蛋白激酶C抑制药enzastaurin对吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞株生长的影响

目的：观察新型靶向制剂enzastaurin单独或联合吉非替尼对耐药人非小细胞肺癌细胞株的影响,设计合理的治疗药物组合。方法：CCK8法检测细胞增殖,Chou-Talalay联用指数法判定联合用药效果,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：单药吉非替尼及enzastaurin作用NCI-H460耐药肺癌细胞72 h的半数抑制浓度（IC50）分别为6.99μmol·L-1（95%CI 3.55~13.79μmol·L-1）,7.25μmol·L-1（95%CI 4.77~1.02μmol·L-1）。两药联合应用对肺癌细胞的抑制作用增强（P 〈0.05）,同时给药组抑制效果更显著（P〈0.01）。同时给药组、序贯给药组（先用吉非替尼）和序贯给药组（先用enzastaurin）吉非替尼对H460细胞的IC50值分别为0.006μmol·L-1（95%CI 0.002~0.020μmol·L-1）,0.02μmol·L-1（95%CI 0.011~0.037μmol·L-1）,0.085μmol·L-1（95%CI 0.042~0.170μmol·L-1）。联合指数法显示在吉非替尼浓度0.05μmol·L-1以上时,同时给药组联合指数均〈1。细胞周期分布实验结果显示同时给药组可显著提高G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,阻滞细胞于G1期。结论：蛋白激酶C抑制药enzastaurin与EGFR抑制药吉非替尼联用具有较好的协同作用,两药联合应用可能是出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌后续治疗的一个新选择。

十字孢碱对人胆管癌QBC-939细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)抑制药十字孢碱(STS)对人胆管癌QBC-939细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用CCK-8法检测STS对QBC-939细胞增殖的影响;透射电子显微镜观察STS对QBC-939细胞超微结构的影响;流式细胞术检测STS对QBC-939细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白质印迹法检测STS对QBC-939细胞周期蛋白cyclin B1、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cdk1)和磷酸化周期蛋白依赖性激酶(p-Cdk1)表达的影响。结果 STS能显著抑制QBC-939细胞的增殖(P<0.05),抑制作用呈浓度依赖性,对QBC-939细胞的半数抑制浓度(IC50)24 h为334 nmol·L-1,48 h为118 nmol·L-1。透射电镜观察发现,STS能诱导QBC-939细胞出现典型的凋亡小体。Annexin V-FITC/PI双标法检测0,12,24和48 h凋亡率分别为(10.16±4.52)%,(22.35±2.19)%,(34.27±2.30)%和(59.70±5.97)%。流式细胞术检测发现,与对照组相比,STS可显著诱导QBC-939细胞凋亡率增加(P<0.05),并引起G0/G1期细胞比例减少,而G2/M期细胞比例增加(P<0.05)。蛋白质印迹法检测发现,经STS处理后的QBC-939细胞cyclin B1和Cdk1蛋白表达明显降低(P<0.05),而p-Cdk1蛋白表达则明显增加(P<0.05)。结论 STS可显著抑制人胆管癌QBC-939细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期于G2/M期,进而抑制QBC-939细胞生长并促进细胞凋亡。

IGF-1R抑制剂联用可增强人非小细胞肺癌PC9/G细胞对吉非替尼的敏感性

目的:观察单用表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)的酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼 (ge? tinib) 或联合胰岛素生长因子-1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)的酪氨酸激酶抑制剂AG1024作用于人非小细胞肺癌耐药株PC9/G细胞后,该细胞对吉非替尼耐药性的影响,并探讨IGF-1R与肿瘤细胞耐药的相关机制。方法:用吉非替尼和AG1024单独或联合作用于PC9/G细胞后,采用MTT法分别检测各组细胞的增殖情况,并利用中效原理判断两药联用的效果;FCM法检测各组细胞的凋亡情况;Western印迹法检测各组细胞的磷酸化EGFR(phosphorylated EGFR, p-EGFR)、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)的表达水平。结果:吉非替尼和AG1024单独作用于PC9/G细胞后,均出现不同程度的细胞增殖抑制作用和细胞凋亡促进作用;而吉非替尼和AG1024联合作用,能更显著地抑制细胞增殖,且凋亡细胞显著增加(P<0.05)。 Western印迹法检测发现,联合用药组的p-EGFR、p-Akt和p-ERK蛋白表达量明显减少。结论:IGF-1R抑制剂AG1024和EGFR抑制剂吉非替尼联用具有较好的协同作用,可能通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡,提高耐药细胞对吉非替尼的敏感性。

1-磷酸鞘氨醇信号激活对乳腺癌BT549细胞增殖的影响

目的研究1-磷酸鞘氨醇(S1P)信号激活对乳腺癌BT549细胞增殖的影响。方法将细胞分为对照组和实验组。实验组用0.1、1.0和10.0μmol·L^(-1)S1P受体激动药SEW2871处理乳腺癌细胞72 h;对照组用含0.1%胎牛血清培养基培养。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况。建立乳腺癌BT549细胞过表达S1P受体的细胞模型,将转染的细胞分为空白质粒组(LUC)、野生型S1P受体组(WT)、S1P受体磷酸化位点突变组(MUT)。用MTT法检测细胞增殖情况,并计算细胞增殖率;用克隆集落形成实验检测细胞克隆形成能力。用S1P受体拮抗药W146(10μmol·L^(-1))及蛋白激酶B(AKT)信号通路抑制药MK2206(90 nmol·L^(-1))检测S1P信号在乳腺癌BT549细胞增殖中的作用,用蛋白质印迹法检测磷酸化信号传导与转录激活因子-3(p-STAT3)蛋白、原癌基因c-Myc蛋白的表达情况。结果对照组和0.1、1.0和10.0μmol·L^(-1)实验组的细胞增殖率分别为1.00±0.03、1.13±0.06、1.06±0.10和1.07±0.03,SEW2871在0.1μmol·L^(-1)时可促进细胞增殖(P<0.05)。过表达S1P受体后,WT组、MUT组与LUC组相比,细胞增殖率和克隆集落形成数量均明显增加(均P<0.05)。用W146处理后,LUC组、MUT组、WT组的细胞相对增殖率分别为1.25±0.12、1.31±0.03和1.43±0.14;用MK2206处理后LUC组、MUT组、WT组的细胞相对增殖率分别为0.87±0.15、0.77±0.03和0.88±0.02;WT组、MUT组与相应DSMO组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.01)。用W146处理后,LUC组、MUT组、WT组的细胞克隆形成数量分别为(65.65±5.12),(141.48±5.63)和(93.64±5.14)个,WT组、MUT组与相应DSMO组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。MK2206处理后,LUC组、MUT组、WT组的p-STAT3蛋白相对表达水平分别为0.67±0.04、0.69±0.08和0.81±0.06,原癌基因c-Myc蛋白相对表达水平分别为1.69±0.03、0.70±0.10和0.67±0.07,WT组、MUT组的上述指标与DMSO组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论S1P信号激活可促进乳腺癌BT549细胞增殖,其机制可能与AKT及STAT3信号通路有关。