一种利用普通垂直电泳槽回收PAGE胶蛋白条带的简便方法

植物总蛋白样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离之后,直接用考马斯亮蓝染色、切胶回收目的条带,再用聚丙烯酰胺凝胶电泳槽电洗脱纯化得到单一条带的目的蛋白。此法可得到有活性的黄瓜衰老叶片中被特异激活的DNA酶,对样品中含量少,特别是与其他分子量相近的蛋白质十分有效。

Ig同型转换及寡克隆蛋白条带在免疫固定电泳图谱中的形态特点及其对多发性骨髓瘤患者骨髓移植疗效评价的意义

目的探讨Ig同型转换及寡克隆蛋白条带在免疫固定电泳（IFE）图谱中的形态特点及其对多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓移植疗效评价的意义。方法选取2004~2014年本院收治的MM患者64例,比较患者行骨髓移植前后血清蛋白电泳及IFE图谱资料,并进行分析与统计。结果 64例MM患者中,48.4%出现Ig同型转换和（或）寡克隆蛋白条带。异常蛋白条带（APB）首次出现中位数时间为移植后1.8（0~29）月。血清IFE结果提示71.0%的患者首先出现的是IgG kappa同型转换,IgG lambda占9.7%,IgA kappa占3.2%,IgA lambda占9.7%,IgM kappa占3.2%,LC占3.2%。移植后首先出现是以IgG kappa同型转换为多见。出现APB的患者与非APB患者无进展生存率分别为43%和0,差异有统计学意义（P=0.049）;完全缓解率分别为86.7%和61.5%,差异有统计学意义（P=0.03）。至随访结束,31例APB患者与33例非APB患者比较5年生存期,分别为83%和57%,差异无统计学意义（P=0.12）。结论 MM治疗过程中出现APB往往提示疗效更高,预后更好。对MM治疗过程中新出现APB特点的解释及正确认识也将影响疗效评价的正确判断。

切割海马伞大鼠海马自然凝胶电泳差异蛋白条带诱导神经干细胞迁移的作用

目的 :观察切割海马伞海马和正常海马组织自然凝胶电泳的差异性蛋白条带与大鼠神经干细胞共培养后细胞迁移的情况。方法 :用无血清培养技术从SD大鼠胚脑中分离、克隆和扩增神经干细胞备用。切割SD大鼠单侧海马伞 ,分别于术后不同时期取切割侧海马和正常侧海马进行 10 %的自然凝胶电泳。根据染色的蛋白条带位置将未染色的含差异蛋白条带的自然凝胶切成胶条块 ,分别放置于 2 4孔培养板各孔中并接种神经干细胞球与其共培养 ,观察神经干细胞的迁移情况。结果 :切割组蛋白胶块附近的神经干细胞球中的细胞特异性地向胶条方向迁移生长 ,这种现象切割组较正常组明显 ,在切割组中尤以 14天组最为显著。结论 :切割海马伞侧海马和正常海马组织自然凝胶电泳差异性蛋白条带能诱导神经干细胞向其定向迁移生长 。

异常蛋白条带在含硼替佐米方案诱导序贯自体造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤患者中的意义

目的研究接受含硼替佐米方案诱导序贯自体造血干细胞移植（ASCT）治疗多发性骨髓瘤（MM）患者出现异常蛋白条带（APB）的临床意义。方法回顾性分析2007年1月至2012年7月接受含硼替佐米方案诱导序贯ASCT治疗68例MM患者的资料，采用免疫固定电泳方法检测M蛋白。结果33例（48．5％）MM患者出现APB，2例轻链型在诱导化疗达完全缓解（CR）后移植前首次出现APB，31例患者在移植后中位时间104（33—404）d首次出现APB，APB出现例次中位数为2（1—7）次，持续中位时间为105（35～801）d。33例出现APB组患者移植后疗效显著高于35例未出现APB（Non—APB）组患者，CR＋非常好的部分缓解（VGPR）率分别为100．O％和85．7％（P=0．017），CR率分别为87．9％和62．9％，差异有统计学意义（P=0．03）。两组患者在性别、年龄、HGB、ALB、13：微球蛋白水平、MM类型、D—S分期、ISS分期、硼替佐米一线或二／三线治疗例数、含硼替佐米化疗疗程数及自体造血干细胞移植方式上差异均无统计学意义（P〉0．05）。中位随访33．4（7．0～71．7）个月，与Non—APB组比较APB组患者OS更长，目前差异尚未显示统计学意义（P〉0．05）。17例首次出现APB时间在移植后≥6个月与14例移植后〈6个月内患者比较总生存期更长，目前尚未显示统计学差异（P〉0．05）。结论接受含硼替佐米方案诱导序贯ASCT治疗的MM患者出现APB者疗效更高、预后更好。

幽门螺旋杆菌IgG抗体及现症感染条带(CIM)蛋白抗体联合检测在健康查体人群中的临床应用

目的探讨采用胶体金幽门螺旋杆菌IgG抗体和现症感染条带蛋白抗体联合检测在健康查体人群中的临床应用价值,了解查体人群HP现症感染情况及治疗依据。方法采用采胶体金幽门螺旋杆菌IgG抗体和现症感染条带蛋白抗体联合检测试剂盒对1 434名查体者进行HP感染检测,并对HP阳性者随机抽样进行组织学检查以明确诊断,并对两种方法检测结果进行统计学分析。对现正感染者进行内科规范治疗后再次做现正感染条带的复检。结果健康查体人群HP感染率为58.2%,CIM线感染检出率98.4%,组织学检查感染检出率98.8%,二者差异无统计学意义(P>0.05),男女检出率二者无显著差异(P>0.05)。治疗后CIM线消失或减弱说明有效率为89%。结论采用胶体金幽门螺旋杆菌IgG抗体和现症感染条带蛋白抗体联合检测适合各级医院大规模查体需要,也可作为现正感染者的对症治疗依据和疗效观察,具有较高的临床应用价值。

不同保存方法对厚壳贻贝样品蛋白提取效果的比较

为了解厚壳贻贝(Mytilus coruscus)稚贝样品在冷冻保存过程中的蛋白变化情况,作者采用直接冷冻法、添加海水冷冻法、蛋白裂解液冷冻法等分别对保存1周至6个月的厚壳贻贝样品蛋白提取的不同效果进行了比较。SDS-PAGE胶结果显示,3种冷冻保存方法均出现4个有规律条带(a、b、c、d),其相对分子量依次约为55、46、38和26kDa。SDS-PAGE蛋白条带灰度值的检测结果表明,1个月内蛋白裂解液法保存的样品最佳;直接冷冻法和添加海水冷冻法的研究发现保存过程中的蛋白均出现不同程度的降解现象,因而可能不适宜用于该种稚贝样品的保存。

SDS-PAGE电泳蛋白染色方法研究进展

SDS-PAGE电泳结束后,蛋白质条带染色是其中一个重要的步骤。目前蛋白质染色方法主要有考马斯亮蓝染色法、银染法、荧光染色法、负染法等,其中考马斯亮蓝染色法又分为传统考染和胶体考染;银染又分为银染A法和银染B法;每种方法各有利弊,目前,对染色方法改进主要集中在如何提高蛋白质染色的灵敏度,缩短染色时间,用无毒的化学物质去替换现在凝胶电泳中常用的有毒物等方面。如何在保持方法高灵敏度的同时,又能够有效地降低染色背景是亟待解决的问题,也是未来的发展方向。

多发性骨髓瘤干细胞移植术后伴异常蛋白带与疗效和预后的相关性

多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是B淋巴细胞恶性克隆性疾病,虽然传统的化疗可以使病情得到一定控制,但很少有患者能够取得完全缓解,更不能治愈。近年来,MM患者采用自体或异体基因造血干细胞移植治疗呈逐年增多趋势,并取得了显著的临床疗效,然而造血干细胞移植术后,患者常常出现不同于初诊类型的新的M蛋白或寡克隆蛋白带,或者初诊M蛋白的迁移率发生了变化。

凝胶电泳蛋白质染色方法研究进展

蛋白质条带染色是蛋白质凝胶电泳中一个重要的步骤。目前的方法主要有考马斯亮兰染色、银染、荧光染色、负染等。将考马斯亮兰与BBR相结合进行染色,可以减少染色/脱色的次数,能够提高考马斯亮兰在蛋白质条带上的染色效果。Gallyas Intensifying方法与银染相结合,能提高用银染已经检测到的蛋白质条带的亮度,使蛋白质点之间及其与背景之间更容易区分。将银染与考马斯亮兰结合起来进行染色可以提高同一块胶上微量蛋白质检测灵敏度。目前,对染色方法改进主要集中在如何提高蛋白质染色的灵敏度,操作方便与否,费用是否昂贵等方面。如何在保持银染方法高灵敏度的同时,又能够有效地降低染色背景,用无毒的化学物质去替换现在凝胶电泳中常用的有毒物质,克服荧光染色使蛋白质化学性质改变的缺点,在保持负染不修饰蛋白质条带化学性质优势的同时,对蛋白质条带染色结果加以改善等,可能代表了蛋白质条带染色的未来发展方向。

赤眼蜂寄生对亚洲玉米螟卵内蛋白质变化的影响

采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳方法比较了玉米螟赤眼蜂寄生对亚洲玉米螟卵内蛋白质变化的影响。结果发现,寄生发生48h后,蛋白质谱带出现明显差异。被寄生和未被寄生卵内含有的97kD蛋白质在60h后明显减少,而前者含有的90kD蛋白质在寄生发生60h时含量明显增加;此外,被寄生和未被寄生卵电泳后均出现约50和44kD蛋白质条带,但在寄生发生84h后,这两条蛋白质带明显变浅,且未被寄生卵的改变更明显。同一时期被寄生和未被寄生卵间约有50%蛋白质条带出现在相同位置,而72、96h的寄生和未被寄生卵间约有30%。被寄生和未被寄生卵之间,同一时期的蛋白质条带数一般相差4条左右,但寄生发生6h后相差的条带数多达9条,这一时期出现与寄生和抗寄生有关的特异性蛋白质的可能性较大。

核桃子叶不定根发生调控的研究

以核桃成熟或近成熟种实子叶为试材 ,在 1 4DKW基本培养基上其顶部 (近胚端 )的生根率达1 0 0 % ,而中部和基部 (远胚端 )的生根率为 0。在生根过程中顶部内源吲哚乙酸 (IAA)表现为初期上升 ,其后稳定在一定水平 ,当根原基开始生长时 (培养 4d)出现一个高峰 ;而中、基部内源IAA水平在培养初期下降 ,而后维持在一定的水平 ;蛋白凝胶电泳分析表明 :62 .8和 3 8.4kDa是与子叶不定根发生相关的蛋白条带 ,在不定根发生过程中 ,该带在子叶顶部表达增强 ,而中部、基部则消失。当培养基中附加一定水平的吲哚丁酸(IBA) ( 0 .5～ 1 0mg·L- 1 )时 ,子叶中、基部被诱导产生不定根 ;附加 2mg·L- 1 IBA ,其内源IAA的变化与子叶顶部在 1 4DKW基本培养基上发根时有相似的趋势 ;同时该处理启动表达了 62 8kDa蛋白条带和抑制表达3 8 4kDa蛋白条带。反之当培养基中附加 6-苄氨基腺嘌呤 (BAP)又抑制子叶生根 ,也抑制了与生根相关的IAA变化和蛋白表达。这一结果和良好的研究模式为从分子水平上深入认识木本植物不定根发生机制奠定了基础。

ATM/ATR-p53-Bcl2/Bax通路在PRPS2表达下调致HCT116凋亡中的作用研究

共济失调毛细血管扩张征突变基因（ataxia-telangiectasia mutated gene,ATM）属于一种DNA修复基因,定位于染色体11q22-q23。本研究拟采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法和Western blot检测ATM/ATM与Rod 3相关蛋白激酶（ATR）-p53-Bcl2/Bax通路中关键基因ATM、ATR、p53、Bax、Bcl-2表达变化。以期阐明PRPS2表达下调致HCT116凋亡发生的分子机制。

一种改进的银染方法

本文介绍一种改进的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳的银染方法,通过对常用的Merril等人银染方法一些步骤的修改,染色后背景颜色明显减低、灵敏度明显提高,与原法相比提高近6倍,可检出低至0.38ng的蛋白条带。

解脲脲原体上转换发光免疫层析试纸条的制备

目的:获得抗解脲脲原体外膜多条带蛋白(MB蛋白)的多克隆抗体,制备能够用于解脲脲原体检测的上转换发光免疫层析试纸条。方法:以体外表达的解脲脲原体外膜MB蛋白N端保守性序列为抗原,免疫小鼠制备抗MB蛋白的抗体,ELISA检测免疫动物血清抗MB抗体滴度,并以小鼠抗体标记上转换发光体颗粒(UCP颗粒),制备能够检测解脲脲原体的上转换发光免疫层析试纸条。结果:解脲脲原体多条带蛋白免疫动物血清抗MB的IgG抗体滴度均超过1∶25600,以此抗体为基础建立的解脲脲原体上转换发光免疫层析试纸条能够识别1～200μg/L的解脲脲原体MB抗原。结论:初步制备的上转换发光免疫层析试纸条能够检测解脲脲原体。

颗粒胶等电聚焦电泳

蛋白质分离纯化的方法很多,如离心、色谱、电泳等等。但是要想得到纯度较高的某种蛋白质,往往需要经过很多繁琐复杂的过程,在这“几经周折”的过程中,会因种种因素而影响到纯品的获得量。近几年来,蛋白质纯化的新趋势是使用制备型等电聚焦电泳技术。此技术的最大优点是它的浓缩能力和“一步”达到高度纯化。所以。

寡克隆条带和(或)Ig同型转换对多发性骨髓瘤的疗效和预后评价的意义

目的:研究多发性骨髓瘤(MM)治疗后出现寡克隆条带和(或)Ig同型转换对疗效和预后评价的意义。方法:回顾性分析2018年8月—2021年7月接受化疗、自体造血干细胞移植(ASCT)、嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)治疗的连续入组的72例MM患者的临床资料,应用免疫固定电泳检测M蛋白。结果:8例(11.1%)患者发生异常蛋白条带(APB),APB持续中位时间为2.5(1.1,6.3)个月,诊断MM至出现APB的中位时间为12.5(9.5,34.8)个月,发生APB前的末次治疗至出现APB的中位时间为2.2(0.7,5.7)个月。APB的发生与性别、年龄、ECOG评分、肌酐、血钙、乳酸脱氢酶、血红蛋白、血小板计数、骨髓浆细胞比例、染色体核型等基线特点无关,与β2-微球蛋白和总蛋白水平相关(P<0.05)。APB组≥非常好的部分缓解率明显高于非APB组(100.0%vs 42.2%),差异有统计学意义(P=0.002)。APB组患者的中位生存期为25(95%CI 18~27)个月,非APB组患者的中位生存期为23(95%CI 18~27)个月,2组比较差异无统计学意义。接受化疗和ASCT治疗的患者中,APB组较非APB组的生存时间长,但差异无统计学意义;接受CAR-T细胞治疗的患者中,非APB组的中位生存时间为23(95%CI 20~28)个月,明显低于APB组的54(95%CI 39~54)个月,差异有统计学意义(P=0.028)。结论:在不同方案治疗后出现APB的患者具有更好的疗效;CAR-T细胞治疗后发生APB的患者预后更好。

多发性骨髓瘤继发心肌淀粉样变性1例并文献复习

目的报道1例多发性骨髓瘤(MM)继发心肌淀粉样变性患者3. 5年的诊治过程,总结治疗经验及获益。方法对本例患者的临床资料进行分析,并结合相关文献进行复习。结果本例临床获益:(1)诊断早;(2)硼替佐米采用皮下注射方式,3. 5年无周围神经系统不良反应;(3)治疗后血清游离轻链比率正常化且出现异常蛋白条带,提示预后良好;(4)淀粉样变性器官功能改善明显,延长了生存期。结论 MM继发心脏淀粉样变性,若能早期诊断和迅速进行"源头治疗",亦能获得非常好的血液学缓解及器官功能改善,进而延长生存期。

枯草芽孢杆菌LL18-4产类细菌素的分离纯化及特性研究

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LL18-4菌株分泌物中的类细菌素通过硫酸铵盐析法粗提后,经过Sephadex G-75、DEAE-Sephadex A 50和Sephacryl S-200HR分步柱层析,SDS-PAGE电泳检测到单一蛋白质条带,分子量约为60 kD.该类细菌素在酸性条件下及80%饱和度的硫酸铵溶液中具有较高的稳定性,可4℃放置3个月仍保持80%以上活性;对有机溶剂有一定的耐受性;Mg^(2+)能提高其抑菌活性.指数增长前期添加柑桔绿霉(Peniicilbumdiigitatum)病原真菌的培养液可以提高该类细菌素的分泌量.

醋酸纤维薄膜电泳在早期发现妊娠高血压疾病中的作用

目的:利用传统的醋酸纤维薄膜电泳技术,为妊娠高血压疾病临床早期发现提供及时、可靠的诊断依据;方法:随机抽取初次孕检孕妇311例,常规尿检后进行蛋白成分电泳分析并予以追踪;根据有无血压升高分为两组,两组孕妇的年龄、产次、孕周无限定;用美国HELENA公司所研发的HELENA扫描光密度计软件对试验电泳图胶片进行编辑、定位、分析。结果:大多数高血压组孕妇尿中蛋白以2+为主,高血压孕妇尿液蛋白成分多于非高血压孕妇,高血压孕妇尿γ蛋白成分高于非高血压孕妇(P<0.05)。结论:醋酸纤维薄膜电泳具有操作简便、易于量化、便于分析、费用低廉等特点,能及时发现尿中蛋白的微量变化,可作为早期发现妊娠高血压疾病的检查方法。

猪S14R基因的克隆与原核表达

肝脏中表达的S14-related(S14R)基因是碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)的葡萄糖响应靶基因。S14R与S14在促进肝脏组织的脂肪酸从头合成中有重叠作用。为进一步研究猪S14R基因所编码蛋白质的生物学功能,本试验设计了一对引物,利用RT-PCR方法成功克隆了猪S14R基因,猪S14R基因长度为549bp(GenBank No.JN793537),开放阅读框为549bp。