组中表达的差异。结果:两组共检测tropoelastin基因SNPs位点7个,5个位点呈多态性,其中rs2071307(G/A)、rs34945509(C/T)和rs17855988(G/C)位点频率分布在两组之间差异均有统计学意义(均P<0.05)。3个SNP位点[rs2071307(G/A)、rs34945509(C/T)和rs17855988(G/C)]的单体型频率分布,在两组之间差异均有统计学意义(均P<0.01)。Real-time PCR和蛋白质印迹法结果显示AD组主动脉中膜层tropoelastin m RNA和弹性蛋白的表达量均显著低于对照组(均P<0.05)。EVG染色可见AD组主动脉中膜层撕裂,弹力纤维破碎、断裂,且排列不规则;而对照组主动脉中膜层结构完整、层次分明,弹力纤维排列紧密、有序。结论:Tropoelastin基因rs2071307(G/A)、rs34945509(C/T)、rs17855988(G/C)位点的多态性改变可能最终会影响弹力纤维的合成,并有可能在AD的发生中起重要作用。

小动脉吻合后弹性纤维构筑及弹性蛋白原表达变化

目的 :探讨小动脉吻合术后弹性纤维的构筑及弹性蛋白原mRNA表达的变化。方法 :采用光镜、扫描电镜及寡核苷酸探针原位杂交方法 ,观察大鼠股动脉吻合术后 3d、7d、1 4d、2 1d、3 0d和 90d弹性纤维的构筑及弹性蛋白原mRNA表达。结果 :吻合术后 3d即有弹性蛋白原mRNA的表达 ,3～ 7d达到高峰 ,随后逐渐下降 ;术后 1 4d吻合口区弹性纤维含量逐渐增多 ,术后 3 0d增高明显 ,同时弹性纤维的形态结构趋于正常。结论 :动脉吻合术后弹性纤维的重构分为 :静止期、增生期、重建期。弹性蛋白原mRNA表达与弹性纤维的增生出现峰值的时间不同步。吻合后弹性纤维的重建修复为一种新生内膜型模式。

噻氯匹定对血浆蛋白原的影响

噻氯匹定(ticlopidine,坻克力得、力抗栓)是一种血小板功能抑制剂.近年来随着对脑卒中治疗方法和药物的研究,对人体凝血机制以及抗凝机理的研究也日益增加,新型抗凝血药也在不断地被开发应用.噻氯匹定是一种比较新的抑制血小板功能的药物.临床用药表明,该药可明显延长凝血时间,发挥抗凝作用.但噻氯匹定对脑卒中患者血浆纤维蛋白原的影响尚未见国内有报道.我们通过41例脑卒中患者服用该药前后各项实验指标的观察,探讨噻氯匹定的抗凝机制.l 材料与方法1.1 仪器 血液凝固分析装置(日本东亚医用电子株式会社制造);Cell-DYN-1400(美国贝克曼公司制造).1.2 药品 盐酸噻氯匹定(法国产,批号为0295 067,剂量为0.25mg).

过敏性紫癜患儿纤维蛋白原及单体聚合功能检测的临床意义

目的 :观察过敏性紫癜 ( HSP)患儿血浆纤维蛋白原 ( Fg)水平及单体聚合功能等指标的变化。方法 :用纤维蛋白原功能自动化检测系统测定了 2 5例 HSP患儿纤维蛋白原及单体聚合功能。结果 :HSP患儿血浆 Fg水平及功能指标明显高于正常对照组。结论 :HSP患儿体内存在高凝状态 ,是指导临床应用溶栓。

中国鲎试剂中凝固蛋白原的快速纯化

报道一种从商品中国鲎试剂中快速分离纯化凝固蛋白原的方法．经透析、离子交换、凝胶过滤从该品中获得一种均一蛋白，紫外光谱和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实为鲎凝固蛋白原．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和凝胶过滤测得其分子量分别为２６ｋＤ和２０ｋＤ．其得率为５０％．

“蛋白原”对仔猪的饲用价值

随着畜牧业的高速发展，我国饲料原料供需矛盾越来越突出，蛋白饲料的缺乏越来越大，为了解决蛋白质饲料的不足，国内企业大量进口鱼粉，每年花去大量的外汇，且供应紧张，价格上扬。另一方面，我国每年有２００多万ｔ的动物屠宰下杂物资源产生，且利用率极低。这些下杂物...

不同纤维蛋白原水平与肺栓塞再发的关系分析

目的对肺栓塞再发与不同的纤维蛋白原水平的关系进行观察与分析。方法选取入住我院的经治疗后症状改善的初次肺栓塞患者56例,以及再次发生肺栓塞的患者17例,进行血浆蛋白原水平进行监测,研究与分析。结果初次肺栓塞患者的血浆蛋白原水平明显低于肺栓塞再发患者(P<0.05)。未再次发生肺栓塞患者的血浆蛋白原水平明显低于再次发生肺栓塞患者(P<0.05)。结论肺栓塞的再发与否与患者的血浆蛋白原水平的高低有关,纤维蛋白原的水平越高肺栓塞患者再发的机会越大,对肺栓塞的再次发生有预测意义。

鲎凝固蛋白原的纯化及其火箭免疫电泳鲎试验法

亚洲鲎血细胞溶解物先经CM-Sepharose CL-6B分级洗脱,再经Dextran-Sepharose CL-6B亲和层析纯化凝固蛋白原。用此法纯化的凝固蛋白原免疫家兔产生抗血清,并用火箭免疫电泳法测定鲎血细胞溶解物与内毒素反应后的凝固蛋白原残余量,根据残余凝固蛋白原量与参加反应内毒素量呈负相关关系,建立了定量测定内毒素的火箭免疫电泳鲎试验法。

草莓FaMRLK47蛋白原核表达条件优化

【目的】优化草莓FaMRLK47蛋白原核表达条件并在研究中应用。【方法】以八倍体草莓‘红颜’(Fragaria×ananassa Duch.‘Benihoppe’)为试材,对比研究异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)在0.5mmol/L和1mmol/L处理,对比分析0、2、4、6、8、12h等不同时间FaMRLK47蛋白诱导表达效率和产量。【结果】IPTG在1mmol/L下诱导8h,FaMRLK47蛋白的表达效率和产量高。【结论】优化草莓FaMRLK47原核诱导表达体系并检测FaMRLK47与寡糖的特异性结合。

磁珠凝固法测定纤维蛋白原

纤维蛋白原(Fibrinoger，Fib)的定量测定可为消耗性凝血性疾病及肝脏、心血管疾病、糖尿病、恶性肿瘤的诊治提供有用的信息。因而Fib的测定倍受临床上重视。目前临床多用双缩脲比色法、热比浊法、免疫比浊法和热沉淀离心压积法，但是，如果血浆中有黄疸、溶血、乳糜微粒等干扰物存在时，会对吸光度或散射光强度产生影响，造成检测结果不精确。

激酶锚定蛋白12/蛋白原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型6信号通路对糖尿病肾脏疾病小鼠足细胞线粒体自噬保护作用的研究

目的 探讨激酶锚定蛋白 12(AKAP12)/蛋白原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin型 6(PCSK6)信号通路对DKD小鼠足细胞线料体自噬的保护作用.方法 20 只C57/B6 背景的AKAP12 KO(AKAP12-/-)小鼠和20 只野生型(WT)同窝出生小鼠,随机分为WT小鼠对照组(Ctrl+WT组)、AKAP12-/-小鼠对照组(Ctrl+AKAP12-/-组)、WT小鼠诱导DKD模型组(DKD+WT组)和AKAP12-/-小鼠诱导DKD模型组(DKD+AKAP12-/-组),每组各10 只.从AKAP12-/-小鼠和WT小鼠获得原代足细胞,并暴露于高糖(HG,30 mmol/L)或甘露醇(Mannitol)24 h,分为Mannitol+WT组、HG+WT组、Mannitol+AKAP12-/-、HG+AKAP12-/-组,观察足细胞线粒体分裂和自噬情况.采用sh-PCSK6 转染AKAP12-/-足细胞以敲低PCSK6 表达,将细胞分为Mannitol+阴性对照组(Mannitol+sh-NC组)、Mannitol+PCSK6 敲除载体组(Mannitol+sh-PCSK6 组)、HG+sh-NC组和HG+sh-PCSK6组.采用Mito-Tracker染色分析足细胞中线粒体的形态.Western blot法检测线粒体分裂蛋白(FIS1和DRP1)、线粒体自噬(PINK1 和Parkin)和自噬相关(LC3 和p62)蛋白表达.结果 与HG+WT组比较,HG+AKAP12-/-组足细胞中单个线粒体数量、FIS1、DRP1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、p62 蛋白表达升高(P<0.05),线粒体平均分支长度降低(P<0.05).与HG+sh-NC组比较,HG+sh-PCSK6组足细胞单个线粒体数量、FIS1、DRP1、PINK1、Parkin和LC3Ⅱ蛋白表达降低(P<0.05 或P<0.01),线粒体平均分支长度升高(P<0.01).结论 AKAP12/PCSK6 信号通路介导了HG环境下足细胞中线粒体分裂过程和线粒体自噬的调节.

大鼠弹力蛋白原基因重组腺病毒载体的构建及在血管平滑肌细胞中的表达

目的构建携载大鼠弹力蛋白原(tropoelastin)基因的重组腺病毒载体,并在体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中表达。方法利用基因重组技术将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pShuttleTropoelastin-GFP进行同源重组,筛选出重组黏粒pAdTropoelas- tin-GFP,经过包装、扩增、纯化后获得重组腺病毒AdTropoelastin-GFP,测定病毒滴度。腺病毒体外感染大鼠主动脉平滑肌细胞,一步法提取细胞总RNA,逆转录后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测tropoelastin的mRNA。结果得到了携载tropoelastin基因的重组腺病毒,纯化后滴度为5×10^(11)pfu/ml,腺病毒转染VSMC后1、3 d tropoelastin mRNA表达较空病毒明显增高(P<0.01),并超出空病毒转染组2倍以上。结论成功构建了携带tropoelastin的重组腺病毒载体,体外转染的VSMC有效表达目的基因。

对氧磷酶2311和纤维蛋白原β-455基因多态性与动脉粥样硬化性血栓性脑梗死的相关性

目的探讨对氧磷酶2(PON2)311、纤维蛋白原β链(Fgβ)-455基因多态性与动脉粥样硬化性血栓性脑梗死(ACI)的关系。方法采用病例-对照研究方法,应用聚合酶链反应、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对108例ACI患者、75例无栓对照者及123例正常对照者的PON2C311S和Fgβ-455G/A基因多态性进行检测,分析其基因型和等位基因频率。结果ACI患者中PON2311C等位基因频率显著高于正常人(P=0.0007),可能影响了该酶蛋白的功能;ACI患者中Fgβ-455A等位基因频率显著高于正常人(P=0.0464),可能影响了血浆纤维蛋白原的功能。结论PON2第9外显子311C等位基因和Fgβ-455A等位基因与脑梗死的发生相关。