重组人源型胶原蛋白基因工程菌补料分批发酵过程动力学研究

研究了重组人源型胶原蛋白基因工程菌在分批发酵阶段和补料分批发酵阶段的生长特性,得到在分批发酵过程菌体生长动力学方程dρBρB和基质消耗动力学方程-dρSρB+0.05ρB;在dt=0.67ρS0.95+ρSdt=0.45ρS0.95+ρS补料分批发酵阶段,利用近似指数流加培养方式进行补料,得到菌体干重为71.02g·L-1;归纳的模型与实际发酵过程的实验数据吻合良好。

应用蛋白基因工程技术制备核素易标记的双功能单抗杂交分子——B72.3MT-1

通过建立表达质粒ｍｐＳＶ２ｎｅｏＥＰ１Ｂ７２３ＭＴ１制备出双功能杂交分子Ｂ７２３抗体／金属硫因蛋白（Ｂ７２３ＭＴ１）。这种表达质粒含有选择标识物ｎｅｏ基因、鼠免疫球蛋白促进子和增强子、鼠金属硫因１（ＭＴ１）、ｃＤＮＡ基因与Ｂ７２３重链ＣＨ２功能区基因相结合的基因片段，以此质粒转染重链缺失突变型Ｂ７２３Ｍｕｔ（ｋ）细胞株，转染上清液通过蛋白Ｇ柱纯化杂交分子Ｂ７２３ＭＴ１。研究表明，杂交分子Ｂ７２３ＭＴ１同时保留了原来Ｂ７２３抗体对ＴＡＧ７２抗原的亲和力和天然ＭＴ１分子的金属结合能力。因此，Ｂ７２３ＭＴ１更适合９９ｍＴｃ等放射性核素标记，用于肿瘤放射免疫显像。

利用噬菌体抗体库技术制备人源化抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体

近年来随着人们生活方式的改变,血栓性疾病正成为威胁人类生命健康的"头号杀手",发病率高居各种疾病之首,并有渐增趋势,是当代医学研究的重点和热点之一.

基因工程抗角蛋白抗体对豚鼠银屑病样模型的影响

目的观察基因工程抗角蛋白抗体对豚鼠银屑病样模型的治疗作用及对角质形成细胞增殖的影响。方法建立豚鼠银屑病模型,将通过基因工程技术获得的抗角蛋白抗体Fab段以肌注方式给药,从组织病理水平评价抗体对豚鼠银屑病模型的治疗效果;将抗体与角质形成细胞共培养,MTT法观察其对角质形成细胞增殖能力的影响。结果抗角蛋白抗体Fab段可以促进豚鼠银屑病模型的恢复,抑制角质形成细胞的过度增殖。结论提示抗角蛋白基因工程抗体具有促进豚鼠银屑病样模型恢复的作用,对银屑病可能具有一定的治疗作用。

生长抑素(SS)与硫氧还原蛋白(Thioredoxin)相融合生成的2种基因工程化融合蛋白SS-N/X和SS-N/S的表达特性

对基因工程化生长抑素 (som atostatin,SS) -硫氧还原蛋白 (Thioredoxin)融合蛋白 SS- N/ X和 SS- N/ S的表达产量、水溶性、Triton X- 10 0对 SS融合蛋白水溶性的影响、包涵体的溶解和复性特点以及 SS的抗原性与免疫原性等特性进行了研究。结果显示 ,在 30℃的低温下用 IPTG诱导表达 ,SS- N/ X融合蛋白主要以可溶性形式存在 ,占 75 .8% ,包涵体仅占 2 4 .2 % ;而 SS- N/ S融合蛋白则主要以包涵体的形式存在 ,占 81.1% ,可溶性蛋白仅占 18.9% ;32 C载体(p ET- 32 C)蛋白则居二者之间 ,可溶性蛋白与包涵体大约等比例出现。SS- N/ S在低温下诱导可超量表达 SS融合蛋白 ,其表达量约占菌体总蛋白的 4 0 .94 %。 0 .5 % Triton X- 10 0对融合蛋白的水溶性有非常显著的影响 ,几乎可使所有的 SS- N/ X融合蛋白和大部分 SS- N/ S融合蛋白及 32 C硫氧还原蛋白变成水溶性的。 32 C硫氧还原蛋白包涵体在尿素中的溶解度明显高于 SS- N/ S包涵体 ,2 mol/ L尿素可使近一半的 32 C硫氧还原蛋白包涵体溶解 ,而 SS- N/ S包涵体只有 2 7.5 %溶解 ;但在 5 mol/ L 尿素时 ,两者均可基本全部变为可溶性的。在 SS融合蛋白包涵体溶解时加入还原剂二硫苏糖醇 ,可明显降低 SS的抗原性。 SS融合蛋白

TRAIL分子胞外区基因工程蛋白的制备与鉴定

目的 制备人TRAIL配体胞外区基因工程蛋白。方法 应用RT PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增TRAIL配体胞外区cDNA ,克隆入PCR2 .1 载体 ,测序验证后用基因重组法构建了TRAIL配体胞外区和组氨酸盒的原核表达质粒pQE hTRAIL。将重组质粒转入大肠杆菌M15中表达 ,经 1mmol LIPTG在 37℃条件下诱导 4h ,亲和层析柱纯化。用SDS -PAGE电泳和Westernblot鉴定表达产物。结果 所表达融合蛋白为人TRAIL配体胞外区分子 ,分子量 30kD。表达量约为 2mg ml。结论 人TRAIL配体胞外区在大肠杆菌中得到良好表达 ,为深入研究TRAIL配体分子在肿瘤与自身免疫病中的可能应用提供了材料。

基因工程蛋白金葡菌α-溶血素的纯化及活性检测

【目的】分离纯化基因工程重组蛋白金黄色葡萄球菌溶血素(α-hemolysin,α-HL)并检测其生物学活性,为疫苗研发奠定基础。【方法】对含pET32a+-α-HL质粒的BL21(DE3)进行诱导表达,诱导成功后,将重组菌BL21(DE3)培养物用超声波裂解,并用凝胶过滤层析法对该基因工程蛋白进行分离纯化,用Bradford法及兔红细胞分别测定纯化产物的蛋白含量和溶血比活。【结果】纯化产物在SDS-PAGE电泳中53ku处呈现出单一清晰带,达电泳级纯度。纯化产物含量约为0.1277mg/mL,溶血比活为8192HU/mg。【结论】成功获得了金黄色葡萄球菌α-HL,且所获的α-HL具有良好的溶血活性。

基因工程与蛋白质工程综合性实验实施情况调查与分析

对我院2012级生物技术专业学生进行问卷调查,分析基因工程与蛋白质工程综合性实验的教学效果,探讨影响其效果的因素,提出改进措施。

重组人心肌肌钙蛋白Ⅰ基因工程菌的构建

目的构建稳定、高效表达重组人心肌肌钙蛋白I(cTnI)的基因工程菌株,为临床检测心肌损伤及预后提供诊断试剂材料,促进cTnI诊断标准化的研究。方法采用RT-PCR方法从人心肌组织总RNA中克隆出全长的人cTnI基因,将其插入到pMD19-T克隆载体中,经酶切和测序对目的基因分析,再插入到pET-21a(+)表达载体中,转化BL21(DE3),对诱导表达的目的蛋白行SDS-PAGE和采用锐普心梗仪检测重组蛋白的抗原性并准确定量。连续传代试验验证基因工程菌稳定性。结果克隆了全长的cTnI基因,目的蛋白表达量达菌体总蛋白的38%,重组蛋白抗原性良好,基因工程菌具有较高的稳定性。结论成功构建了稳定、高效表达重组人cTnI的基因工程菌。

基因工程与蛋白质工程实验技术综合实验教学改进探讨

基因工程与蛋白质工程实验技术是生物技术专业的核心课程,通过增加实验案例、优化教学过程、优化考核方式3个方面对该课程综合实验进行教学改进探讨,总结出现的问题并反思原因。

重组人血小板生成素（rhTPO） 国际上最被看好的基因工程蛋白药物

rhTPO是国际上最被看好的基因工程蛋白药物之一。目前，国外公司的研制进度尚处Ⅲ期临床试验阶段。而沈阳三生制药股份与有限公司率先完成Ⅱ/Ⅲ期临床试验，获得新奇证书和生产批件，即将进行规模化生产。

重组人血小板生成素（rhTPO）：国际上最被看好的基因工程蛋白药物

rhTPO是国际上最被看好的基因工程蛋白药物之一。目前，国外公司的研制进度尚处于期临床试验阶段。而沈阳三生制药股份有限公司率先完成Ⅱ/Ⅲ期临床试验，获得新药证书和生产批件，即将进行规模化生产。

重组人血小板生成素（rhTPO）国际上最被看好的基因工程蛋白药物

rhTPO是国际上最被看好的基因工程蛋白药物之一。目前，国外公司的研制进度尚处于Ⅱ期临床试验阶段。而沈阳三生制药股份有限公司率先完成Ⅱ/Ⅲ期临床试验，获得新药证书和生产批件，即将进行规模化生产，三生公司还获得两项国家发明专利授权，拥有处主知识产权，研制进度和水平在国际上处于领先地位。三生公司将在国际上最先实现该产品的产业化，为我国医药事业的发展做出新的贡献。

重组人血小板生成素（rhTPO）——国际上最被看好的基因工程蛋白药物

rh TPO是国际上最被看好的基因工程蛋白药物之一。目前，国外公司的研制进度尚处于Ⅲ期临床试验阶段。而沈阳三生制药股份有限公司率先完成Ⅱ/Ⅲ期临床试验，获得新药证书和生产批件，即将进行规模化生产。三生公司还获得两项国家发明专利授权，拥有自主知识产权，研制进度和水平在国际上处于领先地位。三生公司将在国际上最先实现该产品的产业化，为我国医药事业的发展做出新的贡献。

重组人血小板生成素（rhTPO）国际上最被看好的基因工程蛋白药物

rhTPO是国际上最被看好的基因工程蛋白药物之一。目前，国外公司的研制进度尚处于Ⅱ期临床试验阶段。而沈阳三生制药股份有限公司率先完成Ⅱ/Ⅲ期临床试验，获得新药证书和生产批件，即将进行规模化生产。三生公司还获得两项国家发明专利授权，拥有自主知识产权。

腺病毒介导的人骨形成蛋白2基因治疗的免疫学研究

目的评价机体对腺病毒介导的人骨形成蛋白2(adenovirusmediatedhumanbonemorphogeneticprotein2,Ad-hBMP-2)基因治疗的免疫学反应。方法崇明山羊12只,手术截去右侧胫骨中段2.1cm,制备胫骨干缺损模型,随机分为2组。将Ad-hBMP-2转染的山羊骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs,转染组,n=7)及未转染的MSCs(未转染组,n=5)分别植入骨缺损内。于术后4、8、16及24周摄X线片检查骨缺损愈合情况,并对治疗前后机体对腺病毒的细胞和体液免疫反应进行检测。结果X线片示,转染组4～8周,骨缺损内有连续性骨痂形成;24周,有6侧骨缺损完全愈合,部分骨髓腔再通。未转染组4～8周,骨缺损内骨痂形成较少,与骨端界限清楚;24周,仅2侧骨缺损愈合。淋巴细胞与MSCs混合培养示淋巴细胞刺激指数(stimulationindex,SI)于植入后14d升高,转染组4.213±1.278,未转染组-0.310±0.147,且差异有统计学意义(P<0.05);28d后下降,转染组2.544±0.957,未转染组3.104±0.644,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后14、28、49和120d,转染组的血浆腺病毒中和抗体滴度分别为2.359±0.226、2.297±0.200、2.214±0.215和2.297±0.210,未转染组分别为-0.175±0.335、-0.419±0.171、0±0.171和0.874±0.524,两组各时间点差异均有统计学意义(P<0.05)。结论腺病毒介导的基因治疗可引起机体对腺病毒的细胞及体液免疫反应,从而逐渐消除腺病毒基因和相关蛋白的影响。