蛋白染色法测定蛋白改性纤维蛋白含量的可行性研究

在分析现有含蛋白改性纤维产品蛋白含量检测方法的基础上,利用蛋白染色方法检测蛋白含量,分析了影响测试结果的各类因素。结果表明,酸、碱、有机溶剂等不适宜作为萃取试剂来进行蛋白提取;低浓度盐适宜用作萃取试剂,萃取条件为:室温、振荡萃取30 min、变色反应时间5 min。使用蛋白染色法测试含蛋白改性纤维产品蛋白含量操作简单,具有可行性。

SDS-PAGE电泳蛋白染色方法研究进展

SDS-PAGE电泳结束后,蛋白质条带染色是其中一个重要的步骤。目前蛋白质染色方法主要有考马斯亮蓝染色法、银染法、荧光染色法、负染法等,其中考马斯亮蓝染色法又分为传统考染和胶体考染;银染又分为银染A法和银染B法;每种方法各有利弊,目前,对染色方法改进主要集中在如何提高蛋白质染色的灵敏度,缩短染色时间,用无毒的化学物质去替换现在凝胶电泳中常用的有毒物等方面。如何在保持方法高灵敏度的同时,又能够有效地降低染色背景是亟待解决的问题,也是未来的发展方向。

核仁组成区相关嗜银蛋白染色方法探讨

核仁组成区相关嗜银蛋白染色方法探讨刘勇戴艳枝江西省人民医院病理科（南昌３３０００６）关键词核糖体基因；嗜银蛋白；嗜银蛋白染色；肿瘤核仁组成区（ＮｕｃｌｅｏｌａｒＯｒｇａｎｉｚｅｒＲｅｇｉｏｎｓ，ＮＯＲ）是位于某些染色体上特殊部位的核糖体基因（ｒＤＮ...

温度和时间对核仁组成区嗜银蛋白染色结果的影响

目的探讨温度和时间对核仁组成区嗜银蛋白染色结果的影响。方法胃癌标本12例做连续切片并分组,设定染色的温度和时间,观察染色结果并做统计学处理,行组间两样本均数比较的t检验,确定两组之间是否不同。结果温度37℃时间12分钟组,室温(16℃)时间12分钟组,温度37℃时间16分钟组,室温(16℃)时间50分钟组均与温度60℃时间12分钟组不同,P<0.01或P<0.05。结论较低温度下延长时间的染色未必能取得较高温度下的染色效果。

固定剂对动脉管壁弹性蛋白染色的影响

血管壁的形态和弹性问题与临床联系较密切,而管壁中弹性蛋白(弹性纤维)的相对含量、立体构筑及代谢状况对维持血管尤其是动脉的正常结构及弹性回缩功能起着重要作用。在用图像分析技术对动脉管壁弹性蛋白进行定量分析时,为避免其它成份混染造成的测量误差,常采用特殊染色法单独显示弹性蛋白。

人乳头瘤病毒感染细胞的核仁组成区嗜银蛋白染色研究及临床意义

本文采用细胞核仁组成区嗜银蛋白技术观察了人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染阳性食管癌蜡块切片２Ｏ例，阴性组１４例。结果发现ＨＰＶ感染阳性癌肿细胞核仁组成区嗜银蛋白计数（１１．３５６±１．６２８，－ｘ±ｓ）明显高于阴性组（５．３３９±０．７９６，－ｘ±ｓ），两组差异显著（Ｐ＜０．０５）。该结果说明ＨＰＶ感染阳性的食管癌细胞的增殖较阴性活跃，ＨＰＶ感染性癌肿的恶性度较阴性高，预后差，对食管癌的临床治疗有一定的指导意义。

与弹性蛋白染色相比,h-Caldesmon和desmin在胃癌、胰腺癌和结直肠腺癌血管侵犯检测中更优异

血管浸润被认为是许多恶性肿瘤预后不良的指标。为比较弹性蛋白染色（van Gieson及Orcein法）与2个平滑肌标志物（h-Caldesmon和desmin）之间的的敏感性。作者选取了27例胃（29.3％）、35例胰腺（38.0％）和30例结直肠（32.6％）切除标本，将血管侵犯的模式临时分为A型（病灶侵犯动脉，附近无静脉伴随）、T型（病灶侵犯静脉前方，无动脉相伴）及X型（所使用4种染色中的任何一种出现病灶侵犯）。结果共发现369个病灶，平滑肌标志物比弹性蛋白染色更敏感。

琼脂蛋白染色中一种简便去除游离蛋白的方法

目的:在琼脂蛋白染色过程中,探寻一种简便的去除游离蛋白的方法。方法:取做IgG单扩测定后的琼脂板,取下琼脂膜,分别包在浸有生理盐水、自来水、蒸馏水的湿棉布中,室温放置,待琼脂膜完全自然干燥后,取出,用氨基黑法染色、脱色观察。结果:浸有自来水的湿棉布包裹干燥后的琼脂板,染色后背景透明,无任何染料沉积,扩散环清晰,染蓝色。结论:用浸有自来水的湿棉布包裹的使琼脂干燥的方法,可以完全去除琼脂板中的游离蛋白。

骨髓细胞嗜银蛋白染色在血液病中的应用价值

骨髓细胞嗜银蛋白染色在血液病中的应用价值刘茂发，孔庆芬（南昌第一附属医院血液科３３０００６）陆素贞（南昌第一附属医院检验科３３０００６）１材料与方法为１９９２年６月至１９９３年６月底从我科门诊及住院病人中随机收集的各类血液病病人１１４例，其中男性５６...

500拉德γ-射线照射对大鼠肝脏非组蛋白染色体蛋白的影响

500拉德;钴-线照射后,大鼠肝脏非组蛋白染色体蛋白,经等电聚焦—SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,考马斯亮兰R250染色,蛋白斑点可达到高度的重复性。UP组分可以看到100—150个蛋白斑点,NP可以看到40—60个蛋白斑点。照射后不同时间,在凝胶板上,蛋白斑点的变化,与放射病的发展有一定的关系。本文就辐射致癌和辐射致畸等原理进行了讨论。

不同日龄大鼠肝脏中非组蛋白染色体蛋白(NHCP)两相电泳图谱比较

本文报导了不同日龄大鼠肝脏中非组蛋白染色体蛋白(UP)和(NP),在高分辨率的等电聚焦—SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上蛋白斑点出现规律性变化。并讨论了这一变化与大鼠不同发育阶段的激素水平和基因调节的关系。

肺癌病理应用支气管冲洗细胞块免疫组化链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法染色的诊断效果及检出率评价

目的探讨肺癌病理应用支气管冲洗细胞块免疫组化链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP)染色的诊断效果及检出率。方法选取2017年2月至2021年12月广东省开平市中心医院收治的70例经支气管冲洗液检查阳性患者作为研究对象。采用液基薄层细胞学(TCT)技术制备细胞块,分别采用免疫组化SP法、苏木精伊红染色(HE)进行常规细胞学检查,比较两种检测方法诊断效能及不同肺癌类型免疫组化SP法检查后不同抗体阳性表达率比较。结果免疫组化SP法对恶性肿瘤诊断的灵敏度为96.15%、准确度为95.71%,均高于HE染色的69.23%、70.00%(P<0.05),特异度为94.44%,高于HE染色的72.22%,但差异无统计学意义。免疫组化SP法对肺癌病理类型总检出率高于HE染色,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化SP法对肌上皮(p63)、细胞角蛋白5/6抗体(CK5/6)、细胞角蛋白7(CK7);甲状腺转录因子-1(TTF-1)、突触素(Syn)、人表皮生长因子受体-5(CD56),增殖细胞的核抗原(Ki67),天冬氨酸蛋白酶(Napsin-A)表达阳性率均高于HE染色,差异统计学意义(P<0.05)。不同类型肺癌患者p63、CK5/6、CK7、TTF-1、Syn、CD56、Ki67、Napsin-A阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论支气管冲洗液细胞块免疫组化SP法染色对肺癌有较高的诊断价值,对不同类型肺癌有较高的检出率及鉴别率,具有重要的临床意义。

染色体结构维持蛋白4在乳腺癌组织中的表达及其临床病理学意义

目的:探究染色体结构维持蛋白4(SMC4)在乳腺癌中的表达及其评估患者预后的价值。方法:利用TIMER、GEPIA等数据库数据分析SMC4在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征间的相关性;用免疫组化法检测SMC4蛋白在乳腺癌组织中的表达,并探讨其与乳腺癌临床病理特征之间的关系;通过Cox回归模型、Kaplan-Meier生存曲线、GEPIA数据库数据评估SMC4表达与乳腺癌患者生存期之间的关系。结果:生物信息学分析结果显示,SMC4 mRNA在乳腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01),并与临床分期、淋巴结转移及化疗耐药密切相关(均P<0.05)。免疫组化法检测结果显示,在乳腺癌组织中SMC4的阳性及强阳性表达率均显著高于癌旁组织(均P<0.05);SMC4蛋白的高表达与乳腺癌患者年龄、临床分期和淋巴结转移密切相关(均P<0.05)。SMC4蛋白低表达组的患者累积生存率显著高于SMC4蛋白高表达组,尤其是在HER2阳性乳腺癌患者中(均P<0.05),且SMC4是乳腺癌患者预后的独立危险因素。结论:SMC4在乳腺癌组织中呈高表达,SMC4高表达与乳腺癌患者的淋巴结转移、临床分期及预后密切相关,可作为乳腺癌诊断与预后评判的潜在标志物。

微小染色体维持蛋白2基因诱导性敲除宫颈癌HeLa细胞系的建立及对DNA复制的影响

目的利用诱导性CRISPR/Cas9技术建立微小染色体维持蛋白2(MCM2)基因敲除的宫颈癌HeLa细胞系,并探究MCM2对DNA复制及复制压力的影响。方法使用诱导性CRISPR/Cas9系统TLCV2,构建MCM2敲除HeLa细胞系;并分为对照组(Control)、敲除1组(KO1)和敲除2组(KO2)。通过Western blot、EdU掺入实验、实时定量PCR、免疫荧光、CCK-8等实验,分析MCM2敲除对DNA复制和羟基脲诱导复制压力的影响。结果经过诱导后CRISPR/Cas9系统有效地敲除MCM2基因,并影响MCM2-7复合物的稳定。与对照细胞相比,MCM2敲除细胞DNA复制能力显著下降,同时Cyclin A1、Cyclin E1和CDK4的mRNA表达水平降低。在DNA复制压力下,MCM2敲除降低了细胞的存活能力、DNA损伤修复能力,并增加基因组的不稳定性。结论MCM2基因敲除降低正常条件下HeLa细胞的DNA复制能力,并降低复制压力后细胞的存活能力。本研究成功地构建了诱导性MCM2基因敲除HeLa细胞系,为进一步研究MCM2基因在宫颈癌中的作用及其生物学功能奠定了基础。

微小染色体维持蛋白复合物6、细胞分裂周期相关蛋白6在肾透明细胞癌组织中的表达及其与恶性生物学行为的相关性研究

目的:探讨微小染色体维持蛋白复合物6(MCM6)、细胞分裂周期相关蛋白6(CDC6)在肾透明细胞癌组织中的表达及其与恶性生物学行为的相关性。方法:2021年1月-2023年12月就诊于天津市中西医结合医院泌尿外科的77例肾透明细胞癌患者,选取其癌组织作为研究组,同源远侧的正常肾组织为对照组;基于GEPIA数据库MCM6和CDC6相关信息,应用单克隆抗体免疫组化技术比较研究MCM6和CDC6在肾透明细胞癌组织和正常组织中的表达;采用qRT-PCR和Western Blotting检测shRNA对MCM6表达的影响:应用CCK-8和集落形成试验检测HTB-47和CRL-1932细胞系的体外增殖结果。结果:与正常肾组织相比,MCM6/CDC6在肾透明细胞癌组织中明显上调,且MCM6上调与患者无病生存率降低相关(P<0.05);敲低HTB-47和CRL-1932细胞系的MCM6基因可显著抑制肿瘤细胞的增殖,并显著阻滞了肿瘤细胞分裂周期停留在G2/M期;MCM6的表达与肾癌体积大小显著相关(P=0.010),根据GEPIA数据库显示,CDC6与MCM6有明显的相关性(P<0.01),所有表达结果均通过免疫组化染色检测进一步验证。结论:MCM6的表达上调与肾透明细胞癌的恶性生物学行为和临床进展有关,其可通过影响细胞周期来调控细胞增殖,在肾透明细胞癌组织中,MCM6和CDC6表达量均显著上调且关系密切,表明MCM6/CDC6可能成为预测肾透明细胞癌的潜在生物标记物,并可能成为该病靶向治疗一个新的治疗靶点。

液基薄层细胞学检查联合人乳头状瘤病毒、P16蛋白免疫组化染色检测在宫颈癌筛查中的价值

目的分析液基薄层细胞学检查(TCT)联合人乳头状瘤病毒(HPV)、P16蛋白免疫组化染色检测在宫颈癌筛查中的价值。方法选取2021年7月至2023年5月于京山市人民医院接受宫颈癌筛查的180例女性,进行TCT、HPV、P16蛋白检测,以病理结果为金标准,分析不同检测方法的诊断效能。结果病理结果显示,180例中,阳性50例,阴性130例;TCT+HPV+P16检测的灵敏度、阳性预测值高于TCT+HPV检测、P16检测(P<0.05)。结论TCT联合HPV、P16蛋白检测在宫颈癌筛查中的价值较高,能提升灵敏度、阳性预测值。

X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1通过自噬途径调控Caspase 1介导的胃肠道间质瘤细胞焦亡

目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR和Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和GIST细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1重组质粒染进GIST-882细胞,以构建高表达XAF1的GIST-882细胞。GIST-882细胞分为对照组、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与Beclin1蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1及其活化形式cleaved-Caspase-1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平。结果:与RGM-1细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1组、对照组(P<0.05)。与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05)。结论:XAF1在GIST细胞中表达下降,提高XAF1表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用。