家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)表面蛋白提取法研究

对微孢子虫表面蛋白的提取法研究表明，在微孢子虫的纯化中采用蔗糖法、甘油法及Ｐｅｒｃｏｌ法，结果Ｐｅｒｃｏｌ法是纯化微孢子虫的理想方法。微孢子虫表面蛋白采用高盐法、碱法及ＳＤＳ法提取，其蛋白量的ＯＤ值分别为０．０９４，０．０２１和０．２６８，ＳＤＳ法提取量最多。

评价改良的大鼠肝脏组织两步蛋白提取法

目的 探讨简单、易行的大鼠肝脏组织蛋白提取方法。方法 应用改良的大鼠肝脏组织两步蛋白提取法。结果 此方法提取蛋白方法简单 ,蛋白浓度高 ,易溶解 ,不易凝固、降解 ,电泳分离快。结论 该方法简单易行 ,费用低 ,质量高 ,可认为改良的两步法是提取大鼠肝脏组织蛋白的最佳方法。

比较MALDI-TOF MS直接涂片法与蛋白提取法鉴定洋葱伯克霍尔德菌群的应用研究

目的比较基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)直接涂片法和蛋白提取法鉴定洋葱伯克霍尔德菌群的差异。方法收集118株临床分离经VITEK全自动细菌仪鉴定为洋葱伯克霍尔德菌群菌株,采用MALDI-TOF MS直接涂片法和蛋白提取法进一步分析基因型,同时比较两种鉴定方法之间的优缺点。结果 118株洋葱伯克霍尔德菌群经MALDI-TOF MS两种方法只是鉴定结果分数有所差异,鉴定结果一致,分别为:93株Burkhoderia cencepacia(基因型Ⅲ型),11株多嗜伯克霍尔德菌(基因型Ⅱ型),10株洋葱伯克霍尔德菌(基因型I型),3株越南伯克霍尔德菌(基因型V型),1株吡咯伯克霍尔德菌(基因型Ⅸ型)。MALDI-TOF MS直接涂片法鉴定分数均值2.126,仅9株(7.62%)鉴定结果不可信(分值<1.700),准确鉴定至种(t≥2.300)与准确鉴定至属(t≥1.700)的比例分别为38.98%和92.38%;MALDI-TOF MS蛋白提取法仅2株(1.69%)鉴定结果不可信,准确鉴定至种(t≥2.300)与准确鉴定至属(t≥1.700)的百分比均高于直接涂片法,分别为44.92%和98.31%;但是不同分值分组间准确鉴定至种(分值≥2.300)、鉴定至属(分值≥1.700),两种方法差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MALDI-TOF MS可快速准确地鉴定洋葱伯克霍尔德菌群至基因型,临床标本鉴定时首选MALDI-TOF MS直接涂片法,对于鉴定结果不可信的菌株可进一步采用蛋白提取法鉴定。

一种基于SDS溶液高效提取土壤残留Bt蛋白的方法

通过对SDS浓度、孵育温度和孵育时间3种提取条件的研究,建立了一种基于SDS溶液的提取土壤中残留Bt蛋白的方法(简称SDS法)。在ρ(SDS)为2 g.L-1、孵育温度为50℃、孵育时间≥4 h条件下,采用SDS法可有效地从不同类型土壤样品中提取残留Bt蛋白,提取效果明显好于碳酸盐法、人造蠕虫肠道蛋白提取液法和PBST(phosphate buffer solution with Tween-20)法。

适用于双向电泳的杨树叶片蛋白质提取方法的研究

为了获得分离效果好、清晰度高的杨树叶片蛋白质双向电泳图像,本研究以小黑杨、毛果杨和84K杨叶片为材料,采用三氯乙酸—丙酮沉淀法、Tris-饱和酚法和Tris-三氯乙酸法提取杨树叶片总蛋白质,分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和双向凝胶电泳对蛋白质进行分离,应用Image Master 2D Platinum 6.0软件对这3种蛋白质提取方法得到的双向电泳凝胶进行分析。结果表明:Tris-三氯乙酸法最适用于双向电泳的杨树叶片蛋白质的提取。利用Tris-三氯乙酸法提取蛋白质得到的鲜样中总蛋白质平均含量为949.46μg·g-1,得到的蛋白质点平均数量为567个,所得到的双向电泳凝胶图谱分离效果好、清晰度高。

从胱氨酸母液中提取L-精氨酸工艺概述

介绍了特殊沉淀法、电渗析法和离子交换法从胱氨酸母液中提取L 精氨酸的过程,并讨论了NaCl、NH4Cl对离子交换法提取L 精氨酸的影响。

虾头虾壳蛋白质酶解制备抗氧化肽的研究

以凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)虾头、虾壳为原料,碱法提取蛋白质后,采用不同的蛋白酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶)酶解,以抗氧化活性和水解度为指标,筛选最佳水解用酶,并对该酶的酶解条件进行优化,对优化所得酶解物的抗氧化活性进行初步研究。结果表明,风味蛋白酶为最佳水解用酶,虾头虾壳蛋白质水解制备抗氧化肽的最佳工艺条件为:温度54℃、时间10.5 h、pH 8、加酶量8 000U·g^(-1),此条件下酶解液11-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为96.58%,还原力为0.77,水解度为15.62%,氧化自由基吸收能力(ORAC)为15.50μmol·L^(-1)。5 mg·m L^(-1)该酶解物的DPPH自由基清除率为82.09%,相当于相同浓度维生素C(Vc)抗氧化活性的90.50%,0.5 mg·m L^(-1)时ORAC为126.16μmol·L^(-1),相当于相同浓度Vc活性的79.73%。

基于免疫印迹定量分析的总蛋白提取方法比较

[目的]基于改良的对比蛋白提取结果的方法,探讨两种不同总蛋白提取方法对不同丰度蛋白提取得率的影响。[方法]小胶质细胞株N9总蛋白及商品化预染蛋白标准品,行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),三种常用图像软件定量免疫印迹结果,比较线性相关系数R^2;选择R^2值最高的软件,灰密度定量不同丰度p-IκBα经RIPA裂解液法和Minute试剂盒法蛋白提取后免疫印迹检测的p-IκBα蛋白得率。[结果]三种软件定量分析同一免疫印迹结果显示,Image Studio Lite的上样量与条带灰密度值的R^2最大(R^2=0.998);运用Image Studio Lite定量免疫印迹检测p-IκBα高丰度组,发现使用RIPA裂解液法比Minute法的p-IκBα提取得率高出7.5%,而p-IκBα低丰度组,前者p-IκBα的得率只有后者的41%,差异显著(P<0.05)。[结论]Minute试剂盒法在免疫印迹检测中对低丰度蛋白具有高提取得率的优越性。

海南菠萝蜜凝集素的分离纯化及其生物学特性初探

采用常规蛋白提取法、亲和层析法、体外凝集反应以及3 H -TdR掺入法 ;从菠萝蜜种子中提取凝集素 ,并探讨其生物学特性。试验发现 ,纯化的凝集素 (JL)由两个亚基以非共价键结合 ,分子量分别为12 0kDa和 14 5kDa ;JL可凝集人、猫、兔和鼠的新鲜红血球 ;促进体外培养的小鼠胸腺细胞、L92 9细胞增殖 ,但它却抑制了小鼠3 T3 细胞的增殖。

正交试验和BP人工神经网络模型优化胰蛋白酶提取鱼腥草多糖的工艺

目的:正交试验和BP神经网络模型优选胰蛋白酶法提取鱼腥草多糖的工艺条件。方法:以多糖得率及其含量为指标,结合正交试验和人工神经网络方法,考察加酶量、温度、时间对提取工艺条件的影响。结果:BP神经网络模型优化工艺为加胰蛋白酶量2.5%,于45℃温浸2.4 h;正交试验优选的工艺条件为加胰蛋白酶量2%,于45℃温浸时间2.5 h;前者的综合评分略高于后者。结论:BP神经网络模型法优选的提取工艺耗时短、耗能低,在实际应用中具有较好成效。