牛精子蛋白激酶C抑制剂逆转KB/VCR的作用及其机理

目的 :研究牛精子蛋白激酶C抑制剂 (PKCI)对肿瘤细胞多药耐药性的逆转作用及机理。方法 :选用KB细胞及其耐长春新碱的耐药株 (KB VCR)测定其蛋白激酶C活性及PKCI的影响 ,用MTT法测药敏 ,用流式细胞仪测定细胞对罗丹明 1 2 3的蓄积及外排。结果 :耐药细胞细胞膜的蛋白激酶C活性是亲本细胞的 2 9倍 ,耐药性是亲本细胞的 1 72倍。经PKCI作用后 ,罗丹明 1 2 3的蓄积量增加了 6 8倍 ,外排明显延缓 ,外排后潴留增加了 4 3倍 ,耐药性被逆转了 1 0倍。PKCI对亲本株的蛋白激酶C活性和耐药性影响不大。结论 :PKCI可明显地逆转耐药细胞的多药耐药性 。

p38MAPK参与胰蛋白酶诱导的食管上皮细胞炎症

目的 研究p38 MAPK在胰蛋白酶（trypsin）诱导食管黏膜上皮细胞炎症反应中的机制.方法 原代培养食管黏膜上皮细胞,使用胰蛋白酶进行刺激,观察p38 MAPK磷酸化程度;给予p38 MAPK抑制剂SB203580（1、10 μmol/L）进行干预治疗,观察炎症相关指标的变化.结果 胰蛋白酶刺激剂量依赖地增加了p38 MAPK磷酸化,提示胰蛋白酶激活了食管黏膜上皮细胞中的p38MAPK通路;SB203580治疗抑制了胰蛋白酶诱导的炎症因子白介素8（IL-8）、环氧酶2（COX2）、肿瘤坏死因子α（TNFα）的mRNA表达水平,同时抑制了胰蛋白酶诱导的食管上皮细胞中诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表达和细胞中一氧化氮（NO）的生成.结论 p38 MAPK通过调节IL-8、COX2、TNFα、iNOS等炎症相关因子参与了胰蛋白酶诱导的食管黏膜上皮损伤.

PLSCR1在苦参碱逆转APL细胞维甲酸耐药中的意义

目的观察磷脂爬行酶1(phospholipid scramblase 1,PLSCR1)在苦参碱(matrine,MAT)诱导维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)耐药急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞分化的表达,并探讨其与环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)途径的相关性。方法以ATRA敏感的APL细胞系NB4以及ATRA耐药株NB4-R1为研究对象。通过NBT还原实验以及流式细胞仪(CD11 b)检测0.1 mmol/L MAT联合1μmol/L ATRA对两细胞株分化标记的影响;采用Western blot、实时荧光定量PCR技术测定细胞PML/RARα、PLSCR1蛋白及基因表达;同时应用PKA拮抗剂H89联合作用,观察细胞分化抗原及上述蛋白/基因表达的变化。结果 MAT联用ATRA能明显提高NB4-R1细胞NBT及CD1 1 b阳性率,并显著下调PML/RARα融合蛋白/基因的表达(P<0.05,P<0.01)。单用ATRA能使NB4细胞PLSCR1在蛋白及mRNA水平表达均得到明显增强(P<0.01),而在NB4-R1细胞内同样表达上调,但仅蛋白水平差异有统计学意义(P<0.01)。在联用MAT后,两细胞株PLSCR1蛋白表达进一步上升(P<0.01),并且NB4-R1细胞mRNA表达水平差异有有统计学意义(P<0.05)。上述作用均能被10μmol/L H89逆转(P<0.05,P<0.01)。结论 MAT联合ATRA能显著诱导NB4-R1细胞获得再分化,同时抑制PML/RARα融合基因/蛋白的表达,这可能与其上调PLSCR1表达有关。

P13K、P38MAPK及ERK1／2抑制剂对EGF诱导的血管平滑肌细胞迁移的实验研究

目的探讨P13K抑制剂Wortmannin、P38MAPK抑制剂SB202190及ERK1／2抑制剂PD98059对表皮生长因子（EGF）诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响。方法以1％FCS血清孵育为对照，用EGF（10ng／ml）刺激，平行加入PD98059（PD组）、SB202190（SB组）和Wortmannin（WT），划痕损伤实验分析VSMCs迁移情况。结果划痕后24h，EGF组VSMCs迁移较对照组明显（P〈0．01），WT组、SB组及PD纽与EGF组相比都明显抑制VSMCs迁移（P〈0．01），但三个抑制剂组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；划痕后30h，EGF组VSMCs迁移仍较对照组明显（P〈0．01），WT组、SB组及PD组与EGF组相比则明显抑制VSMCs迁移（P〈0．叭），且三个抑制剂组之间差异有统计学意义，其中sB组较WT组和PD组抑制VSMCs的迁移更明显（P〈0．01）。结论EGF诱导VSMCs迁移可能通过P13K、P38MAPK及ERK1／2途径起作用，且P38MAPK途径作用更明显。

冠心病患者血小板PKC、PKCI及红细胞PKC活性变化的研究

目的:研究蛋白激酶C(PKC)在冠心病的发生、发展中的作用。方法:测定87例心绞痛(AP)患者、91例急性心肌梗死(AMI)患者、90例健康对照(HC)者的血小板胞膜、胞浆PKC、胞浆蛋白激酶C抑制剂(PKCI)活性和红细胞膜、胞浆PKC活性。结果:AP组和AMI组血小板胞膜中PKC活性明显高于HC组,而胞浆中PKC活性明显低于HC组;AP组和AMI组血小板胞浆中PKCI活性明显低于HC组;AP组和AMI组红细胞胞膜中PKC活性明显高于HC组,而胞浆中PKC活性低于HC组。结论:PKC可能参与冠心病的发病。