青钱柳多糖调节胰岛和肝脏葡萄糖转运蛋白4转位干预2型糖尿病大鼠的作用机制

目的 观察青钱柳多糖调节胰岛和肝脏葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)转位改善2型糖尿病(T2DM)大鼠外周胰岛抵抗的作用。方法 建立T2DM大鼠模型(给予高脂饲料后注射链脲佐菌素35 mg·kg^(-1)),将造模成功的大鼠随机分为模型对照组,青钱柳多糖提取物小、大剂量组(5,10 g·kg^(-1))和盐酸二甲双胍组(0.25 g·kg^(-1)),每组9只,给药8周。测定空腹血糖、血脂变化;苏木精-伊红染色法观察胰岛和肝脏病理形态的改变;免疫组化法观察胰岛磷酸化磷酯酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶1(p-Akt1)、GLUT4蛋白的表达;免疫荧光观察肝脏和胰岛GLUT4转位。结果 与模型对照组比较,青钱柳多糖提取物小、大剂量组和盐酸二甲双胍组大鼠胰岛和肝脏结构较完整,血糖下降(P<0.05),高密度脂蛋白升高(P<0.05),胰岛p-PI3K、p-Akt1、GLUT4蛋白表达升高(P<0.05),肝脏和胰岛GLUT4转位增强(P<0.05)。结论 青钱柳多糖可调节T2DM大鼠糖脂紊乱,其机制可能是增强胰岛p-PI3K、p-Akt1、GLUT4蛋白的表达,促进肝脏和胰岛GLUT4转位,从而调节外周胰岛抵抗。

银耳多糖对麦醇溶蛋白纳米体系的影响及复合物的特性研究

该研究是以提高麦醇溶蛋白(gliadin,Gli)纳米颗粒(gliadin nanoparticles,GNPs)稳定性为目标,利用银耳多糖(Tremella fuciformis polysaccharides,TFPs)的乳化性能,探究TFPs添加量对GNPs稳定性的影响。采用反溶剂法制备银耳多糖和麦醇溶蛋白复合载体颗粒(gliadin-Tremella fuciformis polysaccharides composite nanoparticles,G/T NPs),并利用纳米粒度仪、傅里叶变换红外光谱仪、热场发射扫描电镜对G/T NPs的粒径和电位、相互作用、微观结构进行分析。结果表明,TFPs和Gli之间通过静电作用力和氢键作用力相结合,形成GNPs在内、TFPs外层附着的复合颗粒;TFPs的添加能够有效提高GNPs体系的稳定性,减少颗粒之间的聚集,制得的G/T_(4∶1)NPs的平均粒径、多分散指数(polydispersion index,PDI)、ζ-电位分别为(198.5±2.6)nm、0.269±0.005、(36.7±0.6)mV,且具有pH响应性。该研究为后续构建疏水营养成分的包埋和运载体系奠定了基础。

坛紫菜多糖对微冻南美白对虾仁肌原纤维蛋白氧化和结构特性的影响

该研究通过探讨坛紫菜多糖浸泡的南美白对虾仁在微冻过程中肌原纤维蛋白氧化特性和结构特性的变化规律,从蛋白质角度揭示坛紫菜多糖抗冻保鲜的潜在机制。将虾仁分别用5 mg/mL坛紫菜多糖,蒸馏水(空白对照)和5 mg/mL焦磷酸钠(阳性对照)浸泡处理后于-3℃微冻贮藏,每5 d测定指标。结果表明,与对照组相比,坛紫菜多糖浸泡虾仁可显著延缓总巯基含量下降,防止羰基含量和表面疏水性上升,阻碍平均粒径增加和Zeta电位绝对值的下降(P<0.05),抑制肌原纤维蛋白的氧化和聚集。圆二色光谱分析表明,坛紫菜多糖显著抑制肌原纤维蛋白α-螺旋相对含量的降低(P<0.05)。内源荧光光谱分析表明,坛紫菜多糖能缓解肌原纤维蛋白中发色基团暴露,维持蛋白空间结构稳定性。扫描电镜结果显示,坛紫菜多糖能保持虾肌肉组织微观结构的完整性。该研究为坛紫菜多糖作为新型绿色无磷抗冻保鲜剂添加到水产品冷冻过程中保护蛋白质特性提供理论依据。

血清壳多糖酶3样蛋白1检测在不同肝脏疾病中的应用价值分析

分析血清壳多糖酶3样蛋白1在不同肝脏疾病患者临床诊断中的应用价值。方法 选择医院收治的130例肝病患者为观察对象,并选择同一时间的130例健康体检者为对照,分别对受试者实施血清壳多糖酶3样蛋白1检测,比较不同受试者的生化指标差异。结果 不同受试者的血清壳多糖酶3样蛋白1、总胆红素、天门冬氨酸氨基转移酶水平比较结果显示,慢性乙型肝炎组水平显著高于健康体检组(P<0.05),肝硬化组高于慢性乙型肝炎组(P<0.05),肝癌组显著高于肝硬化组(P<0.05);血清壳多糖酶3样蛋白1在三种肝脏疾病检查中的敏感度与特异度结果显示,组间数据差异不显著(P>0.05)。结论 在肝脏疾病临床诊断中,血清壳多糖酶3样蛋白1可以作为评估患者病情的重要依据,值得关注。

板蓝根多糖酶法脱蛋白工艺、组成分析与免疫调节活性研究

目的优化板蓝根多糖脱蛋白工艺,并进一步探讨其免疫调节活性,为板蓝根多糖的开发利用提供科学依据。方法通过单因素结合Box-Behnken响应面法优化酶法脱蛋白的最佳工艺条件;利用紫外可见光谱、傅里叶变换红外光谱、高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱和扫描电镜等方法对板蓝根多糖化学组成与结构特征进行分析;采用斑马鱼免疫低下模型探讨脱蛋白板蓝根多糖对斑马鱼体内中性粒细胞、巨噬细胞、IL-1β和IL-6含量的影响。结果酶法脱蛋白最佳工艺为:胰蛋白酶500 U·mL^(-1)、pH 8.0、酶解时间5 h、酶解温度37℃,脱蛋白率为(86.39±0.07)%,综合评分(91.15±0.37)%。紫外、红外光谱扫描和电镜扫描显示酶法可以除去粗多糖中含有的蛋白质,脱蛋白后相对分子量在5.82~60.26 kDa之间,单糖摩尔组成为甘露糖∶鼠李糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=2.17∶0.96∶2.90∶83.25∶4.88∶5.84。免疫活性评价结果表明,脱蛋白后的板蓝根多糖浓度在50~300μg·mL^(-1)时,能显著增加斑马鱼免疫细胞密度,增加巨噬细胞增殖,降低免疫低下斑马鱼体内IL-1β和IL-6含量,从而发挥免疫调节作用。结论酶法可以有效去除板蓝根粗多糖中的蛋白质,脱蛋白后的板蓝根多糖具有一定的免疫调节作用。

热风干燥对刺芹侧耳多糖-蛋白质复合物加工特性及抗氧化性的影响

对刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)子实体进行热风干燥处理,检测其色差值、褐变指数、中间指数、紫外可见吸收光谱,分析其美拉德反应程度;提取刺芹侧耳多糖-蛋白质复合物,分析其基本成分、加工特性(溶解性、相对黏度、起泡性、乳化性、硬度、内聚性、弹性、咀嚼性和凝胶强度)和抗氧化性。结果表明:新鲜刺芹侧耳的色差值最高,干制24 h的最低;新鲜刺芹侧耳的褐变指数与中间指数最低,干燥24 h的褐变指数与中间指数最高。新鲜刺芹侧耳多糖-蛋白质复合物溶解所需时间最长,干燥18、24 h的溶解时间较短;干燥24h的相对黏度最高,新鲜刺芹侧耳的最低;干燥24h的乳化性、起泡性均最好,干燥12、18、24h的乳化稳定性较好,干燥18 h的起泡稳定性较好;干燥24 h的硬度、内聚性、弹性、咀嚼性和凝胶强度均最高;干燥18、24h的对DPPH自由基清除率较高,干燥24h的对羟基自由基清除率最高,干燥24h的对超氧阴离子清除率较高,干燥18、24 h的对多酚氧化酶抑制率较高。研究结果可为刺芹侧耳的进一步开发利用提供参考。

太子参多糖对卵清白蛋白诱导免疫抑制小鼠肠道免疫应答影响的研究

为研究太子参多糖(PHPS)对模式抗原卵清白蛋白(OVA)引起免疫抑制小鼠肠道免疫应答能力的影响,本研究将84只雄性ICR小鼠随机均分为7组,即PBS对照组(PBS组)、环磷酰胺对照组(CY组)、OVA单独免疫组(OVA-CY组)、铝佐剂对照组(OVA-CY-AL组)、OVA-CY-PHPS低、中、高剂量组(OVA-CY-PHPS-L组、OVACY-PHPS-M组、OVA-CY-PHPS-H组)。除PBS组以外,各组小鼠均于实验开始后1 d~3 d和18 d分别经腹腔注射环磷酰胺(CY,50 mg/kg),建立免疫抑制小鼠模型。于实验开始后4 d~8 d和19 d~23 d,OVA-CY-PHPS-L组、OVA-CY-PHPS-M组、OVA-CY-PHPS-H组小鼠分别灌胃对应剂量PHPS (50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg),PBS组、CY组、OVA-CY组和OVA-CY-AL组小鼠灌胃等体积双蒸水;第9 d和24 d,OVA-CY-PHPS-L组、OVA-CY-PHPS-M组、OVA-CY-PHPS-H组、OVA-CY组小鼠均经腹股沟皮下注射100μg OVA (0.2 m L/只)进行一免和二免。PBS组与CY组小鼠经相同方式注射等体积无菌PBS,OVA-AL组小鼠经相同方式注射OVA/铝佐剂混合液(OVA 100μg+Alum 200μg) 0.2 m L/只。第38 d剖杀各组小鼠,制作十二指肠、空肠、回肠病理切片观察小鼠肠道病变,采用Image-Pro Plus 6.0软件计算各肠段绒毛高度、隐窝深度、肠道上皮中的淋巴细胞数量;采用ELISA法检测各组小鼠各肠段IL-6、TNF-α含量、分泌型免疫球蛋白A (SIgA)抗体水平;采用荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)法检测各组小鼠各肠段细胞因子m RNA的相对转录水平。结果显示,与OVA-CY组相比,各剂量PHPS均能改善免疫抑制小鼠肠道绒毛稀疏、肿胀、破裂的情况,低剂量的PHPS能够显著提高免疫抑制小鼠十二指肠、空肠绒毛高度与隐绒比(V/C)值(P<0.05),低、高剂量的PHPS均能够显著提高免疫抑制小鼠回肠的肠绒毛高度与V/C值(P<0.05);较OVA-CY组,高剂量PHPS能够显著提高免疫抑制小鼠空肠上皮内淋巴细胞的数量(P<0.05),低、高剂量PHPS能够显著提高免疫抑制小鼠回肠上皮内淋巴细胞的数量(P<0.05);与OVA-CY组相比,各剂量PHPS均能够显著提高免疫抑制小鼠十二指肠中IL-6含量及各肠段中TNF-α含量和SIg A抗体水平(P<0.05);与OVA-CY组相比,各剂量PHPS均能够显著上调免疫抑制小鼠各肠段IL-6和TNF-α m RNA的相对转录水平(P<0.05)。上述结果表明,PHPS能在一定程度上修复免疫抑制小鼠肠道黏膜结构的损伤,调节其细胞因子的分泌及其基因的转录水平,增强肠道黏膜免疫功能,从而提高免疫抑制小鼠对OVA的免疫应答能力。本研究为PHPS对动物肠道免疫调节作用的研究提供参考,为进一步开发PHPS提供借鉴。

植物乳杆菌DMDL 9010胞外多糖合成蛋白cpsB的生物信息学分析

为了探讨植物乳杆菌DMDL 9010胞外多糖合成蛋白cpsB的结构特性,该文通过生物信息学技术研究了胞外多糖合成蛋白cpsB的理化性质、亲/疏水性、跨膜结构、功能位点、磷酸化位点、信号肽、结构域、保守功能域、序列同源性以及空间结构进行预测与分析。结果表明胞外多糖合成蛋白cpsB相对分子质量约为2920,等电点6.86,含有191个氨基酸;其为疏水蛋白,具有较高的稳定性;经过跨膜结构预测,发现其不存在跨膜结构,为胞内蛋白;胞外多糖合成蛋白cpsB中含有15个磷酸位点;氨基酸序列中不包含信号肽,所编码蛋白均为内分泌型蛋白;保守功能域预测中,基因中仅发现一段PHP结构域,该基因可能参与调节胞外多糖的基因表达。胞外多糖合成蛋白cpsB的二级结构中α-螺旋占51.14%,并不存在β-折叠和β-转角结构,其三级结构比例与二级结构基本相似。该研究对植物乳杆菌DMDL 9010的胞外多糖合成蛋白cpsB功能机制进行深入研究,对利用基因工程技术研究其胞外多糖的生物合成具有重要意义。

血清miR-203和壳多糖酶3样蛋白1联合检测对肝显著纤维化/肝硬化的诊断价值

目的探讨微小RNA(miR)-203和血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)单独及联合诊断肝显著纤维化/肝硬化的价值。方法将该院2022年1月至2022年12月住院的慢性乙型肝炎(CHB)患者80例纳入研究,同时选取体检健康者40例作为健康对照组。根据组织检查结果将纳入研究的CHB患者分为无/轻度纤维化组(50例)和肝显著纤维化/肝硬化组(30例)。检测各组血清miR-203和CHI3L1水平,肝纤维化4项[Ⅲ型前胶原(P-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、层粘连蛋白(LN),透明质酸酶(HA)]和生化指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)],计算天门冬氨酸氨基转移酶-血小板比值指数(APRI)、肝纤维化指数(FIB-4)。用非参数秩和检验进行组间各项指标的比较。用Spearman相关进行miR-203和CHI3L1与肝纤维化指标的相关性分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-203和CHI3L1单独和联合对肝显著纤维化/肝硬化的诊断效能。结果miR-203与C-Ⅳ、HA、FIB-4、ALT呈负相关(r=-0.282、-0.318、-0.238、-0.224,P<0.05),与血小板计数(PLT)呈正相关(r=0.298,P<0.05)。CHI3L1与C-Ⅳ、HA、LN、FIB-4、APRI、ALT呈正相关(r=0.296、0.467、0.254、0.284、0.300、0.316,P<0.05),与PLT呈负相关(r=-0.506,P<0.05)。ROC曲线显示miR-203预测肝显著纤维化/肝硬化发生的曲线下面积(AUC)为0.820,CHI3L1预测疾病的AUC为0.873,均优于APRI和FIB-4(P<0.05),两者联合诊断的AUC为0.895;抗病毒治疗后miR-203和CHI3L1水平与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清miR-203和CHI3LI的检测可用于肝显著纤维化/肝硬化诊断和抗病毒疗效的评价,两者联合应用可提高诊断效能。

多糖/蛋白颗粒基Pickering乳液性能调控及应用研究进展

Pickering乳液因具有良好的稳定性和无毒副作用等优点,基于食品生物大分子颗粒稳定剂,制备Pickering乳液有良好的发展前景。首先,总结了多糖、蛋白质、颗粒稳定剂浓度、油含量及环境条件等因素对Pickering乳液性能的调控;其次,简要介绍了Pickering乳液在包埋、增溶和提高环境敏感型物质生物利用率等方面的应用;最后,展望了Pickering乳液未来的研究方向和应用领域。

多糖—植物蛋白复合物的制备及特性研究进展

多糖和蛋白质是食品中两种重要的组成成分,将植物蛋白与多糖结合起来,不仅能更好地发挥两者的优势,还能显示出新的功能特性,改善其自身存在的缺点。文章主要介绍了多糖—植物蛋白复合物的制备及影响因素、多糖—植物蛋白复合物的功能性质以及其应用研究。

硫酸软骨素蛋白多糖在脊髓损伤中的研究进展

硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulfate proteoglycans,CSPGs)是中枢神经系统细胞外基质的组成部分,在中枢神经系统发育、正常维持及病理过程中都发挥着关键的作用。脊髓损伤后,损伤部位CSPGs的表达明显上调,这主要源于病变部位活化的星形胶质细胞。CSPGs的上调会限制脊髓损伤部位的轴突再生、传导和再髓鞘化,并且可以促进脊髓损伤中的炎症反应,不利于脊髓损伤后神经功能恢复。因此,抑制CSPGs可能是促进脊髓损伤后轴突再生和功能恢复的有效治疗方法。本文对CSPGs在脊髓损伤中的研究现状进行综述。

大豆7S球蛋白-大枣多糖复合物的制备、表征及抗原性

为了降低大豆的抗原性,通过糖基化反应制备了大豆7S球蛋白-大枣多糖(7S-JP)复合物.采用非对称场流分离技术在线联用紫外可见光检测器、多角度光散射检测器和示差折光检测器(AF4-UVMALS-dRI)研究糖基化反应温度、时间和物料比对7S-JP复合物结构的影响,对7S-JP复合物的回转半径、摩尔质量和构象进行表征;采用间接竞争酶联免疫吸附法探究7S-JP复合物的抗原性.AF4-UV-MALS-dRI结果表明:在反应温度为70℃、反应时间为20 min时,7S与JP糖基化反应效果最佳;当7S与JP的质量比为1∶3时,形成的7S-JP复合物结构紧密,有利于破坏其空间抗原表位,抗原抑制率为(69.1±0.99)%.

壳多糖酶3样蛋白1在肺癌诊断中的临床价值

目的探讨壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)在肺癌诊断中的临床价值。方法选取2022年1-12月安徽医科大学第一附属医院北区收治的106例肺癌患者为肺癌组,同期收治的76例肺良性疾病患者作为肺良性疾病组及20例健康体检者作为对照组,采用酶联免疫吸附试验法检测CHI3L1水平,化学发光法检测癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)水平。结果肺癌组血清CEA、ProGRP、NSE、CYFRA21-1、CHI3L1水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组血清CEA较肺良性疾病组明显升高,而血清CHI3L1较肺良性疾病组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与肺腺癌、肺鳞癌患者比较,小细胞肺癌患者血清NSE、ProGRP水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与肺腺癌、小细胞肺癌患者比较,肺鳞癌患者血清CYFRA21-1水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,肺癌组Ⅰ~Ⅱ期患者血清NSE、CYFRA21-1、CHI3L1水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。对CEA、ProGRP、NSE、CYFRA21-1、CHI3L1进行多因素Logistic逐步回归分析,发现NSE、CHI3L1对肺癌的发生产生影响。CHI3L1、NSE联合检测诊断肺癌的灵敏度为96.2%,特异度为90.0%,曲线下面积为0.965。结论血清CHI3L1可辅助肺癌的诊断与鉴别诊断,CHI3L1、NSE联合检测有助于临床对肺癌的早期发现,具有良好的临床应用价值。

基于熵权TOPSIS模型对白芨多糖脱蛋白体系的评价研究

利用熵权TOPSIS模型对比Sevage法、乙腈法和三氯乙酸(TCA)法脱除粗白芨多糖(BSP)蛋白的效果,探究熵权TOPSIS用于BSP脱蛋白体系评价的合理性。以BSP保留率和蛋白质脱除率综合评分,筛选出最佳处理条件;构建出包括单糖组分、氧化自由基清除能力(ORAC)、DPPH自由基半数清除浓度(IC_(50))在内的9个具体评价指标的白芨多糖脱蛋白评价体系,以紫外分光光度计和傅里叶变换红外光谱仪扫描为辅,以熵权TOPSIS对三种白芨多糖除蛋白方案的结果进行评价。经过综合评分,Sevage法最佳萃取次数为1次,此时的蛋白质脱除率为22.9%,多糖保留率为99.11%;乙腈法最佳质量浓度为60%,蛋白质脱除率为89.11%,多糖保留率为97.36%;TCA法最佳质量浓度为10%,蛋白质脱除率为70.64%,多糖保留率为70.03%;对比同浓度下三种多糖的ORAC值和IC_(50)发现,乙腈法处理的多糖ORAC值高于阳性对照组(P<0.05),Sevage法处理后的多糖具有最强的抗氧化活性;白芨多糖脱蛋白评价体系经熵权TOPSIS模型分析结果表明Sevage法脱蛋白效果最优与预期结果相符。研究结果表明熵权TOPSIS模型可用于白芨多糖脱蛋白体系评价。

蛋白质-脂质/多糖基复合递送系统的形成机制与应用研究进展

一些生物活性物质因难溶于水且生物利用率较低而使其应用受限,近年来如何有效递送生物活性物质广受关注。然而,脂质、多糖和蛋白质作为常用的食品级载体基质在单独使用时往往存在局限性,限制了它们在递送系统中的有效性。蛋白质-脂质和蛋白质-多糖偶联是用于制造新型递送系统的新兴技术,相较于单一的一元载体,多元偶联物在体内具有更好的协同作用,在提高递送系统封装效率的同时提高整个系统的稳定低,从而最大限度地发挥产品功能性质和生物活性。本文主要综述了脂质、多糖和蛋白质作为递送系统的重要性和局限性,横向对比了单一基质与多复合载体基质之间的优缺点,蛋白质-脂质/多糖二元基质作为主要研究对象,对其偶联机制、方法及其在营养递送中的作用优势进行了探讨,并对未来的研究方向进行了展望。

白及叶多糖脱色脱蛋白质方法及其抗氧化活性研究

以水提醇沉法提取白及叶粗多糖,通过比较活性炭、H_(2)O_(2)、大孔吸附树脂法脱色,三氯乙酸、Sevage、盐析法脱蛋白质,筛选出白及叶精多糖的最佳制备方法,并对白及叶精多糖进行结构表征和抗氧化活性测定。结果表明:白及叶精多糖的最佳制备方法为以AB-8大孔吸附树脂法脱色,以三氯乙酸法脱蛋白质。结构表征结果显示,白及叶精多糖由9种单糖组成,以半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖为主。抗氧化活性试验表明,白及叶精多糖具有一定的抗氧化活性。

基于静电相互作用的卵白蛋白与岩藻多糖相行为分析及流变学分析

为了解卵白蛋白(ovalbumin,OVA)与岩藻多糖(fucoidan,FUC)复合凝聚体的形成过程及二者的相互作用机制,采用浊度滴定、Zeta电位、圆二色光谱法、荧光光谱法和动态旋转流变仪测定等手段分析OVA和FUC的复合凝聚相行为及临界pH值(pHc、pHφ1、pHmax)。浊度滴定结果表明复合凝聚体形成的临界pH值与生物聚合物的比例和盐浓度密切相关,Zeta电位分析结果表明复合凝聚体的形成主要是由静电相互作用驱动。随着OVA/FUC的质量比增加,复合凝聚体形成的临界pH值向高pH值方向移动。低盐浓度(c(NaCl)<100 mmol/L)会促进凝聚体的形成,而较高的盐浓度(c(NaCl)≥100 mmol/L)则会因静电屏蔽作用使凝聚体形成的临界pH值显著降低。此外,在酸性条件下(pH 4.5),OVA/FUC质量比为20∶1和NaCl浓度为400 mmol/L时显示出最大的黏弹性。本研究可为开发基于硫酸化多糖/蛋清蛋白的功能性产品奠定理论基础。

血管生成素样蛋白8敲除减轻脂多糖诱导的肝脏脂质沉积

目的 探索血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)在脂多糖(LPS)诱导的肝脏脂质沉积中的作用及机制。方法 选取6~8周雄性野生型和ANGPTL8敲除小鼠,通过腹腔注射LPS(10 mg/kg)诱导脓毒症小鼠模型。荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏组织和免疫荧光检测HepG2细胞中ANGPTL8的表达;分别用谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和丙二醛(MDA)试剂盒检测血清ALT、AST水平及肝脏组织TG、MDA含量;HE染色观察肝脏组织的病理变化;油红O染色分析肝组织脂滴形成;TUNEL检测肝细胞凋亡;RNA-seq分析肝脏组织差异表达基因,并通过qPCR及Western blot进一步验证差异基因。结果 LPS刺激小鼠48 h后,肝脏ANGPTL8明显上调;与野生型小鼠相比,ANGPTL8敲除小鼠肝脏脂质沉积、脂肪变性和细胞凋亡显著减轻,血清中ALT、AST以及肝脏TG、MDA的水平显著降低;ANGPTL8敲除可上调LPS诱导的肝脏中小窝蛋白1(CAV1)的表达。结论 LPS促进肝脏组织ANGPTL8的表达和分泌,ANGPTL8通过抑制CAV1促进肝脏脂质沉积和过氧化,从而加剧LPS诱导的肝脏脂质沉积。

抑制连接蛋白43介导半通道活性促进脂多糖诱导的人牙髓细胞成牙本质分化

目的:探讨连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成牙本质分化过程中的作用和机制。方法:建立SD大鼠上颌第一磨牙损伤模型,免疫荧光(im munofluorescence,IF)染色检测Cx43在牙髓组织损伤后修复中的表达模式变化。分别采用0、1、10、100和1 000 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,筛选最适浓度,随后抑制和过表达hDPCs中Cx43的表达。实时定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹法检测Cx43和成牙本质分化相关因子牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dental matrix protein-1,DMP-1)、成骨相关转录因子(osterix,Osx)表达及细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)活性变化。进一步对hDPCs施以特异性Cx43通道抑制剂,检测Cx43介导的通道活性在hDPCs成牙本质分化中的作用,初步探讨Cx43调节LPS诱导的hDPCs成牙本质分化的作用和机制。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学处理。结果:IF结果显示,在健康牙髓组织中,Cx43主要表达于成牙本质细胞层,牙损伤3~24 h,Cx43表达减弱,随后逐渐上调,直至正常水平;损伤后3天~2周,表达呈下调趋势,并且表达于成牙本质细胞层和固有牙髓中。以10 ng/mL LPS刺激hDPCs 6 h,可显著上调DSPP的mRNA表达(P<0.01)。抑制Cx43,可显著上调hDPCs内LPS诱导的DSPP、DMP-1和Osx mRNA表达(P<0.05);过表达Cx43,则显著抑制LPS诱导的成牙本质分化相关因子表达(P<0.01)和DSPP荧光强度。以10 ng/mL LPS激活hDPCs内ERK信号,过表达Cx43可显著减弱LPS诱导的ERK信号活性(P<0.01)。抑制Cx43介导的半通道,促进LPS诱导的hDPCs成牙本质分化相关因子mRNA表达和ERK信号活性(P<0.05);而阻断Cx43介导的细胞间通道,则抑制成牙本质分化。结论:Cx43参与调控牙髓组织的损伤后修复,并且其表达整体呈下调趋势;抑制Cx43或阻断HC,可促进LPS诱导的ERK信号活性和hDPCs成牙本质分化。