睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡与丝裂素活化蛋白激酶表达的变化(英文)

背景:丝裂素活化蛋白激酶是一组与神经元的存活凋亡有关的蛋白激酶,睡眠剥夺可以引起神经元凋亡。目的:观察睡眠剥夺大鼠丝裂素活化蛋白激酶表达的变化并分析其可能的意义。设计:完全随机分组的前瞻性研究。单位:郑州大学生理学教研室神经研究室。材料:实验于2000-06/2002-10在郑州大学完成。选取成年健康SD大鼠24只。方法:24只大鼠随机分为快眼动睡眠剥夺组、快眼动睡眠剥夺对照组和正常对照组3组,每组8只。睡眠剥夺组从早晨8点始,连续剥夺睡眠72h。正常对照组则置饲养笼中饲养,维持正常的睡眠-觉醒周期。观察其形态学变化。另取24只大鼠分组同上用于丝裂素活化蛋白激酶的检测。采用TUNEL染色法观察睡眠剥夺大鼠的海马神经元形态学变化,观察细胞外信号调节激酶活性的变化和c-Jun氨基末端激酶蛋白表达量的变化。主要观察指标:①观察睡眠剥夺大鼠海马神经元的形态学变化。②观察海马神经元细胞外信号调节激酶和c-Jun氨基末端激酶表达的变化。结果:①海马神经元形态学变化:快眼动睡眠剥夺组大鼠CA1和CA3区可见较多的凋亡阳性细胞,主要分布在海马的锥体细胞层。CA2区仅见极少量凋亡细胞,CA4区偶见凋亡细胞。正常对照组和快眼动睡眠剥夺对照组海马组织切片中未见明显阳性细胞。②细胞外信号调节激酶活性的变化:快眼动睡眠剥夺组明显低于快眼动睡眠剥夺对照组和对照组(1764.00±941.56,6139.67±2863.62,566.700±2763.41,t=3.2111,0.9863,P<0.05)。③c-Jun氨基末端激酶的阳性表达:快眼动睡眠剥夺组明显高于快眼动睡眠剥夺对照组和对照组(87.5%,25%,75%,t=3.4121,P<0.05)。结论:睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元丝裂素活化蛋白激酶活性的变化,可能与神经元的凋亡有关。

膀胱癌中CHK1和RAD51的表达及临床意义

目的探讨细胞周期检测点激酶1(cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1)及DNA双链断裂修复蛋白RAD51在膀胱癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测104例膀胱癌组织和40例癌旁正常膀胱黏膜组织中CHK1及RAD51蛋白表达,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系。结果膀胱癌组织中CHK1及RAD51蛋白表达均高于癌旁正常膀胱黏膜组织(均P<0.05)。CHK1蛋白表达在膀胱癌的病理组织学分级、病理分期方面差异均有统计学意义(均P<0.05),而在性别、年龄、肿瘤直径、单发/多发以及初发/复发方面差异均无统计学意义(均P>0.05)。RAD51蛋白表达在膀胱癌的病理组织学分级方面差异有统计学意义(P<0.05),在病理分期、性别、年龄、肿瘤直径、单发/多发以及初发/复发方面差异均无统计学意义(均P>0.05)。膀胱癌组织中CHK1和RAD51蛋白表达呈正相关(r=0.223,P<0.05)。CHK1蛋白阴性表达组预后好于阳性表达组(P<0.05),而RAD51蛋白表达阴性组和阳性组预后比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CHK1和RAD51蛋白在膀胱癌组织中呈高表达,二者在膀胱癌发生、发展中起重要作用,并与膀胱癌的病理组织学分级及预后密切相关。

FAK在脑胶质瘤55例中的表达及其临床意义

目的:探讨脑胶质瘤细胞中局部黏着斑激酶(FAK)蛋白的表达水平与组织学分级之间的关系。方法:将55例脑胶质瘤标本按照WHO胶质瘤分类标准(2000年)分为4组,其中Ⅰ级13例,Ⅱ级16例,Ⅲ级17例,Ⅳ级9例,同时取11例正常脑组织标本(急性颅脑外伤患者手术内减压切除的脑组织标本)为对照组,分别行HE染色和免疫组织化学染色,观察FAK蛋白表达情况,并比较各组间的差异。结果: FAK蛋白在正常脑组织中均不表达;低级别(Ⅰ+Ⅱ)组的阳性表达率低于高级别(Ⅲ+Ⅳ)组(P<0.05);FAK表达强度与胶质瘤病理级别呈正相关(r=0.424,P<0.05)。结论:测定FAK蛋白在人脑胶质瘤中的表达水平将有助于判断人脑胶质瘤细胞的恶性程度。

PI3 K、Akt 及 E－cadherin 在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义

目的：探讨磷脂酰肌醇－3－激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）及E－钙黏素（E－cadherin）在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学EnVison法检测62例甲状腺乳头状癌、30例结节性甲状腺肿、30例正常甲状腺组织中PI3K、Akt及E－cadherin的表达，并对性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移等因素进行分析。结果62例甲状腺乳头状癌中PI3K、Akt及E－cadherin蛋白的阳性表达率分别为74．2％（46／62）、66．1％（41／62）、16．1％（10／62） ，与结节性甲状腺肿、正常甲状腺组织相比，差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。甲状腺乳头状癌Ⅰ-Ⅱ期中PI3K及Akt蛋白的阳性表达率均低于Ⅲ-Ⅳ期（χ2＝4．976， P ＝0．026；χ2＝6．233， P ＝0．013）；淋巴结转移组中PI3K及Akt蛋白的阳性表达率均高于淋巴结无转移组（χ2＝6．675， P ＝0．010；χ2＝7．511， P ＝0．006）。而E－cadherin蛋白在Ⅰ-Ⅱ期的阳性表达率明显高于Ⅲ-Ⅳ期（χ2＝6．558， P＝0．010）；E－cadherin蛋白在淋巴结无转移组的阳性表达率明显高于伴有淋巴结转移组（χ2＝5．678， P ＝0．017），经Spearman等级相关性分析表明，PI3K与Akt蛋白的阳性表达呈正相关（ r ＝0．423， P＜0．05），PI3K与E－cadherin蛋白的阳性表达呈负相关（ r ＝－0．527， P ＜0．05），Akt与E－cadherin的阳性表达也呈负相关（ r ＝－0．417， P ＜0．05）。结论 PI3K／Akt信号通路参与了甲状腺乳头状癌的发展、侵袭及转移。

葛根素通过JNK信号通路调控自噬对大鼠创伤性脑损伤后的保护作用

目的初步探讨葛根素治疗对大鼠创伤性脑损伤的自噬影响以及分子机制。方法将75只成年sD大鼠按随机数字表法分为假手术组（S组）、创伤性脑损伤组（TBI组）、创伤性脑损伤＋葛根素治疗组（TBI＋Pue组）、创伤性脑损伤＋JNK选择性拮抗剂组（TBI＋SP组）以及创伤性脑损伤＋JNK激动剂＋葛根素组（TBI＋Pue＋An组）。Feeney法构建大鼠创伤性脑损伤模型。分别于模型制备后1、3、7d进行脑水含量测定以及神经功能缺陷评分。模型制备后第7天通过Westernblot法检测自噬标志蛋白LC3B和Beclin1以及JNK的磷酸化水平。结果与S组比较，其余四组在大鼠创伤模型制备后各个时间点的脑水含量与神经功能缺陷评分均明显升高（P〈0．05）；与TBI组比较，TBI＋Pne组和TBI＋sP组在各个时间点的脑水含量明显降低（P〈0．05），在模型制备后的第3天和第7天神经功能缺陷评分明显降低（P〈0．05）；而与TBI＋Pue组比较，TBI＋Pue＋An组脑水含量在模型制备后各个时间点均增加（P〈0．05），神经功能缺陷评分在模型制备后第3天和第7天均增加（P〈0．05）。与S组比较，在模型制备后第7天TBI组LC3II、Beclinl的表达明显增加（P〈0．05）；与TBI组比较，TBI＋Pue组、TBI＋sP组均明显抑制LC3II以及Beclinl的表达（P〈0．05）；而与TBI＋Pue组比较，TBI＋Pue＋An组LC3II和Beclinl表达均明显增加。与S组比较，TBI组P．JNK1／JNK1明显增加（P〈0．05）；与TBI组比较，TBI＋Pue组、TBI＋sP组的P-JNK1／JNK1明显减少（P〈0．05）；与TBI＋Pue组比较，TBI＋Pue＋An组的P-JNK1／JNK1明显增加（P〈0．05）。结论葛根素可通过抑制自噬发挥对创伤性脑损伤的保护作用，JNK通路可能是葛根素调控自噬的分子学机制。

鞘内注射盐酸羟考酮下调脊髓小胶质细胞中c-JNK/CXCL1信号减弱坐骨神经结扎大鼠的神经病理性痛

目的 观察鞘内注射盐酸羟考酮对坐骨神经结扎大鼠痛阈、脊髓小胶质细胞中c-JNK/CXCL1信号的影响.方法 SD大鼠按随机数字表法分为5组（每组40只）：假手术组（Sham组）、坐骨神经结扎组（CCI组）、盐酸羟考酮组[Oxy组,结扎前3d鞘内注射盐酸羟考酮（5μg/30μl）]、米诺环素组[Mino组,结扎前3d鞘内注射米诺环素（5μg/30μl）]及c-JNK抑制剂组[SP组,结扎前3d鞘内注射S1P600125（5μg/30μl）].Sham组仅暴露坐骨神经而不结扎.其余各组均行右侧坐骨神经结扎术,于L5-6鞘内置管并连续注射3d.术后1、3、5、7、14 d分别测定各组大鼠的热痛阈及机械性痛阈;取第4～6节腰段脊髓采用免疫荧光法观察小质细胞的活化状态,Weston blot法检测脊髓组织中小胶质细胞特异性标记物Ⅰ ba-1、p-c-JNK以及CXCL1表达.结果 与Sham组相比,CCI组大鼠术后各观察点热痛阈和机械性痛阈明显降低,损伤后7d脊髓组织中Ⅰ ba-1、p-c-JNK和CXCL1的表达增加（P＜0.05）;与CCI组比较,Oxy组、Mino组和SP组大鼠热痛阈和机械性痛阈值明显提高（P＜0.05）,脊髓组织中p-c-JNK、Ⅰ ba-1和CXCL1的表达降低（P＜0.05）.损伤后7d,免疫荧光染色显示CCI组脊髓背角内可见Ⅰ ba-1阳性的细胞明显增加（P＜0.05）,外形由静息多分支样转变成变形虫样,而Oxy组、Mino组、SP组小胶质细胞多呈树枝样,Ⅰ ba-1阳性细胞数目减少.Oxy组、Mino组和SP组三组比较上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 鞘内注射盐酸羟考酮可以通过下调脊髓小胶质细胞中c-JNK/CXCL1信号减轻坐骨神经结扎引起的神经病理性疼痛程度,为临床治疗神经病理性疼痛提供新的治疗靶点.

SB203580对肠缺血再灌注大鼠p38 MAPK及细胞凋亡的影响

目的:探讨大鼠肠缺血再灌注(IR)时p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞表达的影响。方法:Wistar大鼠30只随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(Ⅰ组)和SB203580组(S组)(n=10),采用肠IR模型检测p38 MAPK、Bcl-2、Bax、TNF-及凋亡指数的水平。结果:Ⅰ组中p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞的表达均显著高于C组(P<0.05),而S组中p38 MAPK、TNF-α及凋亡细胞的表达减少,Bcl-2/Bax比值增高(P<0.05)。结论:SB203580抑制了小肠组织中p38 MAPK通路的活化,从而增加了Bcl-2的表达、减少了Bax和TNF-α的释放,在缓解细胞凋亡的过程中起到了重要的作用。

氟伐他汀对大鼠脑缺血再灌注损伤后caspase-12、CHOP及JNK表达的影响

目的 观察氟伐他汀对大鼠脑缺血再灌注损伤后caspase-12、C/EBP同源蛋白（CHOP）及c-Jun-N-末端激酶（JNK）表达的影响.方法 42只大鼠按随机数字表法分为假手术（sham）组6只,缺血再灌注（I/R）组18只,他汀（Flu）组18只;后两组采用线栓法制模后于脑缺血2h再灌注24 h处理观察.采用免疫组织化学染色、免疫印迹法检测脑组织中caspase-12、CHOP及JNK的表达.结果 大鼠脑组织缺血再灌注24 h caspase-12、CHOP及JNK阳性细胞数及蛋白定量均明显增加（P＜0.01）;他汀组脑缺血再灌注24 h caspase-12、CHOP的阳性细胞数及蛋白定量较缺血再灌注组明显减少（均P ＜0.01）,而JNK表达在两组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 caspase-12、CHOP及JNK在脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中的表达明显增加,表明内质网应激参与了脑缺血再灌注损伤的病理过程;氟伐他汀可抑制caspase-12、CHOP的表达,从而减轻脑缺血再灌注后的内质网应激.

JNK、p-JNK在散发性大肠管状腺瘤癌变过程中的表达及意义

目的探讨JNK、p-JNK在大肠管状腺瘤癌变过程中的作用。方法采用免疫组化检测87例腺瘤伴不同程度异型增生及癌变组织中JNK和p-JNK的表达。结果 JNK、p-JNK在正常黏膜、腺瘤伴异型增生及癌变中的阳性表达率均呈增高趋势,JNK和p-JNK在腺瘤伴异型增生和癌变组中的阳性表达率均高于正常黏膜组;JNK和p-JNK的表达存在一致性。结论随着腺瘤异型增生程度的增高及癌变的出现,JNK呈逐渐增高趋势,JNK在大肠腺瘤癌变过程中可能起一定作用。

腹腔注射外源性胰岛素对小鼠不同器官的影响

目的分析腹腔注射胰岛素在时间与剂量上对小鼠不同器官影响的差异。方法12只C57／B16小鼠被随机分到2组，一组为时间曲线组，一组为剂量曲线组。时间曲线组小鼠分别在腹腔注射人胰岛素5u后第0分钟，第1分钟、第3分钟、第5分钟、第7分钟和第10分钟处死，迅速取出胰腺和肌肉组织，封存在液氮罐，低温（0—4℃）下匀浆，提取蛋白，用Western blot检测胰腺及肌肉组织中AKT以及Erk信号蛋白的磷酸化程度。在剂量曲线组中，小鼠腹腔注射的人胰岛素剂量依次递增，分别为0u／k体重、1u／kg体重、5u／kg体重、5u／kg体重、10u／kg体重、50u／kg体重。胰岛素注射5min后小鼠被处死，迅速取出胰腺和肌肉并封存在液氮罐中，低温（0～4℃）下匀浆，提取蛋白，用Western blot检测胰腺及肌肉组织中AKT以及Erk信号蛋白的磷酸化程度。结果时间曲线组不同时间点中，肌肉细胞中Erk磷酸化水平最高出现在第3分钟时，AKT磷酸化水平最高出现在第5分钟时；胰腺细胞Erk磷酸化水平最高出现在第3分钟时，AKT磷酸化水平最高亦出现在第3分钟时。剂量曲线组中，3u／kg体重人胰岛素刺激对于肌肉和胰腺的Erk以及AKT的磷酸化水平有最大程度的上调，但下调时间不完全一致。结论腹腔注射外源性胰岛素（人胰岛素）对于小鼠不同器官（肌肉及胰腺）Erk和AKT磷酸化水平在时间上和不同胰岛素剂量时有一定的差异。

uPA和P-P38在肝癌组织中的表达及相关性研究

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）和磷酸化P38（P—P38）在原发性肝癌（PHC）中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测34例原发肝癌组织、14例癌旁正常肝组织中uPA和P-P38的表达情况。结果原发性肝癌组织中uPA和P—P38表达定位于细胞浆和细胞核，其表达明显高于癌旁正常肝组织（P〈0．05）。二者的表达与性别、年龄、肿瘤大小等没有相关性（P〉0．05），与淋巴结转移、组织分化及癌栓等有关（P〈0．05），二者之间比较表达呈明显正相关（P〈0．05）。结论二者在原发性肝癌呈高表达。且与原发性肝癌的发生、发展和转移密切相关。

糖尿病大鼠PKB信号传导系统表达的实验研究

目的观察胰岛素,胰高血糖素和磷酸化PKB在实验性糖尿病大鼠胰岛中的表达,探讨PKB信号传导系统对胰岛素表达的影响。方法腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)制造糖尿病模型大鼠,实验中监测血糖,用免疫组织化学染色法观察胰腺组织中胰岛素、胰高血糖素和磷酸化PKB的表达。结果实验组与对照组相比,胰岛素和磷酸化PKB的表达水平均降低(P<0.01),而胰高血糖素的表达水平升高(P<0.01)。结论 PKB信号传导系统能促进胰岛素的分泌,而减少胰高血糖素的分泌。

TGF-β1／SGK1信号通路在糖尿病肾病中的作用

目的通过观测相关因子在糖尿病大鼠模型中的表达，探讨转化生长因子-β1／血清-糖皮质激素诱导型蛋白激酶1（TGF—β1／SGK1）信号通路在糖尿病肾小管间质病变发生中的作用。方法将60只清洁级健康雄性sD大鼠分为正常对照组（n=20）和糖尿病组（n=40），糖尿病组大鼠通过一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ，45mg／kg）诱导糖尿病，饲养至4周和8周每组各处死一半大鼠；检测空腹血糖、尿蛋白等指标，观察肾脏普通病理变化，免疫组化检测SGKl表达，用Real—time—PCR检测SGKl的mRNA水平；Western blotting检测TGF-β1和SGK1等蛋白表达。结果与正常对照组比较，糖尿病组大鼠血糖明显升高，肾脏肥大指数、血尿素氮、血肌酐、24h尿量及24h尿蛋白均明显升高（P〈0．05）；糖尿病组大鼠肾皮质组织中SGKl的转录水平以及TGF—β1和SGK1等因子的蛋白表达均明显高于正常对照组（P〈0．05）。结论TGF—β1／SGKl信号传导通路与糖尿病肾小管间质纤维化病变有密切关系。

P38MAPK信号通路在肾脏缺血再灌注损伤中作用的研究进展

肾脏缺血再灌注损伤（RIRI）是泌尿外科手术中最常见的一种病理过程，可见于肾脏手术、肾移植和体外震波碎石等；也是临床上常见的导致急性肾损伤（AKI）的重要原因。缺血后再灌注所致肾损伤的机制十分复杂，在临床中至今没有发现可防治RIRI的特效药物。已知P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）信号传导途径的激活是导致RIRI的机制之一，笔者就近年以来有关于P38MAPK信号通路在RIRI中作用机制进行综述，可望为临床更好防治RIRI提供新的靶点。

缺血后处理减少肺缺血再灌注损伤中的JNK作用机制

目的观察缺血后处理减少大鼠肺缺血／再灌注损伤中的C-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路机制。方法选取健康的雄性SD大鼠40只，按照随机数字表法分成5组，即A组（对照组）、B组（肺缺血／再灌注组）、c组（肺缺血／再灌注＋肺缺血后处理组）、D组（肺缺血后处理＋溶剂对照组）、E组（肺缺血后处理＋SP600125组），每组8只。观察5组大鼠不同处理后的各指标情况。结果与A组相比较，B组丙二醛（MDA）含量、髓过氧化物酶（MPO）活性明显升高（P均〈0．01），而血清超氧化物歧化酶（SOD）活性显著降低（P均〈0．01），肺组织Bcl．2mRNA、Bcl-2蛋白显著下调，BaxmRNA、Bax蛋白显著上调，同时Bcl-2／Bax比值下降（P均〈0．05），肺泡损伤数定量评价指标（IQA）和凋亡指数（AI）均显著升高（P〈0．05或P〈0．01），光镜电镜下肺组织结构发生明显损伤；与B组比较，c组、D组、E组中的MDA含量、MPO活性明显降低，血清SOD活性升高（P〈0．05或P〈0．01），肺组织Bcl-2mRNA、Bcl-2蛋白表达增加，BaxmRNA、Bax蛋白表达减低，Bcl-2／Bax比值升高（P均〈0．05），IQA和AI均明显降低（P〈0．05或P〈0．01），光镜电镜下肺组织结构损伤情况有所改善；D组与E组相比较，各项指标差异均无统计学意义（P〉0．05）；与c组比较，E组MDA含量、MPO活性明显降低，血清SOD活性升高（P〈0．01），肺组织Bcl-2mRNA、Bcl-2蛋白表达增加，BaxmRNA、Bax蛋白表达减低，Bcl-2／Bax比值升高（P均〈0．05），IQA和AI均明显下降（P〈0．01），光镜电镜下肺组织结构未见明显损伤。结论缺血后处理通过抑制JNK信号通路表达，从而改善肺组织结构破坏，有效减少缺血再灌注肺细胞凋亡。