外膜蛋白C作为蛋白呈递平台将抗原定位至细菌外膜囊泡表面的可行性

目的探讨外膜蛋白C(outer membrane protein C,OmpC)作为蛋白呈递平台将抗原定位至细菌外膜囊泡(outer membrane vesicle,OMV)表面的可行性。方法构建含有ompC基因片段及金黄色葡萄球菌EsxA抗原基因(esxA基因)的重组表达质粒,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物进行12%SDS-PAGE分析。提取重组菌OMV,经12%SDS-PAGE分析OMV总蛋白,并采用Western blot法和纳米流式仪检测融合蛋白定位至OMV表面的情况。结果含ompC基因和esxA基因的重组表达质粒经测序证明构建正确。融合蛋白OmpC-EsxA经12%SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约57000的目的蛋白条带,大小与预期相符。OMV总蛋白经12%SDS-PAGE分析,可见多条蛋白条带,表明成功提取重组菌OMV。重组菌OMV表面的融合蛋白OmpC-EsxA可与小鼠抗His-Tag抗体发生特异性结合,且纳米流式仪可检测到荧光抗体标记的OMV。结论OmpC可作为蛋白呈递平台将抗原定位至OMV表面,有望应用于抗原呈递疫苗的研发。

宫颈病变中抗原呈递元件成员蛋白和人类白细胞共同抗原Ⅰ类分子表达的关系

抗原呈递元件（APM）成员蛋白作为一组抗原呈递相关功能蛋白,在协助人类白细胞共同抗原（HLA）Ⅰ类分子组装、负载和提呈内源性抗原肽,介导抗病毒T细胞免疫中发挥着重要作用[1].其成员蛋白抗原处理相关转运体（TAP）负责将内源性抗原肽向内质网腔转运.TAP相关蛋白对HLA-Ⅰ类分子在内质网中的装配发挥关键作用[2].分子伴侣钙连接蛋白和钙网蛋白以及疏基二硫键氧化还原酶Erp57协助新合成的HLA-Ⅰ蛋白正确折叠和组装[3].人乳头状瘤病毒（HPV）是宫颈癌发生的始动因素,也可能通过协助肿瘤细胞影响HLA-Ⅰ基因表达调控.因此,探讨HPV感染引起宿主HLA-Ⅰ类分子表达缺失与APM成员表达情况有无关联,是揭示肿瘤的分子机制、疫苗治疗、建立肿瘤生物标志谱体系的关键.我们通过检测宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌组织中APM成员蛋白及HLA-Ⅰ类分子的表达情况,分析其与HPV16感染的相关性,从而探讨宫颈病变中HLA-Ⅰ类分子表达下调的机制.

美味猕猴桃根乙酸乙酯提取物部分对肝癌HepG2细胞增殖影响及机制研究

目的探讨美味猕猴桃根乙酸乙酯提取物部分(EE-ADP)对肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测EE-ADP对肝癌HepG2细胞增殖的作用;Hochest33258染色及流式细胞技术检测其凋亡作用;蛋白免疫印迹法检测EE-ADP对抗原呈递细胞(APC)蛋白及β连环蛋白(β-catenin)的影响及可能影响细胞增殖的机制。结果 MTT染色法提示,不同浓度的EE-ADP干预肝癌HepG2细胞能一定程度上抑制肝癌细胞的增殖,且存在时间-浓度依赖性。40μg/ml组的凋亡率为17. 70%,与完全培养基组的4. 80%比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。60μg/ml组及80μg/ml组凋亡率分别为50. 75%、64. 30%,与完全培养基组比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)。蛋白免疫印迹法结果显示,随着加药浓度的增加,APC基因蛋白表达量增加,β-catenin基因表达量减少。结论 EE-ADP可以抑制肝癌HepG2细胞的增值,其机制可能为降低β-catenin而上调APC的表达,阻断Wnt/β-catenin信号通路。