糖尿病肾病患者蛋白氧化损伤的研究

目的检测糖尿病肾病不同阶段患者血清晚期氧化蛋白产物水平及蛋白羰基含量,评价蛋白氧化损伤程度。方法根据24小时尿白蛋白定量将糖尿病患者分为单纯糖尿病组(DM组)、糖尿病早期肾病组(DN1组)、糖尿病肾病组(DN2组),并设健康对照组(NC组),检测各组血清晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation prote inproducts,AOPPs)、蛋白质羰基含量(prote in carbonyl,PCO)水平。结果DM组血AOPPs、PCO较NC组明显升高,DN组患者血AOPPs、PCO较DM组明显升高,且随着肾病的进展AOPPs、PCO逐渐升高,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病肾病患者蛋白氧化损伤较单纯糖尿病患者明显加重,而且随着糖尿病肾病的进展,蛋白氧化损伤进一步加重,蛋白氧化损伤产物积累增多。

沙芦内含物PAAC对干旱胁迫下玉米幼苗叶片光合及蛋白氧化损伤的保护作用

采用沙培试验,培养期间用沙丘芦苇特有的多氨基芳香族化合物PAAC水溶液对培养的两种不同基因型玉米幼苗叶片进行喷施处理,研究幼苗叶片在正常供水和干旱胁迫下的相对含水量、光合作用、叶绿素荧光等参数的变化趋势。确定这些生理指标在评价作物抗旱性方面的作用,并与甜菜碱溶液喷施处理的作物参比,研究该内含物对植物蛋白氧化损伤的影响。结果表明:PAAC溶液能够明显地降低干旱下植物叶片蛋白质中羰基含量的上升,即该内含物能够有效地减弱干旱胁迫下植物蛋白氧化损伤程度,RWC相对较高,说明PAAC一定程度上降低水分的散失。当植物受到中度干旱胁迫时,PAAC显著地减缓玉米叶片光合速率的下降,同时Fv/Fm、qP、ETR等叶绿素荧光参数数值也明显高于同期的对照,表明PAAC具有保护类囊体膜上PSⅡ的光合学活性的作用,一定程度上增强了植物的抗旱能力。

甲醛吸入致小鼠蛋白质氧化损伤作用的研究

为了探讨在气态甲醛中暴露后小鼠的脑、心和肝组织蛋白质的氧化损伤程度及其发生机制,用不同剂量的气态甲醛对小鼠进行连续动态染毒处理72h ,用2 ,4-二硝基苯肼比色法测定小鼠脑、心和肝组织蛋白质的羰基含量,用以判断蛋白质的氧化损伤程度.结果显示:吸入0. 68mg·m- 3甲醛后,小鼠的脑、心和肝蛋白质的羰基含量下降(P <0 0 1,P <0 . 0 1,P <0. 0 5 ) ;吸入3 0mg·m- 3甲醛后,小鼠的心和肝的蛋白质羰基含量均显著升高(P <0 . 0 1) ,而脑的蛋白质羰基含量与对照组相比无显著差异(P >0 . 0 5 ) .以上结果表明,小鼠蛋白质的氧化损伤与气态甲醛的浓度有关,气态甲醛在较低浓度时,不引起小鼠蛋白质的氧化损伤,而在中等浓度时对小鼠心和肝的蛋白质氧化损伤作用显著,而对脑的蛋白质没有明显损伤作用.

蛋白质羰基含量与蛋白质氧化损伤

本文讨论了蛋白质羰基含量与蛋白质氧化损伤的关系及其在抗氧化领域中的应用,以便为进一步完善抗氧化保健食品功能检测方法提供理论依据。

SO_2致小鼠肝蛋白质氧化损伤和DNA-蛋白质交联作用

探讨了SO2对小鼠肝组织蛋白质的氧化损伤作用及其分子机制.结果表明,SO2可致雌、雄小鼠肝蛋白质羰基(PCO)含量升高,且呈浓度-效应关系.雌性小鼠肝PCO含量升高较雄性小鼠明显.SO2可致雌、雄小鼠肝细胞DNA-蛋白质交联(DPC)升高,且呈现浓度-效应关系,但这种升高仅在SO2浓度为28,56mg/m3时才具有显著意义.雌性小鼠肝细胞DPC升高较雄性小鼠明显.其分子机制可能是SO2吸入后,导致机体产生·OH和O2-·或直接抑制机体抗氧化系统酶的活性,使机体中过量的自由基堆积,继而对蛋白质和DNA产生损伤.

硝基苯灌胃致小鼠蛋白质氧化损伤作用的研究

为了探讨硝基苯对小鼠多器官的蛋白质氧化损伤程度,采用不同剂量的硝基苯对小鼠进行灌胃染毒(每天1次,共30 d),用2,4二-硝基苯肼比色法测定小鼠组织蛋白质羰基含量,用以判断蛋白质的损伤程度.结果显示,各组织空白对照和油对照组间差异均不显著(p>0.05),随着染毒剂量的增加,肝脏、肾脏、脾脏和心脏的蛋白质羰基含量呈上升趋势,脑组织只在高剂量组表现明显升高趋势;低剂量组与油对照组相比,只有肝脏蛋白质羰基含量显著性升高(p<0.05);中、高剂量组与油对照组相比,各组织蛋白质羰基含量显著性升高(p<0.05).以上结果表明,低剂量硝基苯可以对细胞蛋白质产生氧化损伤作用,并且随着染毒剂量的增加,小鼠各组织蛋白质羰基含量呈上升趋势,蛋白质氧化损伤程度加重.

Cu^(2+)对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)肝胰腺的蛋白质氧化损伤效应

克氏原螯虾(Procambarus clarkii)是一种潜在的水质环境污染的指示生物,为研究水体中不同浓度的重金属Cu2+对其肝胰腺组织的蛋白质氧化损伤作用,在测得Cu2+致克氏原螯虾96 hLC50为30 mg·L-1后,将螯虾分别暴露于0、0.5、1.0、3.0、5.0、10.0 mg·L-1的Cu2+溶液中,并在暴露24、48、72、96 h后测定各处理组肝胰腺组织的活性氧自由基(ROS)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、蛋白质羰基(PCO)含量以及DNA-蛋白质交联(DPC)系数。结果表明,在暴露24h时,随着Cu2+浓度的升高,ROS、T-AOC和GSH-PX水平的变化规律相似,均为先上升后下降,PCO含量和DPC系数随暴露浓度的升高而增加;在暴露48、72、96 h后,ROS、T-AOC、PCO水平和DPC系数均表现为先升后降的趋势,GSH-PX活性在染毒96 h后,随着浓度的升高而下降。PCO含量的变化具有一定的剂量-效应关系。结果提示,肝胰腺的蛋白质氧化损伤可能是重金属Cu2+致克氏原螯虾毒性效应的主要机制之一。

二氧化硫衍生物对小鼠心、肝、肺蛋白质的氧化损伤作用

研究了二氧化硫(SO2)衍生物——亚硫酸钠和亚硫酸氢钠混合物(分子比为3∶1),对小鼠心、肝、肺中蛋白质的氧化损伤作用,探讨其分子作用机制.连续5d对动物腹腔注射SO2衍生物,每天注射剂量为0、0.025、0.100、0.400g·kg-1.用2,4-二硝基苯肼比色法测定不同器官组织中蛋白质羰基含量.结果表明,SO2衍生物染毒剂量为0.025、0.100和0.400g·kg-1时,小鼠心、肝、肺蛋白质羰基含量染毒组与对照组相比均呈现不同程度的增加,不同器官羰基含量增量大小的次序为:肝>肺>心;其染毒剂量与心、肝、肺蛋白质羰基含量之间存在明显的剂量效应关系(p<0.05),线性拟合确定系数分别为0.894、0.893和0.903.由此认为,SO2衍生物可引起小鼠心、肝、肺组织蛋白质的氧化损伤,以及不同组织器官的蛋白质氧化损伤程度不同.

锰致鸡肾脏蛋白质氧化损伤作用的研究

为探讨锰致鸡肾脏组织蛋白质的氧化损伤作用及其分子机制,分别在日粮中添加500、800、1700 mg/kg MnCl2染毒处理30、60、90 d,建立鸡亚慢性锰中毒模型。采用2,4-二硝基苯肼比色法测定鸡肾脏组织蛋白质的羰基含量,用以判断蛋白质的氧化损伤程度。结果表明,与对照组相比,各染毒组肾脏组织中的蛋白质羰基含量增大,且呈一定的时间-剂量效应。因此,锰能使鸡肾脏组织蛋白质羰基含量增加,从而诱导机体氧化损伤。

早期糖尿病大鼠视网膜中神经型一氧化氮合酶的表达改变在蛋白质氧化损伤中的作用

目的:研究糖尿病是否会改变视网膜中神经型一氧化氮合酶(neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)的表达,以及其表达的改变在蛋白质氧化损伤中的作用。方法:Sprague-Dawley(SD)大鼠,分成对照组及2组实验组,每组5只。实验组腹腔注射链佐星(streptozotocin,STZ)(65mg/kg)制备糖尿病大鼠动物模型。分别在造模成功后2及20周,研究大鼠视网膜内源性nNOS和蛋白质损伤产物3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,NT)的表达及其改变。NT用免疫组化法和计算机图像处理检测,nNOS的表达采用免疫组化和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测。结果:对照组大鼠视网膜内无NT的免疫反应,糖尿病大鼠视网膜神经节细胞层、内核层和外核层均有NT的免疫反应,计算机图像处理显示,糖尿病20周大鼠的视网膜内NT阳性细胞数显著高于2周的糖尿病大鼠。RT-PCR结果显示,糖尿病大鼠视网膜的nNOS的mRNA表达低于对照大鼠,免疫组化结果也显示糖尿病大鼠视网膜的nNOS阳性细胞数少于对照组。结论:早期糖尿病大鼠视网膜内3-硝基酪氨酸的含量升高。早期糖尿病视网膜内,降低的nNOS的mRNA和酶的表达显示,nNOS产生的一氧化氮(nitrogenmonoxide,NO)可能是糖尿病视网膜内NT的限制性因素。这些结果同时提示。

镉对瓯江彩鲤脏器组织蛋白质的氧化损伤作用

瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var color)是浙江省大力推广的主要稻田养鱼鱼种,重金属污染对其生态毒理效应研究具有重要意义。针对镉胁迫瓯江彩鲤蛋白质氧化损伤效应,采用静态置换法,研究了0.412～2.059mg·L-1浓度范围内的镉对瓯江彩鲤鳃、脑和肝脏组织蛋白质的氧化损伤作用。结果表明,瓯江彩鲤鳃、脑和肝组织蛋白质羰基(PCO)含量随着镉暴露浓度的增加而升高,且均表现出明显的浓度-效应关系,线性拟和确定系数分别为0.9660,0.9630和0.9723;在0.686～2.059mg·L-1浓度组,各脏器组织PCO含量均明显高于对照组(p<0.05或p<0.01)。在胁迫剂量为0.686mg·L-1不同暴露时间条件下,鳃、脑和肝组织蛋白质羰基含量随暴露时间的延长而升高,3种组织中PCO含量在暴露7d后均显著高于对照组(p<0.05)。3种组织蛋白质羰基含量变化对镉暴露敏感性大小的次序为:肝>鳃>脑。结果显示,镉可引起细胞蛋白质产生氧化损伤,镉对不同组织器官的蛋白质氧化损伤程度不同;PCO可以做为评价重金属污染对鱼体生态毒效应的有效生物标志物。

SO_2衍生物对小鼠脾、胃组织蛋白质的氧化损伤

用腹腔注射的方法对实验小鼠进行SO2衍生物(亚硫酸钠和亚硫酸氢钠,分子比为3:1)染毒,染毒剂量分别为0,0.025,0.100,0.400g/(kg·d),共染毒5d.研究了SO2衍生物对小鼠脾、胃蛋白质的氧化损伤作用并探讨其分子作用机制.结果表明,经SO2衍生物处理,可以使小鼠脾、胃蛋白质的羰基含量增大,且染毒剂量与蛋白质的羰基含量之间呈现直线相关关系,相关系数分别为0.899和0.855(P=0.05).蛋白质羰基含量增大表现为脾>胃.说明SO2衍生物可使小鼠脾、胃组织蛋白质产生氧化损伤,氧化损伤的程度大小因组织而异.

微囊藻毒素-LR致小鼠蛋白质氧化损伤的作用

目的:探讨微囊藻毒素-LR对小鼠肝、肾和睾丸组织蛋白质的氧化损伤程度。方法:用3.0、6.0和12.0μg/kg3种不同浓度的微囊藻毒素-LR对小鼠进行腹腔注射染毒(n=5),染毒时间为7d,每天1次,并设阴性对照组。用2,4-二硝基苯肼比色法测定3种组织的蛋白质羰基含量。结果:随着微囊藻毒素-LR剂量的升高,小鼠肝、肾和睾丸的蛋白质羰基含量升高(F分别为44.631、21.975和23.962,P均<0.001)。3.0μg/kg染毒组肝、肾蛋白质羰基含量[(3.72±0.23)和(3.99±0.48)mmol/kg]高于阴性对照组[(2.90±0.22)和(3.27±0.23)mmol/kg](P均<0.05)。3.0μg/kg染毒组睾丸蛋白质羰基含量[(1.91±0.25)mmol/kg]与阴性对照组[(1.69±0.27)mmol/kg]相比,差异无统计学意义(P>0.05)。6.0μg/kg染毒组肝、肾和睾丸蛋白质羰基含量[(4.55±0.45)、(4.44±0.53)和(2.53±0.24)mmol/kg]和12.0μg/kg染毒组肝、肾和睾丸蛋白质羰基含量[(5.62±0.55)、(5.67±0.60)和(3.15±0.41)mmol/kg]均高于阴性对照组(P均<0.01)。结论:微囊藻毒素-LR对小鼠肝、肾和睾丸组织的蛋白质有氧化损伤作用。

单壁碳纳米管致小鼠肝脏组织蛋白质氧化损伤的研究

目的研究单壁碳纳米材料对小鼠肝组织蛋白质的氧化损伤作用。方法用不同剂量的单壁碳纳米管悬浮液(0.1,0.2,0.4 mg/ml)对小鼠进行腹腔注射一次性染毒,7 d后用2,4-二硝基苯肼比色法测定小鼠肝组织蛋白质的羰基含量,以判断蛋白质的氧化损伤程度。结果注入0.4 mg/ml单壁碳纳米管悬浮液后,小鼠肝的蛋白质羰基较对照组含量呈显著升高(P<0.05),而在低浓度(0.1 mg/ml)和中浓度(0.2 mg/ml)无显著差异(P>0.05)。结论单壁碳纳米管在高浓度(0.4 mg/ml)时,能引起小白鼠肝的蛋白质氧化损伤。

山楂不同溶剂提取物的抗氧化活性及对DNA和蛋白质氧化损伤的保护作用

研究山楂甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚等不同极性溶剂提取物的总多酚、总黄酮含量及其成分组成,并分析比较不同提取物的体外抗氧化活性及其对DNA和蛋白质氧化损伤的保护效果。结果表明,山楂的不同溶剂提取物中总多酚、总黄酮含量及其生物活性不同。其中,甲醇提取物中总多酚和总黄酮含量均最高,清除DPPH自由基、ABTS自由基能力和铁还原能力最强,对蛋白质和DNA氧化损伤的保护作用亦优于其他提取物。山楂甲醇提取物主要活性成分为表儿茶素、原花青素B2、绿原酸和槲皮素。山楂提取物的总多酚、总黄酮含量与其抗氧化活性、DNA和蛋白质氧化损伤的保护效果均具有较高的相关性。

氧化型低密度脂蛋白经血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径诱导血管内皮细胞损伤

探讨氧化型低密度脂蛋白致血管内皮细胞损伤的作用 ,并从血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的途径探讨损伤作用的机制。用1 2 5I标记的氧化型低密度脂蛋白进行放射性配基结合实验及配基竞争性抑制实验检测培养的人脐静脉内皮细胞中存在的特异性氧化型低密度脂蛋白受体 ,2 ,4 二硝基笨肼法测定乳酸脱氢酶活性 ,台盼兰染色、相差显微镜下观察细胞的形态学变化并计数细胞的存活率。结果发现 ,人脐静脉内皮细胞膜上存在与氧化型低密度脂蛋白高亲和力的结合位点 ,Scatchard分析Kd为 38.4± 18.8mg L、Bmax为 181.5± 5 5 .5ng 10 6 cells。氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞作用 2 4h ,随着氧化型低密度脂蛋白剂量的增加 ,不仅显著增加人脐静脉内皮细胞释放乳酸脱氢酶的量 ,而且使人脐静脉内皮细胞的存活率下降 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1受体阻滞剂聚肌苷酸和爱兰苔胶可以阻断氧化型低密度脂蛋白的上述损伤作用。结果提示 ,血管内皮细胞表达氧化型低密度脂蛋白受体血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1,氧化型低密度脂蛋白诱导对血管内皮细胞的损伤作用可能是通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的受体途径。

干旱及复水对小麦幼苗蛋白质损伤的影响

研究间断干旱和持续干旱及干旱后复水对小麦幼苗根长、叶长,含水量、水势和羰基含量的影响。结果表明:2种干旱方式均使小麦幼苗生长受到抑制,使小麦根、叶含水量、水势下降,羰基含量上升。复水后小麦幼苗根、叶含水量、水势、羰基含量均有不同程度的恢复,水势可以恢复到处理前和对照的水平,含水量和羰基含量不能恢复到处理前和对照的水平。持续干旱处理对小麦生长(根、叶含水量,水势)的影响比间断干旱处理大,且持续时间更长;间断干旱处理对小麦蛋白质损伤的影响比持续干旱处理更严重。2种干旱方式对小麦幼苗根的影响均比叶大。

甲醛吸入致小鼠脑和肾组织的氧化损伤作用研究

目的研究小鼠吸入气态甲醛后,甲醛对小鼠的脑、肾组织蛋白造成氧化损伤和脂质的过氧化及其发生机制。方法用不同剂量的气态甲醛对小鼠进行连续动态染毒处理72 h,用2,4-二硝基苯肼比色法测定小鼠脑、肾组织蛋白质的羰基含量,以判断蛋白质的氧化损伤程度;用M DA(丙二醛)试剂盒测定组织中M DA含量,来判断脂质的过氧化程度。结果只有吸入3.0 m g/m3的气态甲醛时,才会对脑、肾组织中的蛋白质造成明显的氧化损伤;而在0.5 m g/m3时,脑组织中脂质的过氧化比肾组织中显著。结论0.5 m g/m3的气态甲醛不造成蛋白质氧化损伤,而对脑组织中脂质的过氧化作用却很显著,可见0.5 m g/m3甲醛对生物体存在着直接的神经毒性;3.0 m g/m3的气态甲醛对脑、肾组织中的蛋白质和脂质会造成明显的氧化损伤,且肾组织比脑组织敏感。

精浆生物大分子氧化损伤与精液参数的相关性研究

目的:探讨精浆中生物大分子氧化损伤与精液参数的相关性。方法:收集96名因不孕不育就诊的男性为研究对象,经过培训的调查员使用结构式调查表对就诊男性进行面对面询问调查。手淫法采集精液样本,用计算机辅助精子分析系统进行精液常规分析。采用酶联免疫吸附试验检测精浆中的羰基衍生物(PC)浓度及8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)浓度以反映蛋白质氧化损伤及脂质氧化损伤。根据精子浓度、前向运动精子率和畸形精子率是否正常,将研究对象分为正常组和异常组,研究精液常规指标与氧化损伤指标的关系。结果:异常组8-iso-PGF2α水平高于正常组(P<0.05),PC水平差异两组间无统计学意义(P>0.05)。前向运动精子率及畸形精子率正常组和异常组间8-iso-PGF2α和PC水平差异均无统计学意义。Pearson相关分析显示,8-iso-PGF2α与精子浓度负相关(r=-0.254,P=0.018),与其他精液参数无统计学相关性;PC水平与各精液参数无统计学相关性。多重线性回归分析显示,8-iso-PGF2α水平每增加1ng/ml,精子浓度平均减少7×10~4/ml。结论:精子浓度低可能与脂质氧化损伤有关。

纤维素酶水解处理提高燕麦全粉中总多酚含量与抗氧化活性

采用Folin-酚法和高效液相色谱法考察了纤维素酶水解处理对燕麦粉中总多酚及多酚组分含量的影响,并利用2,2’-联氮双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS)自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力、铁离子还原能力(ferric reducing antioxidant power,FRAP)和蛋白损伤修复等方法测定酶解前后提取液的体外抗氧化活性。结果表明:酶解处理以后可显著增加燕麦粉中总多酚含量,尤其是阿魏酸含量提高了11~24倍;酶解处理后燕麦粉多酚提取物的ABTS^+·、DPPH自由基清除能力和FRAP值等体外抗氧化活性和蛋白氧化损伤修复能力得到显著增强。总体而言,纤维素酶水解处理能够有效提高燕麦粉中总多酚含量及其功能活性,主要原因可能是阿魏酸等酚酸物质含量的提高。