丙泊酚通过组蛋白脱乙酰酶2/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白/N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体信号通路对子代大鼠学习和记忆功能的影响

目的探讨孕早期母体丙泊酚暴露对子代大鼠学习和记忆功能的影响。方法选取孕5-7 d的SD大鼠40只,采用随机数字表法将其分为A、B、C、D组,每组各10只。A组为对照组,B、C和D组妊娠大鼠分别注射0.25%、0.5%和0.75%的丙泊酚。子代大鼠出生后,根据是否给予组蛋白脱乙酰酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)抑制剂将其分为CS组(A组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、I0.25S组(B组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、I0.5S组(C组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、I0.75S组(D组子代大鼠给予HDAC2抑制剂)、CN组(A组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂)、I0.25N组(B组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂)、I0.5N组(C组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂)和I0.75N组(D组子代大鼠不给予HDAC2抑制剂),每组各10只。比较各组子代大鼠Morris水迷宫实验结果、海马HDAC2、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)、N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体(N-methyl-D-aspartate receptor 2B subunits,NR2B)mRNA及NR2B蛋白表达水平。结果第1-4天I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组子代大鼠的逃避潜伏期均显著长于CN组(均P<0.05),I0.75S组大鼠平台穿越次数显著少于CS组(P<0.05),I0.25S组、I0.5S组、I0.75S组子代大鼠目标象限停留时间分别显著长于I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组(均P<0.05)。当丙泊酚的暴露剂量增加,细胞出现线粒体空泡和高尔基体肿胀,HDAC2抑制剂可减轻丙泊酚暴露引起的子代海马功能障碍。I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组子代大鼠海马HDAC2 mRNA表达水平均显著低于CN组(均P<0.05),CS组、I0.25S组、I0.5S组、I0.75S组子代大鼠海马HDAC2 mRNA水平分别显著低于CN组、I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组(均P<0.05);CS组、I0.25S组、I0.5S组、I0.75S组子代大鼠海马CREB mRNA水平分别显著高于CN组、I0.25N组、I0.5N组、I0.75N组(均P<0.05);I0.25S组、I0.5S组和I0.75S组子代大鼠海马NR2B mRNA和NR2B蛋白表达水平分别显著高于I0.25N组、I0.5N组和I0.75N组(均P<0.05)。结论孕早期母体丙泊酚暴露损害子代大鼠学习和记忆功能,机制与其调节子代大鼠海马HDAC2/CREB/NR2B蛋白表达有关。

蛋白质棕榈酰化对离子型谷氨酸受体运输的调节作用

棕榈酰化是一种可逆的翻译后修饰,其对蛋白质的定位和功能具有重要的调节意义.离子型谷氨酸受体有N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体、α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体和人海藻酸受体.近期研究发现,它们的棕榈酰化修饰对其膜表面分布和内化均具有重要的意义.其中NMDA受体在其C末端有2个不同的棕榈酰化位点.1个位于C末端近膜区(CysclusterⅠ),它的棕榈酰化可以增高酪氨酸的磷酸化水平,增加受体膜表面分布,影响神经元中NMDA受体的组构性内化;另1个位于C末端中部(CysclusterⅡ),它受到蛋白质酰基转移酶GODZ的调节,使得受体在高尔基体大量积聚,从而影响受体的膜表面分布.与NMDA受体相似,AMPA受体也存在2个棕榈酰化位点.1个位于在第2跨膜域,受蛋白质酰基转移酶GODZ的调节,能导致AMPA受体在高尔基体的积聚.另1个位点在受体C末端近膜区,它的棕榈酰化能降低AMPA受体和4.1N蛋白的相互作用,并调节受体的内化.这两种离子型谷氨酸受体在棕榈酰化机制上虽然存在差异,但均对受体的运输、膜表面分布和内化具有十分重要的作用.

双异丙酚对紫绀型猪心脏体外循环中心功酶及钙蛋白的影响

目的在紫绀型(右→左分流)心脏病(猪)动物模型的体外循环中探讨双异丙酚对心功酶及心肌钙蛋白Ⅰ的影响。方法42条健康白猪于第一次手术前(T0)抽血测定乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸脱氢酶同功酶(LDH1)、磷酸肌酶(CK)、磷酸肌酸酶同功酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、心肌钙蛋白Ⅰ(CTnI)。做成紫绀型动物模型35条,将35条紫绀型猪随机分岁,2组,对照组(C组,19条)和双异丙酚组(P组,16条)。分别于第二次手术前(T1)、体外循环中主动脉开放后5 min(T2)、主动脉开放后30 min(T3)抽血测定LDH,LDH1,CK,CK-MB, AST,CTnI。结果两组实验体外循环中T2,T3时段LDH,LDH1,CK,CK-MB,AST,CTnI比T1时段明显增高(P< 0.01)。双异丙酚组在T2,T3时段CK,CK-MB,AST,CTnI比T1时段明低于对照组(P<0.05或0.01)。而两组间在T2,T3时段LDH,LDH1无明显差异(P>0.05)。结论在紫绀型心脏病体外循环缺血/再满足满足灌注的动物模型中,体外循环缺血/再灌注能明显增加LDH,LDH1,CK,CK-MB,AST,CTnT的释放。而双异丙酚能明显减少CK,CK -MB,AST,CTnT的释放,对心肌有一定的保护怍用。

蛋白质-L-异天冬氨酸(D-天冬氨酸)-甲基转移酶的研究进展

蛋白质-L-异天冬氨酸(D-天冬氨酸)-甲基转移酶(PCMT1)是一种修复酶,在人体组织中广泛表达,可以催化异构化的天冬氨酸残基转化为正常结构。PCMT1具有双重细胞功能,可作为RNA高甲基化酶和转录辅因子,参与信号转导和转录调控等重要的生物学过程。PCMT1基因的多态性亦与多种疾病有关。PCMT1可抑制神经元细胞和心肌细胞凋亡,参与调节代谢,并且与胚胎发育和衰老相关。此外,PCMT1在多种肿瘤组织中高表达,是多种肿瘤性疾病的不利预后因素,其可抑制肿瘤细胞的凋亡,协助肿瘤细胞的侵袭和转移,调节肿瘤血管的生成,并且可促进耐药性的产生。未来PCMT1可能作为若干疾病诊断和治疗的新靶点。

烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1对慢性帕金森病小鼠模型黑质中酪氨酸羟化酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3表达的影响

目的探讨烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)对慢性帕金森病(PD)小鼠模型(C57BL/6小鼠)黑质中酪氨酸羟化酶(TH)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)表达的影响。方法利用重组慢病毒转染1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备慢性PD小鼠模型。依据不同处理方式分为3组:对照组[经立体定位仪向小鼠双侧黑质注射空白对照重组慢病毒(LV-GFP),1周后腹腔注射生理盐水];MPTP组(经立体定位仪向小鼠双侧黑质注射LVGFP,1周后建立MPTP慢性PD模型);NMNAT1组[经立体定位仪向小鼠双侧黑质注射NMNAT1基因的过表达重组慢病毒(LV-NMNAT1),1周后建立MPTP慢性PD模型]。采用Western blot法检测3组小鼠黑质中TH及caspase-3半定量表达水平。结果 NMNAT1呈高表达的NMNAT1组黑质中TH蛋白表达量较MPTP组高(t=7.985,P<0.001),caspase-3蛋白表达量较MPTP组低(t=8.901,P<0.001)。结论 NMNAT1能增加TH表达发挥一定的神经保护作用,并通过减少caspase-3表达水平参与抗细胞凋亡。

稻谷人工老化后种胚异构天冬氨酸动态监测与总蛋白差异表达分析

蛋白质中天冬氨酸和天冬酰胺自发形成的异构天冬氨酸残基是组织细胞中常见的蛋白质共价损伤.在前人的研究中,PIMT1介导的种子寿命提高,很可能是由于修复了种胚中因老化处理而过量累积的含异构天冬氨酸(isoaspartyl,isoAsp)蛋白,维持了种胚的活性.然而,异构天冬氨酸蛋白甲基转移酶(protein L-isoaspartyl methyltransferase,PIMT)对于水稻种子活力的作用机制,仍然不甚明确.本研究利用RNAi干扰技术获得了稳定的OsPIMT1的低表达株系.种子经人工老化后,结果表明OsPIMT1的低表达影响种子发芽活力.随后对种胚中含异构天冬氨酸的蛋白进行动态检测,结果显示在未吸胀和吸胀过后的种子中,种胚中的OsPIMT1的表达都能降低isoAsp的累积.而RNAi株系中OsPIMT1的低表达导致isoAsp的过度积累,进而影响种子活力.同时利用老化5 d后的水稻种胚蛋白进行双向电泳,分析RNAi干扰种子老化过程中异构天冬氨酸过度积累对于种胚蛋白的影响,鉴定到与种子老化相关的氧化胁迫相关蛋白、糖酵解以及热激蛋白分子伴侣等蛋白.为进一步研究OsPIMT1表达对于种子老化后细胞各代谢途径的影响奠定了基础.

大豆异黄酮改善阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的机制

目的探讨大豆异黄酮(soybean isoflavones,SIF)改善阿尔茨海默病(Alzheimers disease,AD)大鼠学习记忆能力的机制。方法将70只大鼠随机分为正常对照组,假手术组,模型组,雌激素组和高、中、低剂量SIF治疗组,采用右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)25-35复制AD大鼠模型,给予不同剂量的SIF,通过检测逃避潜伏期、游泳时间百分比和2min内穿过平台次数评价大鼠学习记忆能力,观察并比较各组大鼠海马胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)活性和半胱天冬氨酸特异性蛋白酶3(cysteinyl aspartate-specific protease 3,caspase-3)的活性。结果与模型组比较,高、中、低剂量SIF组逃避潜伏期显著降低(P<0.01),游泳时间百分比和穿过平台次数显著增加(P<0.01),高、中剂量SIF组大鼠海马ChAT活性显著升高(P<0.01),各剂量SIF组AD大鼠海马caspase-3活性显著降低(P<0.01)。高、低剂量SIF组逃避潜伏期、2min内穿过平台次数、ChAT活性和caspase-3活性比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论大豆异黄酮通过调节AD大鼠海马ChAT和caspase-3活性,改善其学习记忆能力,并呈现一定的量效关系。

PCMT1/MST1通路在甲基丙二酸血症脑损伤中的作用

目的:探讨PCMT1/MST1通路在甲基丙二酸血症脑损伤中的作用。方法:培养小鼠皮层神经元,用不同浓度甲基丙二酸诱导小鼠皮层神经元,观察细胞形态变化。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测小鼠皮层神经元活力,Westernblotting法检测各组(甲基丙二酸诱导组、CGP3466B治疗组和对照组)神经元蛋白异天冬氨酸甲基转移酶1(PCMT1)、磷酸化蛋白激酶(MST1)、裂解MST1(cl-MST1)、磷酸化MST1(p-MST1)、Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果:不同浓度甲基丙二酸诱导24h显示,甲基丙二酸浓度≤8mmol·L^-1时神经元形态无明显变化;甲基丙二酸浓度为12mmol·L^-1时神经元胞内出现空泡,神经元突起缩短,胞体皱缩;甲基丙二酸浓度为16mmol·L^-1时神经元胞体脱落,突起几乎全部断裂。甲基丙二酸组神经元PCMT1、MST1蛋白相对表达量均低于对照组和CGP3466B治疗组(P<0.05),cl-MST1、p-MST1蛋白相对表达量均高于对照组和CGP3466B治疗组(P<0.05)。甲基丙二酸组Caspase-3、Bax蛋白相对表达量均高于对照组和CGP3466B治疗组(P<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量均低于对照组和CGP3466B治疗组(P<0.05)。结论:甲基丙二酸可引起皮层神经元凋亡,这可能是通过PCMT1/MST1通路来实现的。

大豆异黄酮对阿茨海默病大鼠ChAT和caspase-3活性影响

目的 :探讨大豆异黄酮(soybean isoflavones,SIF)改善阿茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆能力的作用机制。方法 :采用右侧杏仁核注射β-淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)制备AD大鼠模型,给予不同剂量的SIF,观察其对大鼠海马胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)活性和半胱天冬氨酸特异性蛋白酶3(cysteinyl aspartate-specific protease3,caspase-3)活性的影响。结果 :大豆异黄酮显著升高AD大鼠海马ChAT活性,降低AD大鼠海马caspase-3活性。结论 :大豆异黄酮对中枢胆碱能神经细胞损伤及脑细胞凋亡具有保护作用,能改善AD大鼠学习记忆能力。

NMNAT1对MES23.5帕金森病细胞模型Caspase8及TH蛋白表达影响

目的探讨烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)对帕金森病(PD)细胞模型MES23.5细胞Caspase8、酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达的影响。方法将MES23.5细胞分为6组,pEGFP组以NMNAT1高表达(NMNAT1-OE)空载质粒转染MES23.5细胞;pEGFP+MPP^+组以NMNAT1-OE空载质粒转染MES23.5细胞后,再向细胞内加入1-甲基-4-苯吡啶离子(MPP^+)100mmol/L;NMNAT1-OE+MPP^+组以NMNAT1-OE质粒转染MES23.5细胞,再向细胞内加入MPP^+100 mmol/L;pMagic4.1组以NMNAT1RNAi空载质粒转染MES23.5细胞;pMagic4.1+MPP^+组以NMNAT1 RNAi空载质粒转染MES23.5细胞,再加入100 mmol/L的MPP^+;NMNAT1-RNAi+MPP^+组以NMNAT1RNAi质粒转染细胞后,再加入100mmol/L的MPP^+。应用Western印迹分析方法检测各组TH、Caspase8蛋白表达。结果pEGFP+MPP^+组、pEGFP组、NMNAT1-OE+MPP^+组TH表达依次升高,Caspase8表达依次降低,3组间比较差异有显著性(F=18.46、13.26,P<0.05)。pMagic4.1组、pMagic4.1+MPP^+组、NMNAT1-RNAi+MPP^+组TH表达依次降低,差异有显著性(F=11.78,P<0.05);pMagic4.1+MPP^+组Caspase8表达最高,NMNAT1-RNAi+MPP^+组次之,pMagic4.1组最低,差异有显著意义(F=17.65,P<0.05)。结论 NMNAT1可能通过抑制Caspase8的表达、同时增加TH的表达而发挥神经保护作用。

IL-18/IL-18BP介导NK-92MI细胞杀伤GTKO猪内皮细胞的初步研究

目的探讨白细胞介素(IL)-18/IL-18结合蛋白(BP)介导自然杀伤(NK)-92MI细胞杀伤α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)猪内皮细胞的效应及可能机制。方法将NK-92MI细胞分为NK组、NK+IL-18组、NK+GTKO组、IL-18+NK+GTKO组和IL-18+IL-18BP+NK+GTKO组,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NK-92MI细胞中炎症相关基因的信使核糖核酸(mRNA)表达,乳酸脱氢酶(LDH)法检测NK-92MI细胞对GTKO猪内皮细胞的杀伤效应,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测GTKO猪内皮细胞的凋亡情况,蛋白质印迹法检测具有杀伤效应的蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果与NK组、NK+IL-18组以及NK+GTKO组比较,IL-18+NK+GTKO组NK-92MI细胞中干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8、IL-3、IL-6和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的mRNA表达水平均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与IL-18+NK+GTKO组比较,IL-18+IL-18BP+NK+GTKO组NK-92MI细胞中IFN-γ、TNF-α、IL-8、IL-3、IL-6和GM-CSF的mRNA表达水平均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与NK+GTKO组相比,IL-18+NK+GTKO组NK-92MI细胞中穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ蛋白表达水平均升高,NK-92MI细胞对GTKO猪内皮细胞的杀伤率增加,GTKO猪内皮细胞凋亡率增加,GTKO猪内皮细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2和裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase)-3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3的比例均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与IL-18+NK+GTKO组比较,IL-18+IL-18BP+NK+GTKO组穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ蛋白表达水平均降低,NK-92MI细胞对GTKO猪内皮细胞的杀伤率降低,GTKO猪内皮细胞凋亡率下降,GTKO猪内皮细胞中Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3/Caspase-3的比例均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论IL-18BP可阻断IL-18诱导的NK-92MI细胞中炎症相关基因表达和NK-92MI细胞杀伤GTKO猪内皮细胞的效应。

PIMT对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响

目的:探讨蛋白异天冬氨酰甲基转移酶(Protein isoaspartyl-methyltransferase,PIMT)过表达对类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响。方法:构建PIMT表达载体,转染RA-FLS细胞,检测PIMT在RA-FLS细胞表达水平,观察转染后RA-FLS细胞的凋亡情况。结果:转染后的RA-FLS细胞PIMT mRNA和蛋白质表达水平上升,与正常对照和转染空载体的RA-FLS细胞阴性对照相比较,转然后RA-FLS细胞的凋亡增加。结论:PIMT在RA-FLS细胞中表达下降是RA-FLS细胞凋亡减少的一个重要原因,PIMT在RA-FLS细胞增殖/凋亡失调中起作用。

抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展

目的综述抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展。方法本文结合自身研究工作,分析近5年文献,总结抗真菌药物靶标及其抑制剂的最新进展。结果β-1,3-葡聚糖合成酶、羊毛甾醇14α-去甲基化酶、N-肉豆蔻酰基转移酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶是目前研究最为集中的抗真菌药靶,其抑制剂显示了良好的新药开发前景。结论优化现有药物化学结构和发现全新作用机制的先导化合物,对研发新一代抗真菌药物具有重要意义。

增塑剂DIDP对肝脏氧化应激损伤及VitE拮抗作用研究

研究增塑剂邻苯二甲酸二异癸酯(didecyl phthalate, DIDP)致雄性小鼠肝损伤作用及其机理。以雄性BALB/c小鼠为受试动物,随机分为7组,包括溶剂对照组(生理盐水)、4个DIDP染毒组(0.15、1.5、15和150 mg·kg-1)、维生素E(vitamin E, VitE)(100 mg·kg-1)处理组和DIDP+维生素E处理组(150 mg·kg-1DIDP+100 mg·kg-1VitE),连续灌胃14 d。以肝组织匀浆测定活性氧(reactive oxygen species, ROS)、还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)和细胞凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteine aspartic proteinase 3, Caspase-3)水平。采用动物自动生化分析仪检测肝功能指标血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)、白蛋白(albumin, ALB)水平,并同时观察肝组织的病理变化与荧光染色结果。随着DIDP染毒剂量的增加,小鼠肝组织ROS、MDA和Caspase-3含量逐渐上升,血清ALT和AST水平也逐渐上升,GSH含量逐渐降低,血清ALB水平也逐渐降低,差异具有统计学意义(P <0.05,P <0.01);VitE处理组ROS、MDA和Caspase-3含量相应降低,血清ALT和AST水平也相应降低,GSH含量逐渐上升,血清ALB水平也相应上升。小鼠肝组织形态观察结果表明,随着DIDP染毒剂量的增加,小鼠肝组织的病理损伤程度呈上升趋势。研究表明,较高剂量(≥15 mg·kg-1)的DIDP能造成小鼠的肝脏损伤与细胞凋亡,抗氧化剂VitE可使肝脏损伤与细胞凋亡减轻,对小鼠肝组织起保护作用,说明氧化应激介导了DIDP对机体的损伤。

孕中期大鼠丙泊酚麻醉下手术对子代认知功能及海马HDAC2-CREB-NR2B信号通路的影响

目的评价孕中期大鼠丙泊酚麻醉下手术对子代认知功能及海马组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)-环腺苷酸效应元件结合蛋白(CREB)-含2B亚基的N-甲基-D-天冬氨酸受体(NR2B)信号通路的影响。方法孕14 d健康SD大鼠30只,采用随机数字表法分为3组(n=10):丙泊酚组(P组)、丙泊酚手术组(S组)和对照组(C组)。S组经尾静脉注射20 mg/kg丙泊酚,继之以20 mg·kg^(-1)·h^(-1)速率连续输注维持麻醉4 h并行剖腹探查术。P组除不行剖腹探查术外,余处理同S组;C组输注等量生理盐水。子鼠出生后30 d,采用Morris水迷宫实验评价子代大鼠学习记忆能力。采用Western blot法检测子代海马组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、磷酸化(p-)CREB、NR2B、脑源性神经营养因子(BDNF)和p-酪氨酸激酶B(p-TrkB)表达,TUNEL染色法检测海马神经元凋亡水平。结果与C组比较,P组和S组逃避潜伏期延长,穿越原平台位置次数减少,第二象限停留时间缩短,海马HDAC2表达上调,p-CREB、NR2B、BDNF和p-TrkB表达下调,神经元凋亡率增加(P<0.05);与P组比较,S组逃避潜伏期延长,穿越原平台位置次数减少,第二象限停留时间缩短,海马HDAC2表达上调,p-CREB、NR2B、BDNF和p-TrkB表达下调,神经元凋亡率增加(P<0.05)。结论孕中期大鼠丙泊酚麻醉下手术可降低子代认知功能,其机制与调控HDAC2-CREB-NR2B信号通路,促进海马神经元凋亡有关。

SET8介导AKT信号通路在调控高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的 探讨赖氨酸甲基转移酶SET8介导AKT信号通路在调控高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)钙化中的作用及机制。方法 (1)选取雄性SD大鼠进行体内实验并随机分为假手术组和慢性肾衰竭血管钙化组。取胸主动脉,采用von Kossa染色检测钙化情况;免疫组化法检测SET8和Caspase-3表达情况。(2)体外实验进行原代VSMCs培养,将细胞随机分为正常组和高磷组(10 mmol/L β-甘油磷酸)。采用邻甲酚酞络合酮比色法及茜素红染色检测细胞钙化情况;流式细胞法检测细胞凋亡情况;RT-PCR和Western印迹法检测SET8、AKT和Caspase-3的表达。(3)为进一步验证SET8在VSMCs凋亡中的作用,采用脂质体转染法,分3组:SET8-短发夹RNA(shRNA)组、空质粒组和正常对照组。采用邻甲酚酞络合酮比色法及茜素红染色检测细胞钙化情况;流式细胞法检测细胞凋亡情况;RT-PCR和Western印迹法检测SET8、AKT、Caspase-3的表达。结果 (1)体内实验中,慢性肾衰竭血管钙化组的血管钙盐沉积量明显高于假手术组(P<0.05);免疫组化结果提示,与假手术组相比,血管钙化组SET8表达明显降低,Caspase-3表达明显升高(均P<0.05);相关分析显示,血管组织SET8表达水平与钙含量、Caspase-3表达呈负相关(r=-0.948,P<0.01;r=-0.961,P<0.01)。(2)体外实验中,高磷组钙盐沉积明显高于正常组(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,高磷组VSMCs的凋亡率明显高于正常组(P<0.05);RT-PCR和Western印迹显示,与正常组相比,高磷组SET8和AKT的mRNA和蛋白表达下降,Caspase-3的mRNA和蛋白表达升高(均P<0.05)。(3)干扰SET8基因表达后,VSMCs钙化及凋亡率明显增加,AKT的mRNA和蛋白表达下降,Caspase-3的mRNA和蛋白表达升高(均P<0.05)。结论 SET8可以抑制血管钙化,其机制之一可能为通过促进AKT活化,抑制Caspase-3的表达,从而抑制VSMCs凋亡,进而参与调控高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化。

参泽舒肝胶囊联合谷胱甘肽治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床研究

目的探讨参泽舒肝胶囊联合谷胱甘肽治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床疗效。方法以2019年3月—2020年3月在郑州市第六人民医院进行诊治的98例非酒精性脂肪性肝炎患者为研究对象,根据就诊顺序分成对照组(49例)和治疗组(49例)。对照组口服谷胱甘肽片,0.4 g/次,3次/d;治疗组在对照组治疗基础上口服参泽舒肝胶囊,1.5 g/次,3次/d。两组均治疗12周。观察两组的临床疗效,比较两组治疗前后肝功能指标、血脂指标和血清学炎性因子的变化情况。结果经治疗,对照组总有效率为81.63%,显著低于治疗组(95.92%,P<0.05)。经治疗,两组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆红素(TBIL)水平均较治疗前显著下降(P<0.05);治疗后,治疗组肝功能指标显著低于对照组(P<0.05)。经治疗,两组总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均显著下降,但高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均升高(P<0.05);且治疗后,治疗组TC、TG、LDL-C水平均低于对照组,而HDL-C高于对照组(P<0.05)。经治疗,两组丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、成纤维细胞生长因子-21(FGF21)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)水平均显著下降,而可溶性白细胞分化抗原163(sCD163)、脂联素(APN)均显著上升(P<0.05);且治疗后,治疗组Vaspin、FGF21、PAI-1水平低于对照组,而sCD163、APN高于对照组(P<0.05)。结论参泽舒肝胶囊联合谷胱甘肽治疗非酒精性脂肪性肝炎具有较好的疗效,可有效改善患者肝功能,调节机体血脂水平,改善血清细胞因子水平,有着良好的临床应用价值。